【摘要】：研究背景:在腰部,多裂肌位于豎脊肌的深部,主要起穩(wěn)定腰椎,保證各個腰椎的緊密連接、并精細分配腰椎所受壓力的作用。一旦腰多裂肌受到損傷影響多裂肌正常功能的發(fā)揮,就會破壞腰椎正常穩(wěn)定狀態(tài)引發(fā)腰痛。據(jù)調(diào)查顯示:西方國家有2/3的人群受腰痛影響,因腰痛引起的殘疾更為位居世界前位,給千千萬家庭帶來了痛苦。因此,促進損傷多裂肌的修復和功能重建對于治療急慢性腰痛,提高腰痛患者生活質量尤為重要,也將為針刺治療腰痛提供更有力的證據(jù)。針刺委中穴對腰痛的獨特治療作用已得到針灸臨床的一致認可。然而綜合分析以往文獻發(fā)現(xiàn),在委中促進骨骼肌損傷的再生與修復方面尚未有較好的研究成果。肌肉損傷后,肌衛(wèi)星細胞的激活是肌肉修復的前提,它的激活需要自體吞噬系統(tǒng)(自噬)的參與,因此,自噬水平的高低直接影響到修復的質量和時間。本研究擬從組織形態(tài)學對對多裂肌進行觀察;另一方面通過觀察電針“委中”穴對自噬相關蛋白Beclin1、p62表達的影響,進一步探索電針委中穴、自噬以及多裂肌損傷修復三者之間的關系。研究目的:1.從組織形態(tài)學方面觀察布比卡因所致的腰多裂肌損傷大鼠模型的恢復情況,并對比布比卡因所致的腰多裂肌損傷大鼠模型自噬通路被阻斷時的恢復情況。2.從Beclin1、p62的定量表達方面觀察電針“委中”穴對大鼠腰多裂肌損傷后自噬對修復過程的影響。研究方法:實驗一:大鼠腰多裂肌損傷模型觀察。體重為290-320g的54只健康SPF級雄性大鼠,隨機分籠飼養(yǎng),適應性喂養(yǎng)7天,隨機分為空白組、實驗組和實驗抑制劑組,每組18只大鼠,每組大鼠又隨機分為1天、3天、7天三個小組,每個小組6只大鼠。實驗組大鼠,10%水合氯醛以每千克350mg的量進行腹腔注射麻醉,選擇背部第4/5腰椎脊柱水平兩旁的4個點,使用一次性4號針頭注射器抽取0.5%布比卡因肌肉注射400 μ L(每個點100μL),針頭緊貼棘突旁進入肌肉,直到接觸關節(jié)突和乳突所在的骨面回抽套管1mm無血,說明此時已到達多裂肌,各點分別注射布比卡因100 μL,每個點注射時間必須大于3秒,以保證藥物的充分吸收。單次注射布比卡因完成造模。造模后,實驗組給予生理鹽水于損傷局部皮下注射(0.1mg/kg),1次/d;實驗抑制劑組行LY294002損傷局部皮下注射(0.1mg/kg),1次/d。每組分別在造模后的第1d、3d、7d同步取材各6只,并在光學顯微鏡下觀察鐵蘇木素染色、Masson染色、HE染色對三組大鼠腰部多裂肌形態(tài)學表達情況。實驗二:體質量280～310g72只SPF級健康成年雄性SD大鼠,隨機分籠飼養(yǎng),在適應性喂養(yǎng)7天之后,所有大鼠按體質量分層,采用隨機數(shù)字表法分為空白組、模型組、電針委中組,每組24只,這三組大鼠再隨機分為1天、3天、7天三個小組,每個小組8只大鼠。采用10%水合氯醛以每千克350mg的使用量進行腹腔注射麻醉,背部備皮,操作全程保持無菌。選擇脊柱L4、L5水平兩旁的4個點,使用一次性4號針頭注射器抽取0.5%布比卡因肌肉注射400 μL(每個點100 μL),針頭緊貼棘突旁進入肌肉,直到接觸關節(jié)突和乳突所在的骨面回抽套管1mm無血,說明此時針頭已到達多裂肌,各點分別注射布比卡因100 μL,時間必須大于3秒,以利于藥物的充分吸收�？瞻捉M不做任何處理。造模完成后,電針委中組進行每日一次的電針委中治療。然后在光學顯微鏡觀察HE染色后各組大鼠損傷多裂肌在第1天、3天、7天的組織形態(tài)學變化,采用免疫組化法和Western Blotting法觀察多裂肌中Beclin1,p62表達含量的動態(tài)變化。以電針委中穴、自噬、多裂肌損傷修復為著眼點進一步探索電針委中穴促進多裂肌損傷修復的作用機理。研究結果:1.造模后多裂肌恢復的不同時間點通過3種染色方法(HE染色、Masson染色、鐵蘇木素染色)發(fā)現(xiàn)多裂肌組織形態(tài)學改變顯著,除了造模后的第1天兩組多裂肌在組織形態(tài)學上的表現(xiàn)相似,其余第3、7天實驗組骨骼肌恢復情況均比實驗抑制劑組好。2.電針“委中”穴對布比卡因所致大鼠腰多裂肌損傷后不同階段自噬相關蛋白Beclin1、p62表達的影響。1天、3天、7天模型組的Beclin1表達含量均高于空白組(P0.01),3天、7天電針委中組的Beclin1表達含量高于模型組(P0.05);3天、7天模型組p62表達含量低于空白組(P0.05);1天、3天、7天電針委中組p62表達低于模型組(P0.05)。研究結論:1.通過三種染色方法觀察受損多裂肌,發(fā)現(xiàn)自噬信號通路抑制劑LY294002可特異性阻止自噬的發(fā)生,可使骨骼肌損傷后的修復進程相對延緩。2.電針委中穴可促進自噬蛋白Beclin1的表達上調(diào),提高自噬水平,促進p62蛋白的分解,縮短肌細胞壞死的進程,加速損傷肌纖維的再生,有利于骨骼肌損傷后的修復。
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R245;R-332
【圖文】：

空白組Ｂｅｃｌｉｎｌ的表達量相對較低，治療１天后，模型組與電針委中組逡逑大鼠腰多裂�。拢澹悖欤椋睿斓谋磉_無明顯差異（乃０．０５），但電針委中組的表達量有明顯上逡逑升；空白組的表達低于電針委中Ｄ組和模型組（Ｋ０．邋０１）；治療３天后，模型組高于空逡逑白組（Ｋ０．邋０１），電針委中組的表達高于空白組和模型組（Ｋ０．邋０５）；治療后第７天，逡逑模型組與電針委中組的表達均高于空白組（Ｋ０．邋０１），電針委中組Ｂｅｃｌｉｎｌ表達量高于逡逑模型組（Ｋ０．邋０５）。逡逑表１各組大鼠不同時段多裂�。拢澹悖欤椋睿毂磉_ＭＯＤ值比較（ｘｉ５）逡逑組別邐ｎ邐１天邐３天邐７天逡逑空白組邐８邐０．５２＋０．邋１０邐０．邋５０±０，邋１８邐０．５０±０，邋１７逡逑模型組邐８邐１．０８±０．２０ａ邐１．邋１５±０．２４ｂ邐０．８５±０．邋１９ｂ逡逑電針委中組邐８邐１．２６±０．３８ｂ邐１．４０±０．邋１７ｂｃ邐１．０８±０．０８ｂｃ逡逑注：與空白組比較，ａＫ０．０５，邋ｂＫ０．邋０１；與模型組比較，７＜０．０５逡逑

空白組ｐ６２表達含量較高，治療１天后，大鼠腰多裂�。穑叮驳谋磉_模型逡逑組與空白組無明顯差異（？＞０．０５），但模型組的表達量己有下降趨勢，電針委中組的表逡逑達量明顯低于空白組和模型組（Ｐ＜0．0５）；治療３天、７天后，模型組明顯低于空白組逡逑（Ｐ＜０．０５），電針委中組的表達量低于模型組（Ｐ＜０．０１）。各組大鼠不同時段腰多裂肌逡逑ｐ６２表達免疫組化染色結果見圖３。逡逑表２各組大鼠不同時段多裂�。校叮脖磉_ＭＯＤ值比較Ｇｉｓ）逡逑組別邐ｎ邐１天邐３天邐７天逡逑空白組邐８邐１．２６±０．３０邐１．２９±０．邋１７邐０．８９±０．邋１１逡逑模型組邐８邐１．邋１３±０，邋１８邐１．０１±０．２８１＇邐０．７２±０．２３ａ逡逑電針委中組邐８邐０．邋７１±０．２４＾邋０．６５±０．邋１６ｂｔ邋０．４７＋０．０９ｂｄ逡逑注：與空白組比較，ＷＯ．邋０５，邋ｂＫ０．邋０１；與模型組比較，Ｗ０．０１，邋ｄ／ｍ0５。逡逑

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本文編號：2823665