本文關(guān)鍵詞：鼠抗人B7-H4受體單克隆抗體的研制及其生物學(xué)功能的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：B7-H4(別稱B7S1或B7x),是2003年發(fā)現(xiàn)的B7家族新分子。人的B7-H4基因含有5個(gè)內(nèi)含子和6個(gè)外顯子,編碼區(qū)基因長(zhǎng)度為849個(gè)bp,位于人染色體的1p11.1。作為一種重要的負(fù)性刺激因子,當(dāng)B7-H4分子與相應(yīng)受體結(jié)合后,會(huì)抑制ERK和JNK蛋白激酶活性,抑制IL-2基因轉(zhuǎn)錄,阻斷了PI3K/AKT途徑,從而影響了細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡,抑制一些細(xì)胞因子的分泌和T細(xì)胞的增殖。越來(lái)越多的文獻(xiàn)報(bào)道,B7-H4分子高表達(dá)于多種腫瘤中,如肺癌、腎癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、前列腺癌和食管癌等。另外,在一些腫瘤浸潤(rùn)性巨噬細(xì)胞及腫瘤的血管內(nèi)皮細(xì)胞也檢測(cè)到B7-H4的高量表達(dá),這些研究顯示B7-H4作為一種新的腫瘤標(biāo)志物為研究其在機(jī)體腫瘤免疫逃逸中的機(jī)制和癌癥的治療提供了幫助。本課題組在來(lái)源于人扁桃體的部分淋巴細(xì)胞中檢測(cè)到B7-H4受體的表達(dá),并以此為基礎(chǔ)研制鼠抗人B7-H4受體的單克隆抗體,并運(yùn)用本課題組建立的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株SPCA-1與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)的體系初步研究了單克隆抗體的生物學(xué)功能。鼠抗人B7-H4受體單克隆抗體的研制及其生物學(xué)功能的初步研究【目的】研制鼠抗人B7-H4受體的單克隆抗體并初步研究其生物學(xué)功能【方法】從人體扁桃體組織中獲取淋巴細(xì)胞,并以此為免疫原,免疫5~8周齡的BALB/c小鼠,融合當(dāng)天取小鼠脾臟細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞Ag8融合。一段時(shí)間后,運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)對(duì)雜交瘤上清進(jìn)行初步篩選,以B7-H4-m Fc-FITC為基礎(chǔ),通過(guò)位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)進(jìn)一步篩選,再通過(guò)多次亞克隆技術(shù)獲得能穩(wěn)定分泌抗B7-H4受體單克隆抗體的細(xì)胞株。通過(guò)快速試紙法測(cè)定目標(biāo)單抗的Ig亞型,對(duì)純化后的單抗標(biāo)記生物素后借助Western Blot實(shí)驗(yàn)和ELISA實(shí)驗(yàn)對(duì)單克隆抗體進(jìn)行鑒定。結(jié)合本課題組建立的SPCA-1細(xì)胞與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)的體系初步研究單克隆抗體的功能�！窘Y(jié)果】獲得了一株能穩(wěn)定分泌鼠抗人B7-H4受體的單克隆抗體,命名為7B11。經(jīng)快速試紙法鑒定7B11為Ig G1類,Western Blot結(jié)果顯示7B11不能與人B7-H4受體蛋白特異性結(jié)合,但ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明7B11能特異性識(shí)別B7-H4受體蛋白。將7B11加入到SPCA-1細(xì)胞與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)的體系作用72小時(shí)后,能阻斷SPCA-1細(xì)胞表達(dá)的B7-H4分子對(duì)Jurkat細(xì)胞的作用,使Jurkat細(xì)胞上CD3、CD69的表達(dá)水平及細(xì)胞增殖水平趨近正常�！窘Y(jié)論】成功研制了一株鼠抗人B7-H4受體的單克隆抗體,該單克隆抗體在共培養(yǎng)體系中能與B7-H4受體結(jié)合阻斷了B7-H4分子的負(fù)性調(diào)控作用,為進(jìn)一步研究B7-H4及其受體等腫瘤標(biāo)志物在腫瘤免疫應(yīng)答中的作用提供了幫助。
【關(guān)鍵詞】：B7-H4 B7-H4受體 單克隆抗體 共培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 研究背景9-26
• 參考文獻(xiàn)17-26
• 1 實(shí)驗(yàn)材料、器材與試劑26-31
• 2 實(shí)驗(yàn)方法31-40
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-51
• 4 討論51-52
• 總結(jié)與展望52-53
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 研究生期間發(fā)表的論文56-57
• 縮略詞表57-59
• 致謝59-61

【相似文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：鼠抗人B7-H4受體單克隆抗體的研制及其生物學(xué)功能的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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