研究目的：觀察乏氧對人成熟樹突細胞(mDC)分泌骨橋蛋白(OPN)的影響,探討乏氧調(diào)節(jié)人成熟樹突狀細胞(mDC)骨橋蛋白(OPN)表達的機制。 方法：免疫磁珠法分離健康人外周血CD14+單核細胞,分別在常氧和乏氧條件下經(jīng)GM-CSF及IL-4培養(yǎng)7天,體外誘導為人成熟樹突細胞(mDC); ELISA檢測培養(yǎng)上清中骨橋蛋白(OPN)水平,RT-PCR檢測人成熟樹突細胞(mDC)中骨橋蛋白(OPN)基因水平表達；流式細胞術(FACS)鑒定樹突狀細胞(DC)表型并檢測成熟樹突狀細胞(mDC)胞內(nèi)骨橋蛋白(i-OPN)表達水平；使用腺苷替代物(NECA)、特異性A2受體激動劑(CGS21680)和特異性A2受體拮抗劑(SCH 58261)探討A2受體(A2R)在調(diào)節(jié)人mDC表達OPN中發(fā)揮的作用：利用重組人TGF-β1 (rhTGF-β1)及抗TGF-β1單克隆抗體(anti-TGF-β1 Ab)檢測TGF-β1在這一過程中發(fā)揮的作用；采用SPSS13.0 for windows統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。 結果：①無論乏氧環(huán)境或常氧環(huán)境下誘導培養(yǎng)的樹突狀細胞(DC)均可達到表型成熟。 ②乏氧環(huán)境在分泌蛋白及轉錄水平顯著上調(diào)mDCs對OPN的表達,乏氧組OPN的水平較正常氧條件下增加3.28倍,OPN mRNA水平也同步升高,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)； ③常氧條件下,腺苷替代物(NECA)和A2R激動劑均能顯著上調(diào)mDCs對OPN mRNA的表達及誘導OPN蛋白的分泌,A2R拮抗劑可同時在分泌及轉錄水平特異性抑制A2R激動劑對OPN的誘導； ④乏氧環(huán)境不能調(diào)控mDC對i-OPN的表達。 ⑤A2R信號激活與否都不參與調(diào)控mDC對i-OPN的表達。 ⑥常氧條件下,A2R激動劑促使mDCs產(chǎn)生TGF-β1增加1.36倍, A2R拮抗劑下調(diào)mDCs分泌TGF-β1,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)；A2R參與調(diào)控免疫調(diào)節(jié)因子TGF-β1水平,通過rhTGF-β1和阻斷抗體證實TGF-β1參與調(diào)節(jié)OPN的表達。 結論：乏氧環(huán)境下高水平腺苷可通過A2R信號誘導mDC表達TGF-β1,繼而調(diào)節(jié)OPN的表達。
【學位單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2011
【中圖分類】：R392.9
【文章目錄】：
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材料與方法
結果
討論
結論
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參考文獻
致謝
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【共引文獻】

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本文編號：2839496