發(fā)布時(shí)間：2020-10-26 10:31

　　 目的:研究煙堿型乙酰膽堿受體在在面神經(jīng)支配的口輪匝肌和軀體神經(jīng)支配的腓腸肌運(yùn)動(dòng)終板處的表達(dá)差異及可能的原因。方法:分離SD大鼠的口輪匝肌和腓腸肌,通過(guò)免疫共沉淀技術(shù)計(jì)算口輪匝肌和腓腸肌肌肉特異性激酶(Muscle Specific Kinase,Mu SK)的表達(dá)以及MuSK磷酸化水平。對(duì)MuSK的上游信號(hào)通路中能使其發(fā)生磷酸化的集聚蛋白Agrin、低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白4 (low-density lipoprotein receptor-related protein 4, Lrp4)以及表皮生長(zhǎng)因子家族受體ErbB2、ErbB3和ErbB4(epidermal growth factor receptor)免疫熒光染色,計(jì)算這兩條不同通路中的蛋白在運(yùn)動(dòng)終板處的表達(dá)水平。結(jié)果:口輪匝肌中MuSK磷酸化水平顯著高于腓腸肌(P0.05)�？谳喸鸭∨c腓腸肌的運(yùn)動(dòng)終板處的Agrin和Lrp4表達(dá)沒(méi)有顯著差異(P0.05)�？谳喸鸭rbB2、ErbB3、ErbB4的表達(dá)顯著高于其在腓腸肌運(yùn)動(dòng)終板處的表達(dá)(P0.01)。結(jié)論:口輪匝肌和腓腸肌運(yùn)動(dòng)終板ErbB、ErbB3、ErbB4的差異表達(dá)造成MuSK磷酸化水平不同,可能是兩種肌肉運(yùn)動(dòng)終板處煙堿型乙酰膽堿亞基表達(dá)量不同的原因。
【部分圖文】：

利用免疫共沉淀技術(shù)，我們發(fā)現(xiàn)在100 kD條帶的位置，MuSK在兩種肌肉中的表達(dá)并無(wú)差異。然而通過(guò)計(jì)算4G10（磷酸化的MuSK）條帶的強(qiáng)度與MuSK條帶強(qiáng)度的比值，得出口輪匝肌中MuSK磷酸化程度高于腓腸肌中MuSK磷酸化水平(63.7%±2.26-45.3%±3.27,P<0.05,n=20)。結(jié)果見(jiàn)圖1。2.2 口輪匝肌和腓腸肌中運(yùn)動(dòng)終板處Agrin、Lrp4和MuSK的表達(dá)比較

對(duì)腓腸肌和口輪匝肌運(yùn)動(dòng)終板處的Agrin,Lrp4和MuSK進(jìn)行熒光染色。α-BTX（α-bungarotoxin）是一種銀環(huán)蛇毒素，可以特異性結(jié)合nAchRs的α1亞基，用于標(biāo)記運(yùn)動(dòng)終板。Agrin在口輪匝肌中運(yùn)動(dòng)終板的熒光密度(0.07959±0.005334)與腓腸肌(0.08235±0.004976)中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,n=20),Lrp4(0.04213±0.002265-0.04122±0.002043)和MuSK(0.04829±0.002214-0.04267±0.002098)也無(wú)顯著差異(P>0.05,n=20)，結(jié)果見(jiàn)圖2。2.3 口輪匝肌和腓腸肌中運(yùn)動(dòng)終板處ErbB2,ErbB3和ErbB4的表達(dá)

在胚胎發(fā)育過(guò)程中，肌肉會(huì)預(yù)先選定運(yùn)動(dòng)終板位置，并引導(dǎo)神經(jīng)末梢的的生長(zhǎng)，最終形成完整的突觸的結(jié)構(gòu)，而表達(dá)于肌細(xì)胞膜上的MuSK蛋白在這一過(guò)程中起決定性的作用。在MuSK突變的的肌管和小鼠胚胎中，運(yùn)動(dòng)終板的突觸前和突觸后的的正常結(jié)構(gòu)都無(wú)法形成。MuSK在體外培養(yǎng)的成肌細(xì)胞中以低水平表達(dá)，同時(shí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明在胚胎早期，MuSK特異性表達(dá)于發(fā)育中的肌肉，但MuSK的水平在成熟肌肉中卻顯著下降，僅在神經(jīng)肌肉接頭處的表達(dá)和分布[20]。突觸后膜nAchRs的形成和聚集是運(yùn)動(dòng)終板成熟的標(biāo)志，這一過(guò)程和MuSK表達(dá)和被激活發(fā)生磷酸化息息相關(guān)[21,22]。在MuSK基因敲除小鼠或從突變體提取和培養(yǎng)的肌管中，nAChRs不能在運(yùn)動(dòng)終板處聚集，甚至失去了突觸特異性nAChRs表達(dá)和轉(zhuǎn)錄能力。然而，MuSK對(duì)于n AChRs聚集的能力依賴(lài)于其近膜區(qū)的酪氨酸磷酸化修飾，當(dāng)特異性的抑制MuSK的這段近膜區(qū)的功能后，突觸后膜失去了nAchRs表達(dá)和聚集的能力[23,24]。為了探討n(yōu)AchRs在口輪匝肌和腓腸肌運(yùn)動(dòng)終板處的表達(dá)差異的原因，根據(jù)以上我們對(duì)Mu SK在運(yùn)動(dòng)終板形成和成熟的中作用的認(rèn)識(shí)，我們首先分析了口輪匝肌和腓腸肌運(yùn)動(dòng)終板的MuSK表達(dá)量，同時(shí)評(píng)估了Mu SK的磷酸化水平。結(jié)果顯示了在兩種肌肉運(yùn)動(dòng)終板處的Mu SK的表達(dá)水平?jīng)]有差異，而MuSK的磷酸化水平有顯著差異，提示MuSK在兩種肌肉中被不同程度的激活。為了尋找MuSK磷酸化水平的差異的原因，我們探究了能促使MuSK發(fā)生磷酸化的上游因子的表達(dá)水平。在運(yùn)動(dòng)終板處，由運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元分泌的Agrin，是一種肝素硫酸酯類(lèi)糖蛋白分子。Agrin通過(guò)與突觸后膜Lrp4結(jié)合，激活MuSK近膜區(qū)的Y533位的酪氨酸發(fā)生磷酸化，促進(jìn)MuSK對(duì)nAchR在突觸后膜表達(dá)和聚集的作用，最終實(shí)現(xiàn)突觸后膜nAchRs的表達(dá)和聚集[20,25,26]。失去Agrin和Lrp4的作用，突觸后膜MuSK磷酸化的水平顯著降低，而且突觸后膜nAchRs的表達(dá)和聚集也被抑制[27]。鑒于Agrin和Lrp4對(duì)MuSK有激活的作用，我們檢測(cè)了口輪匝肌和腓腸肌運(yùn)動(dòng)終板處的Agrin和Lrp4的表達(dá)。然而，我們并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)這兩種蛋白在口輪匝肌和腓腸肌運(yùn)動(dòng)終板的表達(dá)有顯著差異，這說(shuō)明了口輪匝肌運(yùn)動(dòng)終板處MuSK相對(duì)高的磷酸化水平的原因并不是來(lái)自Agrin和Lrp4的表達(dá)。
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄧細(xì)河,翟佳羽,崔穎秋,裴霞,姜杰,黎凡,徐達(dá)傳,廖農(nóng);正常與單側(cè)唇裂口輪匝肌和上唇血管的應(yīng)用解剖[J];中國(guó)臨床解剖學(xué)雜志;2002年02期

2 柯國(guó)平,黃文鐸,胡家犖;家兔肌皮神經(jīng)軀體神經(jīng)元的定位研究[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2001年02期

3 王鳳琴,孔佑華,孫秀麗;運(yùn)動(dòng)終板制作方法的改進(jìn)[J];濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年04期

4 宋田斌,鄭尊,楊勇驥,吳越;制作運(yùn)動(dòng)終板電鏡標(biāo)本的一種簡(jiǎn)單方法[J];解剖學(xué)雜志;1999年01期

5 黃躍,吳德江;采用蛇肋間肌為材料顯示運(yùn)動(dòng)終板[J];四川解剖學(xué)雜志;1999年01期

6 孫克任,楊東昌,李敏,張秀蓮,于麗華,宋振平;氯丙烯染毒引起運(yùn)動(dòng)終板的膽堿酯酶活力和肌肉組織變化[J];中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志;1988年06期

7 楊逢春,姚麗芳;制作運(yùn)動(dòng)終板標(biāo)本方法的改進(jìn)[J];四川解剖學(xué)雜志;2002年04期

8 石陽(yáng),任重;豚鼠面神經(jīng)失神經(jīng)支配后口輪匝肌琥珀酸脫氫酶、乙酰膽堿酯酶酶活性觀(guān)察[J];遼寧醫(yī)學(xué)雜志;2001年01期

9 黃崇芳;運(yùn)動(dòng)終板的封片技術(shù)探討[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1994年03期

10 顏永碧,陸月良,王英;用細(xì)胞化學(xué)顯示神經(jīng)運(yùn)動(dòng)終板的電鏡標(biāo)本制備[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 孫敏;口周神經(jīng)（Sihler’s染色法）及口角肌肉（口緣部口輪匝肌與頰肌）的解剖學(xué)研究及臨床應(yīng)用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2019年

本文編號(hào)：2856881