研究目的：觀察乏氧對(duì)人成熟樹突細(xì)胞(mDC)分泌骨橋蛋白(OPN)的影響,探討乏氧調(diào)節(jié)人成熟樹突狀細(xì)胞(mDC)骨橋蛋白(OPN)表達(dá)的機(jī)制。 方法：免疫磁珠法分離健康人外周血CD14+單核細(xì)胞,分別在常氧和乏氧條件下經(jīng)GM-CSF及IL-4培養(yǎng)7天,體外誘導(dǎo)為人成熟樹突細(xì)胞(mDC); ELISA檢測培養(yǎng)上清中骨橋蛋白(OPN)水平,RT-PCR檢測人成熟樹突細(xì)胞(mDC)中骨橋蛋白(OPN)基因水平表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)(FACS)鑒定樹突狀細(xì)胞(DC)表型并檢測成熟樹突狀細(xì)胞(mDC)胞內(nèi)骨橋蛋白(i-OPN)表達(dá)水平；使用腺苷替代物(NECA)、特異性A2受體激動(dòng)劑(CGS21680)和特異性A2受體拮抗劑(SCH 58261)探討A2受體(A2R)在調(diào)節(jié)人mDC表達(dá)OPN中發(fā)揮的作用：利用重組人TGF-β1 (rhTGF-β1)及抗TGF-β1單克隆抗體(anti-TGF-β1 Ab)檢測TGF-β1在這一過程中發(fā)揮的作用；采用SPSS13.0 for windows統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：①無論乏氧環(huán)境或常氧環(huán)境下誘導(dǎo)培養(yǎng)的樹突狀細(xì)胞(DC)均可達(dá)到表型成熟。 ②乏氧環(huán)境在分泌蛋白及轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào)mDCs對(duì)OPN的表達(dá),乏氧組OPN的水平較正常氧條件下增加3.28倍,OPN mRNA水平也同步升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)； ③常氧條件下,腺苷替代物(NECA)和A2R激動(dòng)劑均能顯著上調(diào)mDCs對(duì)OPN mRNA的表達(dá)及誘導(dǎo)OPN蛋白的分泌,A2R拮抗劑可同時(shí)在分泌及轉(zhuǎn)錄水平特異性抑制A2R激動(dòng)劑對(duì)OPN的誘導(dǎo)； ④乏氧環(huán)境不能調(diào)控mDC對(duì)i-OPN的表達(dá)。 ⑤A2R信號(hào)激活與否都不參與調(diào)控mDC對(duì)i-OPN的表達(dá)。 ⑥常氧條件下,A2R激動(dòng)劑促使mDCs產(chǎn)生TGF-β1增加1.36倍, A2R拮抗劑下調(diào)mDCs分泌TGF-β1,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；A2R參與調(diào)控免疫調(diào)節(jié)因子TGF-β1水平,通過rhTGF-β1和阻斷抗體證實(shí)TGF-β1參與調(diào)節(jié)OPN的表達(dá)。 結(jié)論：乏氧環(huán)境下高水平腺苷可通過A2R信號(hào)誘導(dǎo)mDC表達(dá)TGF-β1,繼而調(diào)節(jié)OPN的表達(dá)。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R392.9
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
符號(hào)說明
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
附圖表
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間撰寫及發(fā)表的論文
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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2839496