本文關(guān)鍵詞：慢性應(yīng)激肝郁脾虛模型大鼠下丘腦弓狀核攝食相關(guān)神經(jīng)肽變化機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:在前期實驗研究基礎(chǔ)上,本課題通過慢性束縛應(yīng)激方法來建立肝郁脾虛證候動物模型,以免疫熒光雙染、激光共聚焦成像、實時熒光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-q PCR)等技術(shù)與方法,從基因與蛋白水平,分析下丘腦弓狀核(Arcuate nucleus,ARC)中具有抑制攝食作用的瘦素受體(ob-R)、可卡因-安非它明調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子(Cocaine amph-etamine-regulated transcript,CART)、前阿黑皮(Proopiomelanocortin,POMC)、α-促黑素細胞激素(α-melanocyte stimulating hormone,α-MSH)的表達,為肝郁脾虛證候機體所表現(xiàn)的食欲下降、體重減輕、便溏等脾胃運化功能失常的生物學(xué)基礎(chǔ)提供實驗依據(jù);同時以中藥復(fù)方逍遙散(《太平惠民和劑局方》)作為干預(yù)用藥,揭示其疏肝解郁、健脾以調(diào)節(jié)食欲的作用靶點與機理。方法:SD大鼠隨機分為4組,即正常對照組(簡稱正常組)、7天模型組、21天模型組、逍遙散組。正常組大鼠不施加應(yīng)激措施,正常飼養(yǎng);7天模型組、21天模型組大鼠分別予每天連續(xù)3h、連續(xù)7天、21天的慢性束縛應(yīng)激方法(將大鼠束縛固定于特制的T型臺)建立動物模型;逍遙散組大鼠慢性束縛應(yīng)激21天同時予灌服中藥復(fù)方逍遙散。7天模型組于實驗第8天取材;正常組、21天模型組與逍遙散組于實驗第22天取材。動態(tài)觀測4組大鼠體重、攝食量、飲水量、外觀表征和行為學(xué)變化(曠場試驗、高架十字試驗)。以免疫熒光雙染、激光共聚焦成像、RT-q PCR等技術(shù)與方法,觀測大鼠下丘腦ARC中ob-R、CART、POMC、α-MSH基因和蛋白表達。結(jié)果:1大鼠一般外觀表征與行為學(xué)的變化與正常組大鼠比較,模型組大鼠體重、攝食量、飲水量呈緩慢增長的趨勢;一般外觀表現(xiàn)出現(xiàn)嗜睡懶動、反應(yīng)遲鈍、皮毛枯黃晦暗、耳廓爪部色澤變淡、大便干濕不調(diào)等變化;在束縛造模第0天,曠場試驗各組大鼠5min內(nèi)總穿格數(shù)、中央?yún)^(qū)停留時間、站立次數(shù)、修飾次數(shù)基本處于同一水平,隨著實驗進程,模型組大鼠的中央?yún)^(qū)停留時間明顯增加,總穿格數(shù)、站立次數(shù)、修飾次數(shù)呈現(xiàn)減少的趨勢。高架十字試驗各組大鼠進入開放臂次數(shù)、開放臂停留時間、進入封閉臂次數(shù)、封閉臂停留時間基本無差別,隨著實驗進程,模型組大鼠進入開放臂次數(shù)和開放臂停留時間呈下降趨勢,進入封閉臂次數(shù)及封閉臂停留時間呈現(xiàn)增加的趨勢,而逍遙散組大鼠體重、攝食量、飲水量、行為學(xué)各項指標的改善比較明顯,一般外觀表征也有顯著改善作用。2免疫熒光雙染觀測各組大鼠下丘腦ARC中ob-R、CART、POMC、α-MSH蛋白表達變化在整個實驗過程中,隨著束縛的持續(xù)施加,21天模型組大鼠下丘腦ARC中ob-R、CART、POMC、α-MSH的表達陽性面積、平均光密度、積分光密度、陽性細胞數(shù)均較正常組增加,CART、POMC、a-MSH與ob-R共染面積的表達亦較正常組增加;灌服3周逍遙散后,各項指標均有下降趨勢,尤以ob-R與CART明顯。3 RT-q PCR觀測各組大鼠下丘腦ARC中ob-R m RNA、CART m RNA、POMC m RNA、α-MSH m RNA表達變化在整個實驗過程中,隨著束縛的持續(xù)施加,21天模型組大鼠下丘腦ARC中ob-R m RNA的表達較正常組明顯增加(P0.01),但CART m RNA、POMC m RNA、α-MSH m RNA的表達較正常組增加,無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。逍遙散可以下調(diào)大鼠下丘腦ARC中ob-R m RNA、CART m RNA、POMC m RNA、α-MSH m RNA的表達。結(jié)論:1 21天模型組大鼠下丘腦ARC中ob-R、CART、POMC、α-MSH蛋白與基因處于高表達水平,尤以ob-R明顯,表明ob-R的蛋白與基因表達下降,是慢性應(yīng)激肝郁脾虛狀態(tài)機體出現(xiàn)食少、腹脹、便溏等脾胃失于健運的主要內(nèi)在的中樞調(diào)節(jié)機制,7天模型組各指標較正常組增加不明顯,表明慢性制動束縛7天,模型以肝郁樣改變?yōu)橹鳌?灌服逍遙散后,下丘腦ARC中ob-R、CART、POMC、α-MSH蛋白與基因的表達水平較模型組大鼠降低,表明ob-R及調(diào)節(jié)的下行POMC/CART通路可能作為傳統(tǒng)中藥逍遙散疏肝健脾以調(diào)節(jié)脾胃功能作用的靶點。
【關(guān)鍵詞】：慢性束縛應(yīng)激 肝郁脾虛證 弓狀核 逍遙散 瘦素受體 前阿黑皮素 可卡因-安非它明調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子 α-促黑素細胞激素
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R259;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-22
• 結(jié)果22-30
• 附圖30-59
• 附表59-67
• 討論67-72
• 結(jié)論72
• 參考文獻72-76
• 綜述 逍遙散的藥理研究及臨床應(yīng)用研究進展76-90
• 參考文獻86-90
• 致謝90-91
• 個人簡歷91

【參考文獻】

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本文編號：291255