深靜脈血栓在臨床上尤其是骨科發(fā)病率高,早期診斷較為困難,治療難度大,并發(fā)肺栓塞后死亡率高。本課題組前期建立小鼠動(dòng)物模型,發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞活化、凝血/抗凝系統(tǒng)失衡及炎癥反應(yīng)與DVT形成之間關(guān)系密切。結(jié)合經(jīng)典文獻(xiàn)關(guān)于DVT的研究,本課題就鋅指樣轉(zhuǎn)錄因子15(KLF15)及其下游調(diào)控基因在DVT形成中的作用及其調(diào)控關(guān)系從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面進(jìn)行研究。探討KLF15下游調(diào)控基因在下腔靜脈狹窄法DVT小鼠靜脈壁組中的表達(dá)變化和其作用作一初步研究。[目的]建立C57小鼠下腔靜脈狹窄法DVT模型,造模后24小時(shí)獲取小鼠下腔靜脈壁組織,觀察造模小鼠建模后血栓形成情況并檢測靜脈壁組織中KLF15,通過RNA-seq技術(shù)在全基因組范圍內(nèi)分析其差異性基因,探討其與DVT形成的關(guān)系;[方法]1.60只C57小鼠分為正常組20只、DVT組20只、KLF15抑制組20只,正常組與DVT組于造模前24小時(shí)尾靜脈注射生理鹽水0.2ml,KLF15抑制組于造模前24小時(shí)尾靜脈注射KLF15 siRNA 100nmol/只,DVT組采用下腔靜脈狹窄法造模,造模24小時(shí)后獲取下腔靜脈組織;real-time PCR法檢測靜脈組織中KLF15的表達(dá);觀察血栓形成情況。2.運(yùn)用RNA-seq技術(shù),在全基因組范圍內(nèi)分析空白對(duì)照組與DVT組,DVT組與KLF15干擾組下游差異性基因表達(dá)結(jié)果,研究KLF15與下游基因的調(diào)控關(guān)系。[結(jié)果]1.DVT組成栓率73%、死亡率15%、血栓濕重6.65±2.37mg;KLF15抑制組成栓率88%,死亡率10%,血栓濕重15.85±2.64mg;real-time PCR檢測DVT組、KLF15干擾組小鼠靜脈組織中KLF15表達(dá)發(fā)現(xiàn),抑制KLF15的表達(dá)后KLF15抑制組與DVT組相比表達(dá)下調(diào)(P0.05)。2.空白對(duì)照組與DVT組、DVT組與KLF15抑制組RNA-seq測序,在空白對(duì)照組與DVT組對(duì)比組中,共篩選出差異性基因15978個(gè)(P0.05),進(jìn)一步篩選出具有顯著性差異基因701個(gè)(丨log2(foldchange)丨1)。其中表達(dá)上調(diào)的差異性基因497個(gè),表達(dá)下調(diào)的差異性基因204個(gè)。在DVT組與KLF15抑制組對(duì)比中,共篩選出差異性基因218個(gè),進(jìn)一步篩選出具有顯著性差異基因88個(gè)(丨log2(foldchange)丨1)。其中表達(dá)上調(diào)的差異性基因20個(gè),表達(dá)下調(diào)的差異性基因68個(gè),篩選出炎性相關(guān)差異基因17個(gè),其中Strip2、Cd51、A2m、Ankrd1等可能通過影響IL-1 β、IL-6、TNF-a、TGF-β 1的表達(dá)而影響深靜脈血栓的形成。[結(jié)論]1.KLF15可抑制深靜脈血栓的形成;2.KLF15可能調(diào)控下游基因Strip2、CD51、A2m、Ankrd1等影響深靜脈血栓的形成;
【學(xué)位單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R-332;R68
【部分圖文】：

圖２小動(dòng)物麻醉機(jī)??Ｆｉｇｕｒｅ?３?Ｓｍａｌｌ?ａｎｉｍａｌ?ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ?ｍａｃｈｉｎｅｓ??

２．２．７注射完成后創(chuàng)口處理??用棉簽按壓針口，直到不出血為止，一般為５－１０秒。這樣有利于創(chuàng)口盡快??恢復(fù)，且避免藥物滲漏。注射過程如圖１。??１３??

圖３?Ｃ５７ＢＬ／６小鼠ＤＶＴ血栓模型的構(gòu)建過程（實(shí)驗(yàn)臺(tái)、麻醉、固定消毒、??開腹、暴露下腔靜脈和腹主動(dòng)脈、下腔靜脈和腹主動(dòng)脈的分離、結(jié)扎小鼠下腔靜??脈并結(jié)扎其屬支、關(guān)腹）??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 陳育堯;黃雪玲;;小鼠尾靜脈注射法[J];毒理學(xué)雜志;2008年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 宋恩;內(nèi)皮細(xì)胞源性KLF15調(diào)控TM激活蛋白C抗凝血途徑及MCP-1介導(dǎo)炎性反應(yīng)影響DVT形成的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

本文編號(hào)：2857606