本文關(guān)鍵詞：SjDLC和SjCB2 DNA疫苗及IFN-γ在日本血吸蟲感染中的保護(hù)性作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建血吸蟲核酸疫苗加IFN-γ聯(lián)合免疫小鼠,探討聯(lián)合疫苗pcDNA3.1(-)/SjDLC+pcDNA3.1(+)SjCB2及IFN-γ在日本血吸蟲感染中的免疫保護(hù)性作用。[方法]利用PCR法,獲取SjDLC,mIFN-γ基因,并構(gòu)建pcDNA3.1(-)/SjDLC,pcDNA 3.1(+)/m IFN-γ重組質(zhì)粒,雙酶切及測序鑒定。將兩種質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至Hela細(xì)胞,Western blot鑒定其表達(dá)。BALB/c小鼠分為7組,分別為:PBS(A組)、pcDNA3.1(+)(B組)、pcDNA3.1(+)/mIFN-γ(C組)、pcDNA3.1(+)/SjCB2(D組)、pcDNA3.1(-)/SjDLC(E組)、pcDNA3.1(+)/SjCB2+pcDNA 3.1(-)/SjDLC(F組)、pcDNA3.1(+)/SjCB2+pcDNA3.1(-)/SjDLC+pcDNA3.1(+)/mIFN-γ(G組)。按照分組用核酸疫苗免疫小鼠,每兩周免疫一次,共三次。末次免疫2周后,PCR法和免疫組化法檢測小鼠肌肉中SjDLC,SjCB2,IFN-γ基因及表達(dá)。同時,對各組小鼠用血吸蟲尾蚴進(jìn)行攻擊感染,分別在感染第0w、2w、4w、6w、8w及10w麻醉處死小鼠,收集血液、脾臟和肝臟組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。HE和Masson染色觀察小鼠肝臟病理變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠肝臟、脾臟Th1和Th2細(xì)胞比例;ELISA檢測IFN-γ、IL-4、IgG、IgE水平。取感染第6w小鼠計算減蟲率、減卵率。[結(jié)果]Western blot顯示SjDLC,IFN-γ能在HeLa細(xì)胞中表達(dá)。核酸疫苗第三次免疫BALB/c小鼠2周后,能從小鼠肌肉組織中擴(kuò)增出SjCB2、SjDLC和mIFN-γ基因及觀察到三個基因的表達(dá)。HE和Masson染色顯示:血吸蟲感染第6w后,蟲卵肉芽腫及纖維化等病變以pbs組(a組)和pcdna3.1(+)組(b組)最為嚴(yán)重,且隨著感染時間的延長病變加重。c、d、e、f、g組病變程度明顯輕于a、b組,g組病變程度最輕。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:血吸蟲感染2w~4w,肝、脾組織中th1細(xì)胞比例均顯著性高于未感染組(0w),p0.05,于感染第4w達(dá)峰值,c、d、e、f、g組顯著性高于a、b組,p0.05,以g組th1比例最高,血吸蟲感染第6w~10w,各組的th1細(xì)胞比例均顯著性下降,但c、d、e、f、g組仍顯著性高于a、b組,p0.05,以g組th1水平最高;血吸感染第6w~10w,各組的th2細(xì)胞比例均顯著性升高,第8w達(dá)峰值;但c、d、e、f、g組th2均顯著性低于a、b組,p0.05,以g組最低。細(xì)胞因子檢測結(jié)果顯示:各組ifn-γ水平與其th1細(xì)胞比例變化相一致;il-4水平與th2比例變化趨勢一致。免疫后各核酸疫苗組igg顯著性高于a、b、c組,p0.05,其中以g組抗體水平最高;尾蚴攻擊感染各組小鼠后,igg抗體在感染第6周達(dá)峰值,與0w組比較,p0.05,各核酸疫苗組的抗體水平顯著性高于a、b、c組,p0.05,其中以g組抗體水平最高。ige水平在核酸疫苗免疫小鼠后無顯著性變化,但在尾蚴攻擊感染后第6周顯著性升高,第8周達(dá)峰值,各核酸疫苗組的ige水平顯著高于a、b、c組,p0.05,以g、f組最高。減蟲率和減卵率計算結(jié)果顯示:各核酸疫苗組顯著性高于a、b、c組,p0.05,其中以g組最高,分別為40.5%、55.7%。[結(jié)論]核酸疫苗免疫balb/c小鼠后能產(chǎn)生一定抗血吸蟲感染作用,以聯(lián)合疫苗加ifn-γ免疫效果最佳。
【關(guān)鍵詞】：DNA疫苗 日本血吸蟲 IFN-γ 聯(lián)合免疫
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 常用的英文縮寫11-15
• 第1章 緒論15-17
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料17-21
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)動物與釘螺17-18
• 2.3 細(xì)胞18
• 2.4 菌種和載體18
• 2.5 主要實(shí)驗(yàn)試劑18-21
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法步驟21-41
• 3.1 SjDLC目的基因克隆和純化21-24
• 3.2 重組真核質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/SjDLC的構(gòu)建24-28
• 3.3 重組真核質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/SjDLC的表達(dá)28-30
• 3.4 小鼠IFN-γ基因克隆30-31
• 3.5 重組真核質(zhì)粒pc DNA3.1(+)/m IFN-γ的構(gòu)建31-32
• 3.6 重組真核質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/m IFN-γ的表達(dá)32
• 3.7 核酸疫苗疫苗接種及表達(dá)32-34
• 3.8 疫苗保護(hù)性作用的研究34-39
• 3.9 統(tǒng)計學(xué)方法處理數(shù)據(jù)39-41
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-69
• 4.1 真核質(zhì)粒SjDLC構(gòu)建與表達(dá)41-43
• 4.2 真核質(zhì)粒m IFN-γ構(gòu)建與表達(dá)43-44
• 4.3 真核質(zhì)粒在動物體內(nèi)的表達(dá)44-46
• 4.4 真核質(zhì)粒的保護(hù)性效果46-69
• 第5章 討論69-73
• 第6章 結(jié)論73-75
• 參考文獻(xiàn)75-80
• 綜述80-88
• 參考文獻(xiàn)85-88
• 附錄88-90
• 本研究受以下課題資助90-91
• 研究成果及論文91-92
• 致謝92

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張寶秀;日本血吸蟲感染時貧血的形成和性質(zhì)[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1982年01期

2 陸予云，，易新元，曾憲芳，曾慶仁，汪世平，彭先楚;旋毛蟲與日本血吸蟲感染間相互影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];湖南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1996年02期

3 田小軍;豬日本血吸蟲感染和血清及組織中維生素A和鋅的濃度[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);2000年03期

4 季e鹲

本文編號：289658