目的:研究中藥柴黃清胰活血顆粒(Chai Huang Qing Yi Huo Xue Granule,CHG)對重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)模型大鼠的治療作用,為柴黃清胰活血顆粒的臨床運用和新藥研究提供實驗依據(jù)。方法:(1)動物分組:將144只成年健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為6組:假手術(shù)組(sham-operation group,Sham),SAP模型組,柴黃清胰活血顆粒低、中、高劑量組(即CHG1、CHG2、CHG3),陽性對照清胰利膽顆粒組(Qing Yi Li Dan Granule,QYG),每組24只。(2)SAP造模:采用經(jīng)十二指腸乳頭逆行胰膽管注射3.5%�；悄懰徕c(Sodium taurocholate,STC)1ml/kg的方法制備大鼠SAP模型;假手術(shù)組開腹后僅翻動腹腔臟器后關(guān)腹。(3)藥物配制:將柴黃清胰活血顆粒流浸膏以90℃蒸餾水溶解后,分別配制為0.04g/ml、0.08g/ml、0.16g/ml濃度的藥液,清胰利膽顆粒用90℃蒸餾水溶解后配制為0.1g/ml濃度的藥液,配制好的藥液按大鼠體重計算,每次10ml/kg灌胃。(4)給藥:待手術(shù)完成各組大鼠麻醉蘇醒后,柴黃清胰活血顆粒低、中、高劑量組分別予以柴黃清胰活血顆粒流浸膏0.04g/ml、0.08g/ml、0.16g/ml濃度的藥液灌胃,清胰利膽顆粒組予以清胰利膽顆粒0.1g/ml的藥液灌胃,每次10ml/kg,每4小時1次,假手術(shù)組及SAP模型組灌胃等量生理鹽水。所有大鼠術(shù)后禁食,自由飲水。(5)取材檢測:術(shù)后12h、24h、48h共3個時間點,每個時間點每個組別各處死大鼠8只,開腹大體解剖觀察后,采用注射器抽吸和無菌棉球吸拭相結(jié)合的方法收集腹水,并稱量計重;腹腔動脈采血,用血細(xì)胞分析儀檢測全血白細(xì)胞(white blood cell,WBC)計數(shù),用全自動生化分析儀檢測血清淀粉酶(serum amylase,AMY)、血清脂肪酶(lipase,LIP)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、肌酸激酶-同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血糖(blood glucose,GLU)、鈣離子(calcium ion,Ca~(2+));采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測血清C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α);完整取出胰腺組織,胰頭部胰腺用天平稱重,在60℃恒溫干燥箱中干燥48h至胰腺體重不再改變后稱重,計算胰腺干濕比;胰體部用4%中性甲醛浸泡24h后做石蠟包被切片,行蘇木素-伊紅(haematoxylin-eosin staining,HE)染色,在光鏡下用Kusske評分法對胰腺病理組織進(jìn)行雙盲評分。結(jié)果:(1)與假手術(shù)組比較,SAP模型組大鼠大體解剖觀察見胰腺組織體積變大,胰腺出現(xiàn)充血、水腫、出血、壞死,胰腺及腸系膜明顯皂化斑,大量黃綠色或淡紅色腹腔積液,胃腸積氣、鼓脹、擴(kuò)張,腸壁充血、水腫,腹腔臟器黏連。胰腺組織HE染色表現(xiàn)為胰腺結(jié)構(gòu)紊亂,甚至嚴(yán)重破壞,腺泡水腫,小葉間隔增大,明顯出血,大量壞死灶及炎細(xì)胞浸潤。SAP模型組大鼠胰腺干濕比降低,胰腺組織病理評分升高,血清AMY、LIP活性增加,全血白細(xì)胞計數(shù)及血清CRP、TNF-α水平升高,鈣離子濃度降低,血糖濃度升高,肝功能受損(AST、ALT活性升高),腎功能受損(BUN濃度升高),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),提示SAP模型大鼠造模成功。(2)與SAP模型組比較,柴黃清胰活血顆粒不同劑量組和清胰利膽顆粒組大體解剖觀察見胰腺體積稍增大,出現(xiàn)充血、水腫及壞死改變,胰腺及周圍少許皂化斑,大體改變跟SAP模型組相似,但病變程度較之減輕,尤其是柴黃清胰活血顆粒高劑量組,壞死范圍小,散在分布,腹水量少。胰腺組織HE染色見胰腺結(jié)構(gòu)基本正常,小葉間充血水腫,少量出血,局灶性壞死灶,少許炎細(xì)胞浸潤。柴黃清胰活血顆粒不同劑量組和清胰利膽顆粒組能減輕胰腺水腫,改善胰腺組織病理評分,降低血清AMY、LIP活性,減少全血白細(xì)胞計數(shù)及血清CRP、TNF-α含量,升高鈣離子濃度,降低血糖濃度,保護(hù)肝功能(AST、ALT活性降低)、腎功能(BUN濃度降低),與SAP模型組比較上述各指標(biāo)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),提示柴黃清胰活血顆粒對重癥急性胰腺炎模型大鼠有治療作用,且其療效呈劑量依賴性。(3)與清胰利膽顆粒組比較,柴黃清胰活血顆粒高劑量組在降低腹水量,改善胰腺組織病理評分,減少全血白細(xì)胞計數(shù)及血清CRP、TNF-α含量,保護(hù)肝功能(AST、ALT活性降低)等方面,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),提示高劑量的柴黃清胰活血顆粒對重癥急性胰腺炎模型大鼠的治療作用優(yōu)于清胰利膽顆粒。結(jié)論:(1)柴黃清胰活血顆粒對重癥急性胰腺炎模型大鼠有治療作用,且其療效呈劑量依賴性。(2)高劑量的柴黃清胰活血顆粒對重癥急性胰腺炎模型大鼠的治療作用優(yōu)于清胰利膽顆粒。
【學(xué)位單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5;R-332
【部分圖文】：

圖 1 SAP 大鼠模型的建立Fig.1 Establishment of SAP rat model2.3 動物給藥和觀察術(shù)后大鼠麻醉清醒后開始灌胃給藥。柴黃清胰活血顆粒低、中、高劑量組和清胰利膽顆粒組用上述配置好的藥液按大鼠體重 10ml/kg 灌胃，每4 小時 1 次。假手術(shù)組和 SAP 模型組灌胃等量生理鹽水。所有大鼠禁食，自由飲水。2.4 標(biāo)本的采集分別于術(shù)后 12h、24h、48h 三個時間點各處死大鼠 8 只取材。以 3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉（1ml/kg）大鼠，開腹后取腹水、血標(biāo)本及胰腺。2.4.1 腹水的采集

圖 2 ELISA 法檢測大鼠血清 TNF-α水平標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig. 2 Standard curve of serum TNF-α level in rats by ELISA.6 血清 CRP 的檢測采用 ELISA 法檢測，檢測原理、操作步驟同 TNF-α，嚴(yán)格按照實驗作步驟進(jìn)行。.7 胰腺組織石蠟包被切片染色.7.1 胰腺組織石蠟包被切片（1）將新鮮胰腺組織放置于 4%中性甲醛溶液中浸泡 24h 固定；（2）分水洗；（3）70%乙醇脫水 30min，80%乙醇脫水 30min，95%乙醇兩各 15min，100%乙醇兩道各 10min，純二甲苯兩道各 1h；（4）浸泡石

1.1 假手術(shù)組 12h、24h、48h 各時間段肉眼觀察，胰腺無明顯變化，大小正常，薄片狀，顏色淡紅光澤，均勻一致，質(zhì)地柔軟，無充血、水腫、壞死改變，胰腺、腸系膜無皂化斑；腹腔內(nèi)無明顯積液，偶見少許血性腹水，考慮為大鼠開腹時手術(shù)切口滲出所致。1.2 SAP 模型組 胰腺組織體積變大，胰腺呈不同程度充血、水腫、出血、壞死。12h 時顏色鮮紅，充血水腫明顯，部分呈黃綠色膿腫樣改變，可見少許鈣化斑；24h 時顏色稍淡，水腫壞死明顯，可見明顯鈣化斑；48h 時顏色偏白，質(zhì)地稍硬，壞死改變明顯、范圍大，可從胰頭部延伸到脾區(qū)，胰腺表面、腸系膜、腹膜等均可見大片黃色凝脂狀皂化斑。各時間段均可見腹腔積液，呈黃綠色或淡紅色；胃腸積氣、鼓脹、擴(kuò)張，腸壁充血、水腫，腹腔臟器黏連。見圖 3。
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