背景及目的:帕金森氏病(Parkinson’s Disease,PD)作為患病率僅次于老年性癡呆(Alzheimer’s Disease,AD)的神經(jīng)退行性疾病,發(fā)病機制目前尚不明了。在既往研究中,認為是環(huán)境因素、遺傳因素、衰老、氧化應激、線粒體功能衰竭、鈣超載等多種因素協(xié)同作用的結(jié)果。近來,神經(jīng)免疫炎癥機制在PD發(fā)病中的作用受到了研究者們的廣泛關(guān)注。對相關(guān)信號通路調(diào)控機制的研究,對闡明PD發(fā)病機制具有重要意義,可以為PD的防治提供方向,而ATP-P2X4R信號軸介導NLRP3炎性小體活化就是這些關(guān)鍵通路之一。明確ATP-P2X4R信號軸介導的神經(jīng)免疫炎癥機制在PD發(fā)病中的作用,過表達P2X4R基因可能通過上調(diào)P2X4R介導的信號通路的表達,增強PD的炎性反應,對DA能神經(jīng)元的損傷作用增強,從側(cè)面證明抑制P2X4R介導的炎性通路對PD的保護作用。探討過表達P2X4基因?qū)?-OHDA誘導的帕金森病(PD)大鼠模型中凋亡蛋白酶caspase-1表達的影響。揭示P2X4對PD發(fā)病機制等作用,為PD的防治提供一個新靶點。方法:120只體重約200-250g Wistar雄性大鼠隨機分為6組:6-OHDA組;對照組;目的基因(RNA-P2X4)+6-OHDA組;單純目的基因(RNA-P2X4)組;陰性病毒(P2X4-NC)+6-OHDA組;單純陰性病毒(P2X4-NC)組。攜帶空載RNA的P2X4-NC慢病毒與上調(diào)P2X4表達的目的RNA-P2X4慢病毒經(jīng)腦立體定位儀定向注射于大鼠左側(cè)黑質(zhì),根據(jù)分組情況經(jīng)腦立體定位儀于大鼠左側(cè)黑質(zhì)定向注射6-OHDA(8ug/2ul)或等量生理鹽水(僅含0.2%抗壞血酸2ul)。模型建立后采用腹腔注射APO誘發(fā)旋轉(zhuǎn)實驗觀察大鼠行為學變化,篩選成功PD大鼠。4周后予大鼠斷頭取腦,利用免疫組織熒光染色法檢測各組大鼠腦組織黑質(zhì)中TH陽性DA神經(jīng)元數(shù)量變化情況,采用Western blot檢測各組P2X4R蛋白、NLRP3蛋白、caspase-1蛋白表達水平,采用RT-PCR法檢測各組P2X4R、NLRP3、caspase-1 m RNA表達水平變化。結(jié)果:與P2X4-NC+6-OHDA組比較,RNA-P2X4+6-OHDA組P2X4R(1.099±0.05569vs 0.7821±0.02008,P(27)0.001)、NLRP3(0.9875±0.01932 vs 0.6645±0.01747,P(27)0.001)、caspase-1(0.9948±0.01788 vs 0.8276±0.04543,P(27)0.001)蛋白表達量均顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)論:在PD動物模型中,P2X4基因過表達可提高PD多巴胺能神經(jīng)元模型中caspase-1蛋白表達水平,促進凋亡反應,有潛在的神經(jīng)損害作用。P2X4在PD發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。
【學位單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R742.5;R-332
【部分圖文】：

圖 1 攜帶目的基因或空載慢病毒在大鼠左側(cè)黑質(zhì)中的分布情況Fig. 1 Expression of target gene or empty lentivirus in left substantia nigra DA neurons in ra（A：TH 陽性多巴胺能神經(jīng)元；B：攜帶目的基因或空載的慢病毒；C：攜帶目的基載慢病毒在 DA 神經(jīng)元中表達）(A:TH positive dopaminergic neurons; B: Expression of target gene or empty lentivirus

圖 2 各組大鼠 DA 神經(jīng)元計數(shù)Fig. 2 The number of DA neurons in each group 對照組；B 6-OHDA 組；C RNA-P2X4 組；D RNA-P2X4+6-OH4-NC 組；F P2X4-NC+6-OHDA 組；1：B vs A，P 0.001；2：D vs F，P the control group, B 6-OHDA group; C RNA-P2X4 group;

圖 3 Western blot 法測定 P2X4R 蛋白含量Fig. 3 Determination of P2X4R protein by Western blot（A：對照組；B：6-OHDA 組；C：RNA-P2X4 組；D：RNA-P2X4+6-E：P2X4-NC 組；F：P2X4-NC+6-OHDA 組；1：B vs A，P 0.001；2：D01）
【參考文獻】

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1 魏祺;程曉曙;;NLRP3炎性小體研究進展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床;2015年01期

2 劉潔,周東,唐勇,楊友松;MPTP誘導帕金森病小鼠黑質(zhì)致密部細胞因子含量變化的研究[J];四川醫(yī)學;2005年05期

3 周厚廣 ,鮑遠程,楊文明,汪瀚,朱紅艷,楊志勇;選擇性毀損帕金森病大鼠模型的建立[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2002年03期

4 王悅,段春禮,張海燕,蘇憶蘭,王元身,鄧一夫,徐群淵;氯化錳對大鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元毒性的研究[J];神經(jīng)解剖學雜志;2001年01期

本文編號：2838118