目的:本研究旨在探索miRNA-194-5p能否通過Stra8來調(diào)控精子發(fā)生。通過對出生后第11天的Stra8基因敲除（Stra8-/-）及野生型雄性小鼠睪丸組織進(jìn)行RNA測序分析,篩選Stra8缺失時差異表達(dá)的miRNAs。驗證其中差異表達(dá)的miRNAs與Stra8之間的關(guān)系,并進(jìn)一步探索miRNA-194-5p是如何通過Stra8來影響精原細(xì)胞增殖分化過程的。方法:1、飼養(yǎng)并收集不同周齡的野生型和Stra8-/-小鼠,用HE染色法分析其睪丸組織結(jié)構(gòu)。選取出生后11天的野生型及Stra8-/-小鼠睪丸進(jìn)行RNA-seq檢測,篩選出差異表達(dá)的miRNAs。應(yīng)用實時定量PCR法驗證miRNAs在兩種小鼠睪丸組織中的表達(dá)水平,并檢測它們在小鼠不同組織中的表達(dá)情況。2、構(gòu)建 pGL3-Basic-Stra8 3’UTR 重組質(zhì)粒及 pMSCV-PIG-miR-194-5p/miR-205-3p/miR-3544-3p重組質(zhì)粒。利用雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炋剿魉鼈冎g有無轉(zhuǎn)錄調(diào)控關(guān)系。應(yīng)用TargetScan數(shù)據(jù)庫分析miR-194-5p與Stra8之間的結(jié)合位點(diǎn),并突變其結(jié)合位點(diǎn),再次應(yīng)用雙熒... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２不同周齡小鼠睪丸ＨＥ染色結(jié)果圖??

ｉＲ－１９４－５ｐ?１．６６?１１．１９?２．７５２９５４８９??ｉＲ－２０５－３ｐ?０．２２?１３．１６?５．６３５５３０５７??ｉＲ－３３７－３ｐ?１１．７８?１７６．３５３３３３?４．２１７７８９７９３??ｉＲ－３０ｃ－ｌ－３ｐ?４０８．５５?３６３７．１７３３３３?２．８７４７５１３９??ｉＲ－３５４４－３ｐ?２０１．７６?１１．８?－４．０９９３２８１３１??ｉＲ－ｌａ－３ｐ?２３１２．８４?９６．７８５?－４．５８７８４６８２１ｑＲＴ－ＰＣＲ驗證差異表達(dá)的ｍｉＲＮＡｓ??于實驗室前期工作發(fā)現(xiàn)在出生后第１１天Ｓｔｒａ８野生型及純合子小鼠睪丸中生精明顯統(tǒng)計學(xué)差異，但其數(shù)量上己有變化，而在出生后第１０天兩種類型的小鼠管內(nèi)生精細(xì)胞數(shù)幾乎相等，于是我們后期的驗證選擇了出生后第１０天小鼠睪果發(fā)現(xiàn)?ｍｉＲ－１９４－５ｐ、ｍｉＲ－２０５－３ｐ、ｍｉＲ－３５４４－３ｐ、ｍｉＲ－ｌａ－３ｐ、ｍｉＲ－３３７－３ｐ?在出的小鼠睪丸內(nèi)的表達(dá)趨勢與ＲＮＡ－ｓｅｑ結(jié)果一致（如圖２．２．１所示）。而ｍｉＲ－３達(dá)趨勢與ＲＮＡ－ｓｅｑ趨勢相反。??

?夏靜?ｍｉＲＮＡ－１９４－５ｐ通過Ｓｔｒａ８調(diào)控精子發(fā)生的初步研究?３９??組織中的表達(dá)均較高；ｍｉＲ－３５４４－３ｐ在睪丸中的表達(dá)最高，在肝臟及卵巢中的表達(dá)較高，??而在心臟、腦、脾、肺、腎、肌肉、小腸中表達(dá)極低。ｍｉＲ－ｌａ－３ｐ在睪丸、肌肉、小腸中??的表達(dá)較高，在心臟、肝臟、腎臟中的表達(dá)中等，在腦、脾、肺、卵巢組織中表達(dá)低，??ｍｉＲ－３３７－３ｐ在各組織中的表達(dá)均較高。??ｕ?ｍｉＲ１９４－５ｐ?ｍｔｃｕｍｉｒ１ａ－３ｐ?ｉｎ?ｍｔｃ〇ｍｉｒ３５４４－３ｉｎ?ｍｔｃ??

【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]Stra8在精子發(fā)生中作用機(jī)制的初步研究[D]. 馬海濤.揚(yáng)州大學(xué) 2017



本文編號：2914296