目的:以fat-1轉(zhuǎn)基因小鼠為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?研究?jī)?nèi)源性n-3PUFAs的增加,對(duì)小鼠體重、下丘腦炎癥因子表達(dá)及自噬蛋白表達(dá)的影響,并探討n-3PUFAs控制體重的作用機(jī)理。方法:同窩小鼠6周齡時(shí),剪取尾尖提取DNA進(jìn)行普通PCR基因鑒定后,將小鼠分為兩組:fat-1轉(zhuǎn)基因小鼠與野生型小鼠,每組個(gè)10只;測(cè)定14周齡的小鼠體重與體長(zhǎng),比較體重并根據(jù)公式計(jì)算Lee’s指數(shù)。對(duì)小鼠肝臟冰凍切片進(jìn)行油紅O染色,并觀察兩組小鼠肝臟中的脂滴數(shù)量;采用電鏡技術(shù)觀察兩組小鼠下丘腦神經(jīng)元中的自噬小體的數(shù)量,初步觀察兩組小鼠下丘腦自噬強(qiáng)度;對(duì)兩組小鼠的大腦冰凍切片采用免疫熒光技術(shù)將自噬蛋白P62,LC3,ATG7在下丘腦定位;采用western blot技術(shù),對(duì)自噬蛋白P62、LC3、ATG7在下丘腦中的表達(dá)進(jìn)行相對(duì)定量分析,直接比較兩組小鼠下丘腦的自噬強(qiáng)度;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR,對(duì)下丘腦炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β、NF-k B,趨化因子MCP-1、CCL5、CXCL12、CX3CL1,小膠質(zhì)細(xì)胞表面標(biāo)志物TMEM119、星形膠質(zhì)細(xì)胞表面標(biāo)志物GFAP的m RNA進(jìn)行相對(duì)定量分析;同時(shí)采用熒光... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)器材
        1.2 配方及試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.4 樣本
        1.5 常用軟件及數(shù)據(jù)庫(kù)
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 小鼠體重、體長(zhǎng)的測(cè)定
        2.2 fat-1轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定
            2.2.1 DNA提取
            2.2.2 普通PCR反應(yīng)
        2.3 熒光定量PCR
            2.3.1 RNA的提取
            2.3.2 cDNA的合成
            2.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.4 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
            2.4.1 冰凍切片制備
            2.4.2 免疫熒光染色
        2.5 肝臟組織油紅O染色
            2.5.1 肝臟組織冰凍切片制作
            2.5.2 油紅O染色步驟
        2.6 透射電鏡檢查
        2.7 蛋白印跡Westernblotting
            2.7.1 蛋白樣品的制備
            2.7.2 蛋白樣品濃度測(cè)定
            2.7.3 蛋白變性
            2.7.4 Westernblotting
        2.8 ELISA
        2.9 數(shù)據(jù)處理
結(jié)果
    1 基因鑒定結(jié)果
    2 體重與體長(zhǎng)測(cè)量結(jié)果
    3 油紅O對(duì)肝臟冰凍切片染色結(jié)果
    4 下丘腦趨化因子、炎癥因子的相對(duì)表達(dá)量
    5 下丘腦電鏡觀察自噬小體結(jié)果
    6 下丘腦免疫熒光定位自噬蛋白
    7 Westernbloting檢測(cè)P62、ATG7、LC3Ⅱ/Ⅰ結(jié)果分析
    8 外周脂肪組織炎癥因子相對(duì)表達(dá)量
    9 ELISA對(duì)外周脂肪組織炎癥因子的檢測(cè)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
縮略詞表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]與肥胖相關(guān)的慢性炎癥機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 王楠楠,白英龍.  中國(guó)全科醫(yī)學(xué). 2017(12)
[2]自噬和肥胖[J]. 張林,胡茂清.  中國(guó)糖尿病雜志. 2015(04)
[3]肥胖與慢性炎癥[J]. 孫波,李輝,王寧.  生物學(xué)雜志. 2012(02)
[4]Fat-1基因在n-3多不飽和脂肪酸功能研究中的應(yīng)用[J]. 武珅,杜衛(wèi)華,郝海生,王棟,張諾,朱化彬.  中國(guó)生物工程雜志. 2008(08)
[5]肥胖相關(guān)性腎小球病[J]. 楊霽云.  中華兒科雜志. 2002(04)



本文編號(hào)：2931769