間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是一種多能干細(xì)胞,因其來源廣泛,自我更新、增殖能力和多向分化潛能強(qiáng),并且具備免疫調(diào)節(jié)、抗炎和神經(jīng)保護(hù)作用,從而成為臨床細(xì)胞治療中理想的種子細(xì)胞。移植的MSCs需定向遷移到損傷部位才能更好地發(fā)揮療效,但有研究表明只有極少部分移植的MSCs可以到達(dá)病變部位,修復(fù)和治療效果非常有限。因此,研究MSCs的遷移機(jī)制、提高其遷移能力對于提高M(jìn)SCs的有效利用率至關(guān)重要。本文在實(shí)驗(yàn)室前期工作基礎(chǔ)上,研究miR-26b靶向Rho相關(guān)絲氨酸/蘇氨酸激酶（Rho-associated kinase 1,ROCK1）促進(jìn)MSCs遷移的機(jī)制。本研究發(fā)現(xiàn),在MSCs中轉(zhuǎn)染miR-26b mimic上調(diào)miR-26b的表達(dá)能夠顯著降低ROCK1 m RNA水平的表達(dá),而轉(zhuǎn)染miR-26b Inhibitor（miR-26b I）抑制miR-26b后能夠顯著上調(diào)ROCK1 m RNA水平的表達(dá);Western blot檢測發(fā)現(xiàn),高表達(dá)miR-26b后顯著降低ROCK1蛋白水平的表達(dá),而抑制miR-26b則顯著提高ROCK1蛋白水平的表達(dá),表明mi... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
序言
材料和方法
    一、材料
        1.實(shí)驗(yàn)動物
        2.主要儀器設(shè)備
        3.主要試劑
        4.試劑配制
    二、實(shí)驗(yàn)方法
        1.MSCs的分離培養(yǎng)
        2.Trizol法提取總RNA、反轉(zhuǎn)錄成cDNA和實(shí)時定量PCR
        3.Boyden chamber實(shí)驗(yàn)
        4.細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        5.腺病毒的包裝和擴(kuò)增
        6.免疫印跡（Western blot）
        7.細(xì)胞免疫熒光染色
        8.大鼠ROCK1的3’UTR雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)熒光活性檢測
        9.真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        10.統(tǒng)計(jì)分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    一、在MSCs中miR-26b可直接靶向ROCK1
        1.miR-26b能夠下調(diào)MSCs中ROCK1的表達(dá)
        2.ROCK1 3’UTR區(qū)雙熒光素酶報(bào)告基因載體的構(gòu)建
        3.ROCK1是miR-26b的直接靶基因
    二、ROCK1參與miR-26b調(diào)控的MSCs遷移
        1.抑制ROCK1的活性能夠回復(fù)miR-26b Inhibitor對MSCs遷移的抑制作用
        2.高表達(dá)ROCK1減弱miR-26b對MSCs遷移的促進(jìn)作用
    三、miR-26b靶向ROCK1影響Akt信號通路和ROCK1下游分子
        1.miR-26b對Akt信號通路和ROCK1下游分子的影響
        2.同時改變ROCK1和miR-26b對Akt信號通路和ROCK1下游分子的影響
    四、miR-26b對MSCs鋪展面積、極性以及MLC分布的影響
        1.ROCK1參與調(diào)控miR-26b對MSCs面積、周長和極性的影響
        2.高表達(dá)miR-26b后磷酸化肌球蛋白輕鏈在MSCs中分布的變化
討論
參考文獻(xiàn)
結(jié)論
綜述
    參考文獻(xiàn)
碩士期間已發(fā)表及待發(fā)表的論文
本研究所獲基金資助
縮略詞表
致謝



本文編號：2913740