目的 觀察雌二醇、白細(xì)胞介素6和TGF-β三者在成骨前體細(xì)胞分化中的作用,并進(jìn)一步在細(xì)胞水平研究雌激素受體在雌二醇調(diào)控白細(xì)胞介素6和TGF-β影響成骨前體細(xì)胞分化中的作用機(jī)制。 方法 選擇小鼠胚胎成骨前體細(xì)胞MC3T3-E1作為本課題研究的細(xì)胞模型。不同濃度梯度的17β-雌二醇處理MC3T3-E1細(xì)胞后用免疫印跡和Real-time PCR檢測堿性磷酸酶(ALP)活性、骨橋蛋白(osteoponitin,OPN)、骨保護(hù)素(osteoprotegerin,OPG)、骨鈣素(osteocalcin, OC)等成骨細(xì)胞相關(guān)因子和RANKL因子的表達(dá)。將不同濃度梯度的17β-雌二醇處理MC3T3-E1細(xì)胞后檢測白細(xì)胞介素6和TGF-β的表達(dá)。分別用白細(xì)胞介素6和TGF-β處理MC3T3-E1細(xì)胞后檢測上述因子的表達(dá)。再將白細(xì)胞介素6和TGF-β分別與雌二醇共同處理MC3T3-E1細(xì)胞后測上述因子的表達(dá)。 進(jìn)一步構(gòu)建病毒包裝陰性對照和ERs特異性的干擾載體,包裝病毒后感染MC3T3-E1細(xì)胞,24小時后經(jīng)17p-雌二醇(10-7M)處理后,檢測在ERa或ERβ特異性干擾的情況下17β-雌二醇誘導(dǎo)的TGF-β和白細(xì)胞介素6表達(dá)的改變。所有實驗數(shù)據(jù)均使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析結(jié)果,P0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果 雌二醇濃度梯度增加能夠促使MC3T3-E1細(xì)胞ALP、OPN、OC、 OPG的生成,抑制RANKL的表達(dá)(P0.05)。雌二醇處理MC3T3-E1后抑制白細(xì)胞介素6的生成,促進(jìn)TGF-β的表達(dá)(P0.05)。白細(xì)胞介素6單獨(dú)處理MC3T3-E1后抑制ALP、OC、OPG的表達(dá),增加了RANKL的表達(dá)(P0.05)。TGF-β單獨(dú)處理MC3T3-E1后促進(jìn)ALP、OC、OPG的表達(dá),抑制RANKL的表達(dá)(P0.05)。進(jìn)一步特異性的干擾了ER α和ER β在MC3T3-E1細(xì)胞的表達(dá),發(fā)現(xiàn)雌二醇促使TGF-β的表達(dá)和抑制白細(xì)胞介素6的生成是ERβ依賴性的,與ER α的表達(dá)不具有相關(guān)性。 結(jié)論 (1)本研究利用小鼠成骨前體細(xì)胞MC3T3-E1為細(xì)胞模型,證明雌二醇能夠促進(jìn)小鼠成骨前體細(xì)胞MC3T3-E1向成骨細(xì)胞分化。 (2)白細(xì)胞介素6和TGF-β在雌二醇誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分化過程中發(fā)揮重要作用。雌二醇通過抑制IL-6的表達(dá)和促進(jìn)TGF-β的生成促進(jìn)成骨前體細(xì)胞MC3T3-E1分化。 (3)雌二醇通過ERβ調(diào)控白細(xì)胞介素6和TGF-β的表達(dá),進(jìn)而調(diào)節(jié)成骨前體細(xì)胞的分化和功能,影響骨形成過程。
【學(xué)位單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R329.2;R68
【部分圖文】：

胞、成骨細(xì)胞（osteoblast)和破骨細(xì)胞（osteoclast)等。雌激素在骨代謝中的作用主要包括（見圖1)：雌激素通過作用于不同成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的生成和凋亡進(jìn)而對皮質(zhì)骨和松質(zhì)骨骨量調(diào)節(jié)；雌激素能夠增加骨外的細(xì)胞因子的生成；雌激素能夠調(diào)控B淋巴細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞的分化和功能；雌激素通過直接調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞進(jìn)而調(diào)控生長板骨衡閉合；雌激素參與了骨細(xì)胞生命周期的調(diào)節(jié)。雌激素能夠增加對機(jī)械壓力的反應(yīng)。骨代謝主要涉及成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞。成骨細(xì)胞表達(dá)多種表型標(biāo)記，例如高的堿性磷酸酶（ALP)活性，并且能夠合成膠原和非膠原類的骨基質(zhì)蛋白，包括骨1^素。成骨細(xì)胞的最重要的功能是參與骨的礦化。成骨細(xì)胞也能夠分泌細(xì)胞因子，如骨f丐素(osteocalcin , 0C)、骨橋蛋白（osteoponitin, OPN )、骨保護(hù)素(osteoprotegerin, OPG)等4】，進(jìn)而調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞的活性和功能，維持骨的代謝平衡15]。破骨細(xì)胞來自骨髓造血干細(xì)胞中的單核細(xì)胞/巨睡細(xì)胞祖細(xì)胞系，其主要功能是分泌蛋白酶和一些酸性物質(zhì)，進(jìn)而溶解骨組織。破骨細(xì)胞分化成熟的過程2

分析SS17.0統(tǒng)計軟件處理，結(jié)果采用卡方檢驗，取尸<0.準(zhǔn)。在勞光定量PCR及Western-blot等的結(jié)果分析組相關(guān)基因的相對表達(dá)量標(biāo)化為1.00，其他各組的相比，得到倍數(shù)差距相對的比較值，進(jìn)行統(tǒng)計分析，的比較。*, P<0.05; **,尸<0.01; ***,戶<0.001。n-blot檢測17p-雌二醇處理IVIC3T3-E1細(xì)胞后骨相度的17(3-雌二醇（10—9, 10—8, 10—7和lO—M)處測細(xì)胞因子骨韓素、骨保護(hù)素等成骨細(xì)胞相關(guān)因子分化因子的表達(dá)。

圖1-4￡1^5八檢測雄二醇處理"匸3丁3-￡1細(xì)胞后骨橋蛋白的分泌濃度梯度丨7P-雄二醇處理MC3T3-E1細(xì)胞后ELISA檢測骨橋蛋白的分泌分泌明顯增加。在i7p-雌二醇濃度為icr7和io-6m時與對照組具有統(tǒng)計性磷酸酶（ALP)活性的檢測同濃度的17p-雌二醇（10—9，10、10—7和icr^M)處理MC3T3-，吸去培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，更換為低血糖培養(yǎng)基，24小時后收集苯碟酸二鈉為底物，405nm波長測定吸光（0D)值。19
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本文編號：2854524