本文關(guān)鍵詞：豚鼠誘導性多能干細胞樣細胞的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：誘導多能干細胞(induced pluripotent stem cells, iPSCs)是指將體細胞進行重編程,轉(zhuǎn)化為具有胚胎干細胞特性和功能的多能干細胞。誘導多能干細胞可以自我更新并可分化成各種類型的體細胞,不僅在替代療法上有重要價值,還可用于體外疾病模型的建立,以方便疾病機制的研究、藥物的監(jiān)測以及新治療方法的檢驗。豚鼠(guinea pigs)由于具有某些特殊的生理解剖特點和生物學特性而被廣泛應用于生物醫(yī)學的各個領(lǐng)域,故可以作為研究許多疾病致病機理與藥物篩選的理想動物模型。但迄今為止,尚沒有有關(guān)豚鼠iPS細胞的研究報道。本研究以慢病毒為載體,以傳統(tǒng)的四因子誘導法(oct4、sox2、klf4和c-myc)對分離的胎兒豚鼠成纖維細胞進行重編程,以獲得重編程的豚鼠iPS細胞系,為后續(xù)建立動物疾病模型和藥物篩選模型奠定基礎(chǔ)。實驗結(jié)果如下：1.通過組織塊貼壁法分別分離得到小鼠胚胎成纖維細胞和豚鼠胎兒成纖維細胞,兩種細胞均可穩(wěn)定傳代。豚鼠胎兒成纖維細胞在病毒感染和多次傳代后,細胞周期依舊正常,說明其可以作為重編程的靶細胞。2.使用四種不同轉(zhuǎn)染試劑：磷酸鈣法、脂質(zhì)體2000、脂質(zhì)體LTX和QuickShuttle-293試劑,通過三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞,比較以上四種試劑對編碼綠色熒光蛋白(GFP)基因的重組慢病毒載體的包裝效率和對包裝細胞的毒性作用,以及包裝獲得的病毒感染豚鼠胎兒成纖維細胞的能力。通過流式細胞技術(shù)和MTT法分別檢測陽性細胞數(shù)和細胞活性,最終顯示了QuickShuttle-293轉(zhuǎn)染試劑無論在慢病毒包裝過程中的轉(zhuǎn)染效率、細胞毒性及包裝后病毒的感染效率方面顯示出較好的效果。3.通過編碼傳統(tǒng)四因子(oct4、sox2、klf4和c-myc)基因的重組慢病毒感染豚鼠胎兒成纖維細胞,使之成功重編程為豚鼠iPS細胞,并比較了3種小分子物質(zhì)(維生素C、丙戊酸鈉、丁酸鈉)對細胞重編程的促進作用,最終發(fā)現(xiàn)添加維生素C和丙戊酸鈉的培養(yǎng)基對重編程效率有著明顯提升。對所得到的豚鼠iPS樣克隆進行了生物學特性檢測：1)對豚鼠iPS樣細胞進行堿性磷酸酶染色,結(jié)果呈陽性；2)提取豚鼠iPS樣細胞RNA, RT-PCR檢測ES細胞相關(guān)標記基因,結(jié)果顯示其內(nèi)源性表達oct4, sox2, klf4, c-myc以及nanog基因；qPCR結(jié)果顯示,內(nèi)源性oct4、sox2、klf4、c-myc和nanog基因的表達遠高于對照豚鼠成纖維細胞；3)提取豚鼠iPS樣細胞總蛋白,western blot結(jié)果顯示其高表達兩種ES細胞標記蛋白：oct4和nanogo表明得到的豚鼠iPS細胞是具有多能性的。
【關(guān)鍵詞】：誘導性多能干細胞 轉(zhuǎn)錄因子 慢病毒 豚鼠成纖維細胞 細胞重編程
【學位授予單位】：寧夏大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 英文縮略詞表7-9
• 第一章 文獻綜述9-19
• 1.1 體細胞重編程的機制和方法9-11
• 1.2 多能性干細胞的誘導方法和機制11-14
• 1.3 誘導性多能干細胞的研究現(xiàn)狀和應用前景14-17
• 1.4 iPS細胞存在的問題17-18
• 1.5 本研究的目的和意義18-19
• 第二章 豚鼠胎兒成纖維細胞的分離培養(yǎng)及生物學特性分析19-28
• 引言19
• 2.1 試驗材料及試劑19-20
• 2.2 試驗方法20-23
• 2.3 結(jié)果與分析23-26
• 2.4 討論26-27
• 2.5 小結(jié)27-28
• 第三章 不同轉(zhuǎn)染試劑對慢病毒包裝及包裝后病毒感染豚鼠成纖維細胞效率的影響28-38
• 引言28
• 3.1 實驗材料28-29
• 3.2 實驗方法29-32
• 3.3 實驗結(jié)果32-36
• 3.4 討論36-37
• 3.5 小結(jié)37-38
• 第四章 豚鼠胎兒成纖維細胞來源的iPS細胞誘導及鑒定38-52
• 引言38
• 4.1 實驗材料38-39
• 4.2 實驗方法39-46
• 4.3 實驗結(jié)果46-50
• 4.4 討論50-51
• 4.5 小結(jié)51-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻53-63
• 致謝63-64
• 個人簡介64

【引證文獻】

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉璐璐;劉啟兵;許雪嬌;黃繼云;顏森泉;韓峰;樓宜嘉;;陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine 2000介導基因轉(zhuǎn)染對內(nèi)皮細胞株的毒性作用[A];中國毒理學會第五次全國學術(shù)大會論文集[C];2009年

  本文關(guān)鍵詞：豚鼠誘導性多能干細胞樣細胞的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：288808