目的建立一種裸鼴鼠海馬神經(jīng)元的純化培養(yǎng)方法,并初步探討其低氧耐受特性。方法收集妊娠60～65 d裸鼴鼠胚胎海馬組織內(nèi)的細胞,利用含有Neurobasal+2%B27+10μmol/L5-氟尿嘧啶的培養(yǎng)基進行神經(jīng)元純化,海馬神經(jīng)元維持培養(yǎng)基為含有體積分數(shù)2%B27的Neurobasal培養(yǎng)基。體外貼壁培養(yǎng)6～7 d,采用倒置顯微鏡觀察細胞的生長狀態(tài),利用神經(jīng)元特異核蛋白（NeuN）抗體進行鑒定。利用CCK8試劑盒進行海馬神經(jīng)元低氧耐受功能的研究（低氧濃度為8%）。利用QPCR檢測海馬神經(jīng)元中缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）在低氧情況下的表達水平。結(jié)果通過本方法獲得的海馬神經(jīng)元具有典型的神經(jīng)元形態(tài)特征,免疫細胞化學染色顯示純化所得的細胞均呈NeuN陽性,低氧條件下細胞存活率、軸突長度顯著大于常氧情況下的數(shù)值,低氧情況下裸鼴鼠海馬神經(jīng)元中HIF1α顯著高于常氧情況,上述結(jié)果差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論建立了一種簡單實用的體外分離培養(yǎng)裸鼴鼠海馬神經(jīng)元的方法,初步揭示了裸鼴鼠海馬神經(jīng)元低氧耐受特性,并且該特性與裸鼴鼠海馬神經(jīng)元于低氧情況下高表達HIF1α有關(guān)。 

【文章來源】：實驗動物與比較醫(yī)學. 2019年06期

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

光學顯微鏡下的裸鼴鼠海馬神經(jīng)元

低氧處理后海馬神經(jīng)元軸突長度[(56±9)μm]是常氧環(huán)境下[(33±6)μm]的2倍左右(P<0.05)(圖4)。圖3 CCK8檢測裸鼴鼠海馬神經(jīng)元在低氧環(huán)境中存活情況

圖2 裸鼴鼠海馬神經(jīng)元免疫熒光染色低氧情況下裸鼴鼠海馬神經(jīng)元中HIF1α的表達水平(相對數(shù)值1.0)是常氧時(相對數(shù)值3.2±0.5)的3倍以上(P<0.05)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]裸鼴鼠在生物醫(yī)學研究中的應用前景[J]. 崔淑芳.  中國實驗動物學報. 2016(03)
[2]不同氧濃度對裸鼴鼠原代鼠星形膠質(zhì)細胞增殖及生長狀態(tài)的影響[J]. 楊文靜,聶玉梅,肖邦,林麗芳,孫偉,湯球,趙善民,程繼帥,叢薇,蔡麗萍,崔淑芳.  實驗動物科學. 2016(03)
[3]氯化鈷誘導低氧對裸鼴鼠肝星形細胞增殖及凋亡的影響[J]. 肖邦,李莉,余琛琳,趙善民,林麗芳,楊文靜,叢薇,崔淑芳.  實驗動物與比較醫(yī)學. 2016 (01)



本文編號：2952366