本文關(guān)鍵詞：PPARγ通過對(duì)RUVBL2表達(dá)調(diào)控影響脂聯(lián)素分泌的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：脂聯(lián)素是近來發(fā)現(xiàn)的一種重要的脂肪細(xì)胞因子,在調(diào)節(jié)脂質(zhì)和葡萄糖代謝方面扮演著重要角色。它可刺激脂肪酸氧化、抑制肝糖原異生和增強(qiáng)胰島素敏感性。同時(shí)在慢性炎癥病理調(diào)節(jié)、抗動(dòng)脈粥樣硬化及通過神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)進(jìn)食和體重等功能調(diào)控方面也不斷地有新的發(fā)現(xiàn)。目前,關(guān)于脂聯(lián)素的轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控和翻譯后修飾的報(bào)道較多,但對(duì)RUVBL2調(diào)控脂聯(lián)素分泌的研究未見報(bào)道。本文旨在通過研究囊泡融合相關(guān)蛋白R(shí)UVBL2的轉(zhuǎn)錄調(diào)控來研究脂聯(lián)素分泌的后期調(diào)控過程,以期從囊泡融合調(diào)控的角度來解釋肥胖個(gè)體血液中脂聯(lián)素水平減少的現(xiàn)象。本文主要以前體脂肪細(xì)胞系3T3-L1以及HEK293細(xì)胞系為研究模型。利用實(shí)時(shí)定量PCR、染色質(zhì)免疫共沉淀、細(xì)胞轉(zhuǎn)染等方法探討了PPARγ通過調(diào)控RUVBL2的表達(dá)從而調(diào)控脂聯(lián)素囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)改變脂聯(lián)素胞外分泌的機(jī)制。研究結(jié)果如下:1.通過實(shí)時(shí)定量PCR以及蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測成脂分化前體脂肪細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)PPARγ和RUVBL2在成脂分化過程中時(shí)間表達(dá)順序一致。2.生物信息學(xué)預(yù)測RUVBL2啟動(dòng)子區(qū)的PPRE作用位點(diǎn),利用細(xì)胞共轉(zhuǎn)染、雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)以及染色質(zhì)免疫共沉淀確定PPARγ結(jié)合的具體區(qū)域并促進(jìn)RUVBL2表達(dá)。3.通過基因敲減、抑制劑刺激分析發(fā)現(xiàn)RUVBL2的水平降低可下調(diào)脂聯(lián)素的分泌,而且PPARγ水平的下調(diào)也會(huì)降低胞內(nèi)RUVBL2水平及脂聯(lián)素的分泌。4.利用基因超表達(dá)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),RUVBL2的水平上調(diào)可促進(jìn)脂聯(lián)素的分泌,PPARγ水平上調(diào)也會(huì)增加脂聯(lián)素胞外的分泌。
【關(guān)鍵詞】：脂聯(lián)素 脂肪細(xì)胞 Ruvb樣蛋白2 過氧化物酶體增殖活化受體
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要8-9
• Abstract9-10
• 縮略語表10-11
• 1 前言11-23
• 1.1 脂肪組織及脂肪細(xì)胞分化調(diào)控11-14
• 1.1.1 脂肪組織11
• 1.1.2 脂肪細(xì)胞因子11-12
• 1.1.3 脂肪細(xì)胞分化過程的基因調(diào)控12-14
• 1.1.4 肥胖與代謝綜合癥14
• 1.2 PPARγ 的結(jié)構(gòu)與功能14-16
• 1.2.1 PPARγ 的結(jié)構(gòu)14-15
• 1.2.2 PPARγ 的功能及生物學(xué)特性15-16
• 1.3 脂聯(lián)素的結(jié)構(gòu)與功能16-18
• 1.3.1 脂聯(lián)素的結(jié)構(gòu)16-18
• 1.3.2 脂聯(lián)素的功能18
• 1.4 RUVBL2 蛋白的結(jié)構(gòu)與功能18-21
• 1.4.1 RUVBL2 的結(jié)構(gòu)18-20
• 1.4.2 RUVBL2 的功能及研究進(jìn)展20-21
• 1.5 研究目的與意義21-23
• 2 材料與方法23-36
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料23-24
• 2.1.1 細(xì)胞系23
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)小鼠23
• 2.1.3 載體、菌株及感受態(tài)23
• 2.1.4 主要試劑23-24
• 2.2 主要儀器24-25
• 2.3 分子生物學(xué)軟件及相關(guān)網(wǎng)站25
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法25-36
• 2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染25-27
• 2.4.2 目的片段的擴(kuò)增、純化與載體構(gòu)建27-30
• 2.4.3 RUVBL2 啟動(dòng)子區(qū)域PPARγ 位點(diǎn)的預(yù)測30
• 2.4.4 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測30-31
• 2.4.5 染色質(zhì)免疫共沉淀（Ch IP）31-32
• 2.4.6 實(shí)時(shí)定量PCR32-33
• 2.4.7 RNA的提取33-34
• 2.4.8 反轉(zhuǎn)錄34
• 2.4.9 Western Blotting34-35
• 2.4.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析35-36
• 3 結(jié)果與分析36-50
• 3.1 RUVBL2 的組織表達(dá)譜36
• 3.2 3T3-L1 成脂分化過程中PPARγ 和RUVBL2 的表達(dá)36-38
• 3.2.1 PPARγ 和RUVBL2 的mRNA水平變化36-37
• 3.2.2 3T3-L1 成脂分化過程中PPARγ 和RUVBL2 蛋白表達(dá)變化37-38
• 3.3 PPARγ 對(duì)RUVBL2 啟動(dòng)子的調(diào)控38-44
• 3.3.1 RUVBL2 啟動(dòng)子順式元件的分析及啟動(dòng)子的克隆38-40
• 3.3.2 PPARγ 上調(diào)RUVBL2 啟動(dòng)子活性40
• 3.3.3 PPARγ 對(duì)RUVBL2 突變啟動(dòng)子的影響40-42
• 3.3.4 PPARγ 與RUVBL2 啟動(dòng)子特異性的結(jié)合42-43
• 3.3.5 RUVBL2 啟動(dòng)子上PPRE元件保守位點(diǎn)的分析43-44
• 3.4 RUVBL2 敲減以及 PPARγ 激動(dòng)劑/抑制劑對(duì)脂聯(lián)素分泌的影響44-46
• 3.4.1 RUVBL2 敲減脂聯(lián)素分泌的影響44-45
• 3.4.2 PPARγ 激動(dòng)劑/抑制劑對(duì)脂聯(lián)素分泌的影響45-46
• 3.5 RUVBL2 以及 PPARγ 超表達(dá)對(duì)脂聯(lián)素分泌的影響46-50
• 3.5.1 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染脂聯(lián)素基因HEK293 細(xì)胞的檢測46
• 3.5.2 RUVBL2 超表達(dá)對(duì)脂聯(lián)素分泌的影響46-48
• 3.5.3 PPARγ 超表達(dá)對(duì)脂聯(lián)素分泌的影響48-50
• 4 討論50-52
• 5 結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)52-53
• 5.1 結(jié)論52
• 5.2 創(chuàng)新點(diǎn)52-53
• 參考文獻(xiàn)53-58
• 致謝58

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本文編號(hào)：290832