目的:探索黃芩素(Baicalein)改善軟骨細(xì)胞退化的可能機(jī)制。方法:用不同濃度黃芩素處理OA大鼠,觀察軟骨退化情況,并檢測(cè)炎性細(xì)胞因子水平。用不同劑量黃芩素處理OA細(xì)胞模型,檢測(cè)各組細(xì)胞的活力及凋亡情況,雙熒光素酶報(bào)告驗(yàn)證miR-29a-3p、MAP2K6的靶向關(guān)系。結(jié)果:與假手術(shù)組比較,OA模型組大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平顯著增高,細(xì)胞活力顯著降低,細(xì)胞凋亡率顯著增高,與模型對(duì)照組比較,黃芩素10、20、30 mg/kg能夠顯著降低OA模型血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,能夠顯著改善OA大鼠軟骨細(xì)胞活性抑制及凋亡情況,能夠緩解OA模型軟骨組織番紅氧失染情況;miR-29a-3p與MAP2K6存在靶向關(guān)系,黃芩素10μmol/L能夠明顯下調(diào)OA細(xì)胞中MAP2K6、p38/p-p38、MAX蛋白表達(dá)水平。結(jié)論:黃芩素可以通過調(diào)節(jié)miR-29a-3p靶向抑制MAP2K6的磷酸化,提高軟骨細(xì)胞活性,抑制細(xì)胞凋亡從而改善OA引起的軟骨細(xì)胞退化。
【部分圖文】：

假手術(shù)組軟骨表面光滑,無裂隙,細(xì)胞分布均勻,番紅氧染色均染,無失染情況;模型組軟骨出現(xiàn)大量的缺損及裂隙,細(xì)胞數(shù)減少,潮線消失,番紅氧染色重度或完全失染;黃芩素 10 mg/kg組軟骨表面有裂隙生成,深達(dá)中間層,軟骨細(xì)胞增多,同源細(xì)胞群增多,番紅氧染色中重度失染;黃芩素 20 mg/kg組軟骨表面裂隙較少,表面平整,番紅氧染色輕中度失染;黃芩素 30 mg/kg組軟骨表面無明顯裂隙,表面平整,番紅氧染色均勻,無失染情況,塞來昔布組與黃芩素 30 mg/kg組結(jié)果相似。見圖1、表1。表1 番紅氧染色評(píng)價(jià)黃芩素對(duì)OA模型大鼠軟骨組織分級(jí)程度分布的影響(n=6,只) 組別 劑量/(mg/kg) 樣本數(shù) 軟骨表面細(xì)胞光滑,無裂隙,細(xì)胞分布均勻,番紅染色均染,無失染情況 軟骨表面無明顯裂隙,表面基本平整,番紅氧染色均勻,無明顯失染情況 軟骨表面存在裂隙,表面較平整,番紅氧染色輕中度失染 軟骨表面大量的缺損及裂隙,細(xì)胞數(shù)減少,潮線消失,番紅氧染色重度或完全失染 假手術(shù) 6 5 1 0 0 模型對(duì)照 6 0 0 1 5 塞來昔布 40 6 2 4 0 0 黃芩素 10 6 0 1 4 1 黃芩素 20 6 0 4 2 0 黃芩素 30 6 3 3 0 0

表2 黃芩素對(duì)OA模型大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平的影響 ( x ˉ ±s,n=6) 組別 劑量/(mg/kg) IL-1β/(pg/mL) IL-6/(pg/mL) TNF-α/(pg/mL) 假手術(shù) 30±11** 28±11** 83±22** 模型對(duì)照 165±26 155±25 333±45 塞來昔布 40 41±12** 32±13** 92±20** 黃芩素 10 126±28* 109±29* 266±37* 黃芩素 20 86±17** 84±18** 193±29** 黃芩素 30 72±16** 57±15** 132±36** 與模型組比較 * P<0.05,** P<0.01(下同)。表3 黃芩素對(duì)OA軟骨細(xì)胞凋亡及活力的影響 ( x ˉ ±s,n=3) 組別 劑量/(μmol/L) 細(xì)胞凋亡/(%) 細(xì)胞活力/(%) 正常對(duì)照 6.3±1.2** 100.0±8.0** 模型對(duì)照 36.8±3.0 36.0±8.0 塞來昔布 200 mg/孔 8.8±1.6** 92.0±6.0** 黃芩素 2.5 25.9±2.2* 55.0±12.0* 黃芩素 5 18.6±1.8* 68.0±11.0* 黃芩素 10 9.5±1.3** 86.0±9.0**

表5 轉(zhuǎn)染miR-29a-3p mimic對(duì)軟骨細(xì)胞中miR-29a-3p、MAP2K6表達(dá)水平的影響 ( x ˉ ±s,n=6) 組別 miR-29a-3p/2-△△Ct MAP2K6/2-△△Ct miR-29a-3p過表達(dá) 50.00±6.00** 0.17±0.05* 陰性對(duì)照 1.00±0.12 1.00±0.11 對(duì)照 1.00±0.15 1.00±0.10 與對(duì)照組比較 * P<0.05,**P<0.01。2.5 QRT-PCR及Wentern blet法檢測(cè)黃芩素對(duì)OA軟骨細(xì)胞miR-29a-3p/MAP2K6基因和蛋白表達(dá)調(diào)控的影響
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1 毛竹君;翁思穎;王磊;柴可夫;;小檗堿調(diào)控IR-HepG2細(xì)胞miR-29a-3p及胰島素受體信號(hào)通路的作用機(jī)制研究[J];中華中醫(yī)藥雜志;2018年12期

2 何李樂;王萬春;;淫羊藿素對(duì)大鼠軟骨細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年05期

本文編號(hào)：2854211