【摘要】：研究背景:在腰部,多裂肌位于豎脊肌的深部,主要起穩(wěn)定腰椎,保證各個(gè)腰椎的緊密連接、并精細(xì)分配腰椎所受壓力的作用。一旦腰多裂肌受到損傷影響多裂肌正常功能的發(fā)揮,就會(huì)破壞腰椎正常穩(wěn)定狀態(tài)引發(fā)腰痛。據(jù)調(diào)查顯示:西方國家有2/3的人群受腰痛影響,因腰痛引起的殘疾更為位居世界前位,給千千萬家庭帶來了痛苦。因此,促進(jìn)損傷多裂肌的修復(fù)和功能重建對(duì)于治療急慢性腰痛,提高腰痛患者生活質(zhì)量尤為重要,也將為針刺治療腰痛提供更有力的證據(jù)。針刺委中穴對(duì)腰痛的獨(dú)特治療作用已得到針灸臨床的一致認(rèn)可。然而綜合分析以往文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),在委中促進(jìn)骨骼肌損傷的再生與修復(fù)方面尚未有較好的研究成果。肌肉損傷后,肌衛(wèi)星細(xì)胞的激活是肌肉修復(fù)的前提,它的激活需要自體吞噬系統(tǒng)(自噬)的參與,因此,自噬水平的高低直接影響到修復(fù)的質(zhì)量和時(shí)間。本研究擬從組織形態(tài)學(xué)對(duì)對(duì)多裂肌進(jìn)行觀察;另一方面通過觀察電針“委中”穴對(duì)自噬相關(guān)蛋白Beclin1、p62表達(dá)的影響,進(jìn)一步探索電針委中穴、自噬以及多裂肌損傷修復(fù)三者之間的關(guān)系。研究目的:1.從組織形態(tài)學(xué)方面觀察布比卡因所致的腰多裂肌損傷大鼠模型的恢復(fù)情況,并對(duì)比布比卡因所致的腰多裂肌損傷大鼠模型自噬通路被阻斷時(shí)的恢復(fù)情況。2.從Beclin1、p62的定量表達(dá)方面觀察電針“委中”穴對(duì)大鼠腰多裂肌損傷后自噬對(duì)修復(fù)過程的影響。研究方法:實(shí)驗(yàn)一:大鼠腰多裂肌損傷模型觀察。體重為290-320g的54只健康SPF級(jí)雄性大鼠,隨機(jī)分籠飼養(yǎng),適應(yīng)性喂養(yǎng)7天,隨機(jī)分為空白組、實(shí)驗(yàn)組和實(shí)驗(yàn)抑制劑組,每組18只大鼠,每組大鼠又隨機(jī)分為1天、3天、7天三個(gè)小組,每個(gè)小組6只大鼠。實(shí)驗(yàn)組大鼠,10%水合氯醛以每千克350mg的量進(jìn)行腹腔注射麻醉,選擇背部第4/5腰椎脊柱水平兩旁的4個(gè)點(diǎn),使用一次性4號(hào)針頭注射器抽取0.5%布比卡因肌肉注射400 μ L(每個(gè)點(diǎn)100μL),針頭緊貼棘突旁進(jìn)入肌肉,直到接觸關(guān)節(jié)突和乳突所在的骨面回抽套管1mm無血,說明此時(shí)已到達(dá)多裂肌,各點(diǎn)分別注射布比卡因100 μL,每個(gè)點(diǎn)注射時(shí)間必須大于3秒,以保證藥物的充分吸收。單次注射布比卡因完成造模。造模后,實(shí)驗(yàn)組給予生理鹽水于損傷局部皮下注射(0.1mg/kg),1次/d;實(shí)驗(yàn)抑制劑組行LY294002損傷局部皮下注射(0.1mg/kg),1次/d。每組分別在造模后的第1d、3d、7d同步取材各6只,并在光學(xué)顯微鏡下觀察鐵蘇木素染色、Masson染色、HE染色對(duì)三組大鼠腰部多裂肌形態(tài)學(xué)表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)二:體質(zhì)量280～310g72只SPF級(jí)健康成年雄性SD大鼠,隨機(jī)分籠飼養(yǎng),在適應(yīng)性喂養(yǎng)7天之后,所有大鼠按體質(zhì)量分層,采用隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、模型組、電針委中組,每組24只,這三組大鼠再隨機(jī)分為1天、3天、7天三個(gè)小組,每個(gè)小組8只大鼠。采用10%水合氯醛以每千克350mg的使用量進(jìn)行腹腔注射麻醉,背部備皮,操作全程保持無菌。選擇脊柱L4、L5水平兩旁的4個(gè)點(diǎn),使用一次性4號(hào)針頭注射器抽取0.5%布比卡因肌肉注射400 μL(每個(gè)點(diǎn)100 μL),針頭緊貼棘突旁進(jìn)入肌肉,直到接觸關(guān)節(jié)突和乳突所在的骨面回抽套管1mm無血,說明此時(shí)針頭已到達(dá)多裂肌,各點(diǎn)分別注射布比卡因100 μL,時(shí)間必須大于3秒,以利于藥物的充分吸收。空白組不做任何處理。造模完成后,電針委中組進(jìn)行每日一次的電針委中治療。然后在光學(xué)顯微鏡觀察HE染色后各組大鼠損傷多裂肌在第1天、3天、7天的組織形態(tài)學(xué)變化,采用免疫組化法和Western Blotting法觀察多裂肌中Beclin1,p62表達(dá)含量的動(dòng)態(tài)變化。以電針委中穴、自噬、多裂肌損傷修復(fù)為著眼點(diǎn)進(jìn)一步探索電針委中穴促進(jìn)多裂肌損傷修復(fù)的作用機(jī)理。研究結(jié)果:1.造模后多裂肌恢復(fù)的不同時(shí)間點(diǎn)通過3種染色方法(HE染色、Masson染色、鐵蘇木素染色)發(fā)現(xiàn)多裂肌組織形態(tài)學(xué)改變顯著,除了造模后的第1天兩組多裂肌在組織形態(tài)學(xué)上的表現(xiàn)相似,其余第3、7天實(shí)驗(yàn)組骨骼肌恢復(fù)情況均比實(shí)驗(yàn)抑制劑組好。2.電針“委中”穴對(duì)布比卡因所致大鼠腰多裂肌損傷后不同階段自噬相關(guān)蛋白Beclin1、p62表達(dá)的影響。1天、3天、7天模型組的Beclin1表達(dá)含量均高于空白組(P0.01),3天、7天電針委中組的Beclin1表達(dá)含量高于模型組(P0.05);3天、7天模型組p62表達(dá)含量低于空白組(P0.05);1天、3天、7天電針委中組p62表達(dá)低于模型組(P0.05)。研究結(jié)論:1.通過三種染色方法觀察受損多裂肌,發(fā)現(xiàn)自噬信號(hào)通路抑制劑LY294002可特異性阻止自噬的發(fā)生,可使骨骼肌損傷后的修復(fù)進(jìn)程相對(duì)延緩。2.電針委中穴可促進(jìn)自噬蛋白Beclin1的表達(dá)上調(diào),提高自噬水平,促進(jìn)p62蛋白的分解,縮短肌細(xì)胞壞死的進(jìn)程,加速損傷肌纖維的再生,有利于骨骼肌損傷后的修復(fù)。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R245;R-332
【圖文】：

空白組Ｂｅｃｌｉｎｌ的表達(dá)量相對(duì)較低，治療１天后，模型組與電針委中組逡逑大鼠腰多裂�。拢澹悖欤椋睿斓谋磉_(dá)無明顯差異（乃０．０５），但電針委中組的表達(dá)量有明顯上逡逑升；空白組的表達(dá)低于電針委中Ｄ組和模型組（Ｋ０．邋０１）；治療３天后，模型組高于空逡逑白組（Ｋ０．邋０１），電針委中組的表達(dá)高于空白組和模型組（Ｋ０．邋０５）；治療后第７天，逡逑模型組與電針委中組的表達(dá)均高于空白組（Ｋ０．邋０１），電針委中組Ｂｅｃｌｉｎｌ表達(dá)量高于逡逑模型組（Ｋ０．邋０５）。逡逑表１各組大鼠不同時(shí)段多裂�。拢澹悖欤椋睿毂磉_(dá)ＭＯＤ值比較（ｘｉ５）逡逑組別邐ｎ邐１天邐３天邐７天逡逑空白組邐８邐０．５２＋０．邋１０邐０．邋５０±０，邋１８邐０．５０±０，邋１７逡逑模型組邐８邐１．０８±０．２０ａ邐１．邋１５±０．２４ｂ邐０．８５±０．邋１９ｂ逡逑電針委中組邐８邐１．２６±０．３８ｂ邐１．４０±０．邋１７ｂｃ邐１．０８±０．０８ｂｃ逡逑注：與空白組比較，ａＫ０．０５，邋ｂＫ０．邋０１；與模型組比較，７＜０．０５逡逑

空白組ｐ６２表達(dá)含量較高，治療１天后，大鼠腰多裂�。穑叮驳谋磉_(dá)模型逡逑組與空白組無明顯差異（？＞０．０５），但模型組的表達(dá)量己有下降趨勢(shì)，電針委中組的表逡逑達(dá)量明顯低于空白組和模型組（Ｐ＜0．0５）；治療３天、７天后，模型組明顯低于空白組逡逑（Ｐ＜０．０５），電針委中組的表達(dá)量低于模型組（Ｐ＜０．０１）。各組大鼠不同時(shí)段腰多裂肌逡逑ｐ６２表達(dá)免疫組化染色結(jié)果見圖３。逡逑表２各組大鼠不同時(shí)段多裂�。校叮脖磉_(dá)ＭＯＤ值比較Ｇｉｓ）逡逑組別邐ｎ邐１天邐３天邐７天逡逑空白組邐８邐１．２６±０．３０邐１．２９±０．邋１７邐０．８９±０．邋１１逡逑模型組邐８邐１．邋１３±０，邋１８邐１．０１±０．２８１＇邐０．７２±０．２３ａ逡逑電針委中組邐８邐０．邋７１±０．２４＾邋０．６５±０．邋１６ｂｔ邋０．４７＋０．０９ｂｄ逡逑注：與空白組比較，ＷＯ．邋０５，邋ｂＫ０．邋０１；與模型組比較，Ｗ０．０１，邋ｄ／ｍ0５。逡逑

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本文編號(hào)：2823665