發(fā)布時間：2020-10-24 07:36

　　 目的:探討腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)聯(lián)合二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向神經(jīng)樣細(xì)胞分化的效果,初步檢測miRNA-26a在神經(jīng)細(xì)胞分化過程中的表達(dá)量變化。方法:從大鼠股骨抽取骨髓分離BMSCs,DMSO對其預(yù)誘導(dǎo),隨后用含BDNF的神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)BMSCs,誘導(dǎo)其分化為神經(jīng)細(xì)胞。免疫組化鑒定分化神經(jīng)元樣細(xì)胞特異標(biāo)記物:神經(jīng)元特異烯醇酶(neuron specific enolase,NSE)。實時定量PCR法檢測神經(jīng)分化前后酪氨酸磷酸酶蛋白(tyrosine phosphatase protein,PTEN)基因/mTOR和miRNA-26a的表達(dá)變化。結(jié)果:100 ng·mL-1 BDNF聯(lián)合3%DMSO可誘導(dǎo)BMSCs向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化,分化后神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志物NSE蛋白表達(dá)呈陽性,且神經(jīng)分化過程中miRNA-26a、PTEN/mTOR的含量明顯上調(diào)。結(jié)論:3%DMSO和100 ng·mL~(-1) BDNF的混合誘導(dǎo)劑可誘導(dǎo)大鼠BMSCs向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化,而miRNA-26a可能通過PTEN/mTOR調(diào)節(jié)神經(jīng)分化。
【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗動物
        1.1.2 試劑
        1.1.3 儀器
    1.2 實驗方法
        1.2.1 BMSCs的獲取及純度檢測
        1.2.2 BDNF/DMSO聯(lián)合誘導(dǎo)BMSCs的分化
        1.2.3 BMSCs神經(jīng)分化的鑒定
            1.2.3. 1 形態(tài)鑒定
            1.2.3. 2 免疫組化檢測各組神經(jīng)元特異性烯醇酶（neuron specific enolase,NSE）蛋白的表達(dá)
        1.2.4 實時熒光定量PCR檢測miRNA-26a、PTEN、mTOR的表達(dá)變化
2 結(jié)果
    2.1 誘導(dǎo)前后大鼠BMSCs細(xì)胞的形態(tài)變化
    2.2 免疫細(xì)胞組化對BMSCs分化的鑒定
    2.3 實時熒光定量PCR對誘導(dǎo)前后miRNA-26a、PTEN、mTOR表達(dá)量的檢測
3 討論

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