目的:本研究將通過體內模擬轉染環(huán)境構建轉染大鼠模型,從體內探究microRNA-24對成年雄性大鼠血管組織形態(tài)學、血管內皮細胞eNOS表達、活性、eNOSmRNA表達及血漿NO的影響,從而探究microRNA-24參與雄性大鼠血管內皮細胞調節(jié)的作用機理及高血壓發(fā)生過程相關機制。方法:1、構建microRNA-24高表達質粒,構建體內轉染大鼠模型:選取6-8周齡SD(SPF級)健康雄性大鼠和自發(fā)性高血壓大鼠(SHR),參照前人的研究方法體內模擬轉染環(huán)境,通過瞬時轉染技術,分別給予大鼠尾靜脈注射microRNA-24高表達質粒和空白質粒,留取血管組織切片,熒光顯微鏡下觀察各質粒在體內的表達情況,驗證轉染大鼠模型的成功構建。2、實驗驗證:(1)檢測大鼠血管組織的綠色熒光;(2)使用HE染色觀察轉染后大鼠血管組織形態(tài)變化;(3)使用免疫組織化學方法觀察轉染后大鼠血管組織eNOS蛋白的變化;(4)ELISA法檢測轉染大鼠血漿eNOS活性;(5)硝酸還原法檢測大鼠血漿中代謝物NO的含量;(6)RT-PCR分析大鼠血管組織eNOS mRNA表達。結果:1、健康成年雄性大鼠經(jīng)過尾靜脈注射microRNA-24高表達質粒和空白質粒后,兩組的大鼠血管組織均可檢測到綠色熒光。結果表明質粒被引入到大鼠動脈組織中并且成功構建了轉染的大鼠模型;2、空白質粒SD組血管組織各層結構緊密,內膜光滑,中膜彈性纖維正常,與空白質粒SD組相比,microRNA-24SD組、SHR組大鼠的血管組織未見明顯改變;3、給予microRNA-24質粒注射后的正常大鼠血管組織eNOS蛋白表達量明顯低于空白質粒組,水平接近于SHR組;4、經(jīng)過microRNA-24質粒注射處理后,大鼠血漿eNOS活性相對于空白質粒組明顯下降(P0.05),水平接近于SHR組;5、給予microRNA-24質粒注射的血漿代謝產物NO合成與釋放量明顯低于空白質粒組(P0.01),水平接近于SHR組;5、給予microRNA-24質粒注射的eNOS mRNA表達顯著低于空質粒組(P0.05),降低程度接近SHR組,差別有統(tǒng)計學意義。結論:1、該實驗成功地建立了體內轉染大鼠模型,可為今后的研究和其他疾病研究提供充分的理論和試驗基礎;2、大鼠血管組織eNOS的表達、活性受到microRNA-24水平上升的抑制;3、microRNA-24的過表達抑制血漿代謝物NO的合成和釋放;4、microRNA-24過表達可抑制大鼠血管組織eNOSmRNA的表達;5、microRNA-24可能通過抑制eNOS的表達、酶活性及其代謝產物NO的合成釋放影響血管組織狀態(tài)、血壓平衡從而致使高血壓等心血管疾病的產生和發(fā)展;6、microRNA-24有望為制備分子藥物和預防、治療高血壓及其他疾病提供基礎。
【學位單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R-332
【部分圖文】：

取大鼠血管組織進行冰凍切片，顯微鏡下觀察各組的熒光表達，具體情況詳見圖3-1。結果顯示，各組的大鼠血管組織皆可檢測到綠色熒光。結果提示，質粒已轉入大鼠動脈血管組織。cd圖 3-1 大鼠動脈血管組織的綠色熒光表達（400×）

圖 3-2 大鼠血清 NO 的含量(**P<0.01 與空白質粒 SD 組比較， x s ,n 5）Figure 3-2 The levels of serum NO in rats(**P<0.01 compared with blank plasmid SD group, x s ,n 5)3、大鼠血管組織形態(tài)學 HE 染色為了探討 microRNA-24 對血管組織的影響，我們對大鼠動脈血管組織進行HE染色分析，以此來觀察實驗大鼠血管內皮形態(tài)改變（如圖 3-3）。結果發(fā)現(xiàn)，空白質粒 SD 組血管組織各層結構緊密，內膜光滑，中膜彈力纖維正常。與空白質粒 SD 組相比，microRNA-24SD組大鼠的血管組織形態(tài)學改變并不明顯；SHR 組血管內皮常見局部

圖 3-3 大鼠血管組織 HE 染色（400×）（a）microRNA-24SD 組；（b）空白質粒 SD 組；（c）microRNA-24SHR 組；（d）空白質粒 SHR 組Figure 3-3 The H＆E staining of rat vascular tissue（400×）(a) microRNA-24SD group; (b) blank plasmid SD group; (c) microRNA-24SHR group; (d)blank plasmid SHR group4、大鼠血管組織 eNOS 蛋白的半定量表達分析為了研究 microRNA-24 對大鼠產生影響時 eNOS 的表達模式，

【參考文獻】

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本文編號：2823412