目的:本研究將通過體內(nèi)模擬轉(zhuǎn)染環(huán)境構(gòu)建轉(zhuǎn)染大鼠模型,從體內(nèi)探究microRNA-24對成年雄性大鼠血管組織形態(tài)學(xué)、血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS表達(dá)、活性、eNOSmRNA表達(dá)及血漿NO的影響,從而探究microRNA-24參與雄性大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)節(jié)的作用機(jī)理及高血壓發(fā)生過程相關(guān)機(jī)制。方法:1、構(gòu)建microRNA-24高表達(dá)質(zhì)粒,構(gòu)建體內(nèi)轉(zhuǎn)染大鼠模型:選取6-8周齡SD(SPF級)健康雄性大鼠和自發(fā)性高血壓大鼠(SHR),參照前人的研究方法體內(nèi)模擬轉(zhuǎn)染環(huán)境,通過瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù),分別給予大鼠尾靜脈注射microRNA-24高表達(dá)質(zhì)粒和空白質(zhì)粒,留取血管組織切片,熒光顯微鏡下觀察各質(zhì)粒在體內(nèi)的表達(dá)情況,驗證轉(zhuǎn)染大鼠模型的成功構(gòu)建。2、實驗驗證:(1)檢測大鼠血管組織的綠色熒光;(2)使用HE染色觀察轉(zhuǎn)染后大鼠血管組織形態(tài)變化;(3)使用免疫組織化學(xué)方法觀察轉(zhuǎn)染后大鼠血管組織eNOS蛋白的變化;(4)ELISA法檢測轉(zhuǎn)染大鼠血漿eNOS活性;(5)硝酸還原法檢測大鼠血漿中代謝物NO的含量;(6)RT-PCR分析大鼠血管組織eNOS mRNA表達(dá)。結(jié)果:1、健康成年雄性大鼠經(jīng)過尾靜脈注射microRNA-24高表達(dá)質(zhì)粒和空白質(zhì)粒后,兩組的大鼠血管組織均可檢測到綠色熒光。結(jié)果表明質(zhì)粒被引入到大鼠動脈組織中并且成功構(gòu)建了轉(zhuǎn)染的大鼠模型;2、空白質(zhì)粒SD組血管組織各層結(jié)構(gòu)緊密,內(nèi)膜光滑,中膜彈性纖維正常,與空白質(zhì)粒SD組相比,microRNA-24SD組、SHR組大鼠的血管組織未見明顯改變;3、給予microRNA-24質(zhì)粒注射后的正常大鼠血管組織eNOS蛋白表達(dá)量明顯低于空白質(zhì)粒組,水平接近于SHR組;4、經(jīng)過microRNA-24質(zhì)粒注射處理后,大鼠血漿eNOS活性相對于空白質(zhì)粒組明顯下降(P0.05),水平接近于SHR組;5、給予microRNA-24質(zhì)粒注射的血漿代謝產(chǎn)物NO合成與釋放量明顯低于空白質(zhì)粒組(P0.01),水平接近于SHR組;5、給予microRNA-24質(zhì)粒注射的eNOS mRNA表達(dá)顯著低于空質(zhì)粒組(P0.05),降低程度接近SHR組,差別有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:1、該實驗成功地建立了體內(nèi)轉(zhuǎn)染大鼠模型,可為今后的研究和其他疾病研究提供充分的理論和試驗基礎(chǔ);2、大鼠血管組織eNOS的表達(dá)、活性受到microRNA-24水平上升的抑制;3、microRNA-24的過表達(dá)抑制血漿代謝物NO的合成和釋放;4、microRNA-24過表達(dá)可抑制大鼠血管組織eNOSmRNA的表達(dá);5、microRNA-24可能通過抑制eNOS的表達(dá)、酶活性及其代謝產(chǎn)物NO的合成釋放影響血管組織狀態(tài)、血壓平衡從而致使高血壓等心血管疾病的產(chǎn)生和發(fā)展;6、microRNA-24有望為制備分子藥物和預(yù)防、治療高血壓及其他疾病提供基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R-332
【部分圖文】：

取大鼠血管組織進(jìn)行冰凍切片，顯微鏡下觀察各組的熒光表達(dá)，具體情況詳見圖3-1。結(jié)果顯示，各組的大鼠血管組織皆可檢測到綠色熒光。結(jié)果提示，質(zhì)粒已轉(zhuǎn)入大鼠動脈血管組織。cd圖 3-1 大鼠動脈血管組織的綠色熒光表達(dá)（400×）

圖 3-2 大鼠血清 NO 的含量(**P<0.01 與空白質(zhì)粒 SD 組比較， x s ,n 5）Figure 3-2 The levels of serum NO in rats(**P<0.01 compared with blank plasmid SD group, x s ,n 5)3、大鼠血管組織形態(tài)學(xué) HE 染色為了探討 microRNA-24 對血管組織的影響，我們對大鼠動脈血管組織進(jìn)行HE染色分析，以此來觀察實驗大鼠血管內(nèi)皮形態(tài)改變（如圖 3-3）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，空白質(zhì)粒 SD 組血管組織各層結(jié)構(gòu)緊密，內(nèi)膜光滑，中膜彈力纖維正常。與空白質(zhì)粒 SD 組相比，microRNA-24SD組大鼠的血管組織形態(tài)學(xué)改變并不明顯；SHR 組血管內(nèi)皮常見局部

圖 3-3 大鼠血管組織 HE 染色（400×）（a）microRNA-24SD 組；（b）空白質(zhì)粒 SD 組；（c）microRNA-24SHR 組；（d）空白質(zhì)粒 SHR 組Figure 3-3 The H＆E staining of rat vascular tissue（400×）(a) microRNA-24SD group; (b) blank plasmid SD group; (c) microRNA-24SHR group; (d)blank plasmid SHR group4、大鼠血管組織 eNOS 蛋白的半定量表達(dá)分析為了研究 microRNA-24 對大鼠產(chǎn)生影響時 eNOS 的表達(dá)模式，

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2823412