隨著生命科學和生物技術(shù)的發(fā)展,許多人源的生物活性因子被應(yīng)用于皮膚護理與美容行業(yè),例如表皮細胞生長因子(Epidermal Growth Factor,EGF)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)等。護膚品中功能因子的生物活性是其有效性的關(guān)鍵,然而配方中含有種類多樣的輔料,部分輔料可能對功能因子的生物活性有影響。如何在護膚品配方研制過程中篩選合適的輔料及添加比例是本論文研究的重點。本研究將護膚品中常用的25種輔料,根據(jù)推薦的添加比例設(shè)置高、中、低三個濃度梯度,采用鄰苯三酚法檢測輔料對rh-SOD1生物活性的影響,篩選對rh-SOD1生物活性有影響的輔料;同時以Balb/3T3細胞為細胞模型,采用MTT法檢測輔料對rh-EGF生物活性的影響,篩選對rh-EGF生物活性有影響的輔料;最后,基于rh-EGF對表皮創(chuàng)傷的促愈合作用,采用新西蘭大耳兔,建立皮膚切割傷模型,進一步明確篩選出的輔料對rh-EGF生物活性的影響。主要結(jié)果如下:(1)鄰苯三酚法試驗結(jié)果顯示,0.20%EDTA·2Na在7d之內(nèi)對rh-SOD1生物活性無顯著性影響;0.50%EDTA·2Na在第7d使rh-SOD1生物活性下降到66.53%;1.00%EDTA·2Na在第3d使其生物活性下降到60.09%,第7 d下降到34.52%。其他輔料對rh-SOD1生物活性均無顯著性影響。EDTA作為常見的螯合劑,能夠螯合rh-SOD1中的Cu2+及Zn2+致其失去生物活性。數(shù)據(jù)顯示在保證EDTA·2Na功效的同時可降低其添加比例,以保持rh-SOD1的活性。(2)細胞模型試驗結(jié)果顯示,0.15%和0.40%的大分子透明質(zhì)酸鈉使rh-EGF活性下降到50.42%和45.26%;0.20%和0.40%的黃原膠使rh-EGF活性下降到38.45%和20.55%。其他輔料對rh-EGF生物活性均無顯著性影響。在研制配方的過程中可降低大分子透明質(zhì)酸鈉的添加比例,將不同分子量的透明質(zhì)酸鈉復配使用可以發(fā)揮更好的功效;而黃原膠則可選擇有相同功效的替代品。(3)動物試驗結(jié)果顯示,rh-EGF具有促進兔表皮切割傷愈合的作用,在本試驗測試的rh-EGF濃度范圍內(nèi)(0.5-100μg/ml),比生理鹽水組平均愈合時間提前了1~3 d;并且顯示良好的劑量效應(yīng),隨著劑量的升高,促愈合作用進一步增強;100μg/ml rh-EGF促創(chuàng)面愈合效果最為明顯。同時,rh-EGF處理可以使其毛發(fā)再生,也呈現(xiàn)良好的劑量效應(yīng),推測可能是由于促進瘢痕處毛囊干細胞的增值、分裂,加快瘢痕處新生毛囊的形成。0.40%黃原膠組和10μg/m L rh-EGF+0.40%黃原膠組的創(chuàng)面愈合時間都比生理鹽水組晚1d,黃原膠能抑制rh-EGF的促皮膚切割傷愈合作用,與細胞試驗結(jié)果一致。0.40%透明質(zhì)酸鈉組和10μg/m L rh-EGF+0.40%透明質(zhì)酸鈉組的創(chuàng)面愈合時間與生理鹽水組相比提前了2 d,與10μg/m L rh-EGF組的愈合時間相同,與細胞試驗結(jié)果并不一致。這可能與透明質(zhì)酸特有的生理功能有關(guān),其本身是細胞外基質(zhì)的主要組成成份之一,具有促進傷口愈合的功能。
【學位單位】：浙江農(nóng)林大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R641;R-332
【部分圖文】：

本研究使用的 SOD 為 Cu,Zn-SOD，1975 年得到其三維結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)它是由 2 個基本相似的亞基組成的二聚體，且每個亞基含有 1 個銅原子和 1 個鋅原子。2 個亞基之間通過非共價的疏水相互作用締合。每個亞基活性中心金屬的配位結(jié)構(gòu)如圖1-1所示。圖 1-1 天然 SOD 活性中心配位結(jié)構(gòu)Figure1-1 The active center coordination structure of natural SOD

Zn-SOD 酶活性中心結(jié)構(gòu)gure1-2 The Enzyme activity center structure of Cu,Zn-定 Cu,Zn-SOD 的活性中心，得出由兩個亞基組的一個“疏水口袋”，如圖 2 所示[32]。這一疏一帶正電的精氨酸殘基 Argue141，它不但能，還可以在催化反應(yīng)中提供質(zhì)子，加快催化反的理化性質(zhì)子量約為 15000~17000 的兩個亞基所組成，分紫外吸收峰在 250~270 nm 處，280 nm 處無u,Zn-SOD 在 680 nm 附近有明顯吸收峰。Cu+與 Zn+具有不同的生理生化作用，Cu2+為 Cu+則 Cu,Zn-SOD 酶活性全部喪失，重新加

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