目的:構(gòu)建乙腦病毒野毒株（SA14）及疫苗株/野毒株嵌合病毒株（SA14-14-2/SA14）感染性克隆,拯救病毒,比較重組乙腦野毒株和嵌合病毒株對(duì)小鼠的神經(jīng)毒力及神經(jīng)侵襲力,判斷prM/E在乙腦病毒毒力中的作用。方法:采用分子克隆技術(shù)分別構(gòu)建乙腦病毒野毒株（SA14）、嵌合病毒株（SA14-14-2/SA14）感染性克隆（全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒）,并以此為模板,體外轉(zhuǎn)錄得到RNA,將RNA電轉(zhuǎn)染導(dǎo)入BHK21細(xì)胞進(jìn)行病毒拯救,用噬斑形成實(shí)驗(yàn)、間接免疫熒光技術(shù)及測(cè)序鑒定拯救病毒,比較重組乙腦野毒株及嵌合病毒株生長(zhǎng)特點(diǎn),并用重組乙腦野毒株和嵌合病毒株分別腦內(nèi)和皮下接種昆明小鼠,比較重組乙腦野毒株和嵌合病毒株對(duì)小鼠神經(jīng)毒力及神經(jīng)侵襲力。結(jié)果:酶切鑒定表明感染性克隆構(gòu)建成功,用間接免疫熒光技術(shù)檢測(cè)到拯救病毒包膜蛋白表達(dá),噬斑形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):野毒株噬斑直徑最大,其次是嵌合病毒株,疫苗株噬斑直徑最小。測(cè)序結(jié)果表明:拯救病毒與理論相符合。生長(zhǎng)曲線(xiàn)表明嵌合株病毒在48h達(dá)到高峰后迅速下降,而疫苗株病毒和野毒株病毒均在60h達(dá)到高峰,整個(gè)觀(guān)察期,野毒株病毒的滴度高于嵌合病毒和疫苗株病毒滴度。神經(jīng)毒力研究發(fā)現(xiàn):... 

【文章來(lái)源】：川北醫(yī)學(xué)院四川省

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

嵌合病毒JEVSA14-14-2/SA14感染性克隆構(gòu)建示意圖

圖 2 乙腦病毒株 rJEV SA14 感染性克隆構(gòu)建示意圖Fig2. Schematic diagram of the construction of infectious clone of rJEV SA14

圖 3 pACNR-JEV SA14-14-2/SA14(5')酶切鑒定alysis of the plasmid pACNR-JEV SA14-14-2/SA14(5') with restriction enzymeA 分子量標(biāo)準(zhǔn)（ DL2000 ）； 1 ： pACNR-JEV SA14-14-2/SA14(5') ； 2 ： pA

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]接種乙腦減毒活疫苗引起小腦共濟(jì)失調(diào)一例報(bào)告[J]. 周方,俞華,趙德峰.  公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué). 2014(04)
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博士論文
[1]乙腦減毒活疫苗關(guān)鍵功能位點(diǎn)分析及相關(guān)病毒載體應(yīng)用研究[D]. 葉青.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2015
[2]以乙腦病毒SA14-14-2為載體構(gòu)建乙腦/登革2型嵌合病毒的研究[D]. 韋艷.中國(guó)疾病預(yù)防控制中心 2009
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本文編號(hào)：2950811