目的:研究免疫補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白C1抑制物(C1INH)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞向經(jīng)典活化巨噬細(xì)胞(M1)和選擇性激活巨噬細(xì)胞(M2)的極化作用。方法:首先從人血中分離單核細(xì)胞后,單核細(xì)胞在巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)或粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)作用下轉(zhuǎn)變?yōu)殪o態(tài)巨噬細(xì)胞;靜態(tài)巨噬細(xì)胞在干擾素-γ(IFN-γ)或白細(xì)胞介素4(IL-4)+IL-13刺激作用下分別轉(zhuǎn)化為M1或M2。通過流式細(xì)胞儀觀察C1INH對(duì)巨噬細(xì)胞CD14、CD163、CD206表型標(biāo)志物的作用;應(yīng)用RTPCR分析C1INH對(duì)巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子、趨化因子、相關(guān)酶基因表達(dá)影響;利用Western blot方法,探討在炎癥條件下C1INH對(duì)巨噬細(xì)胞CD14結(jié)合Toll樣受體4(TLR4)的影響。結(jié)果:C1INH抑制M-CSF源性M1的CD14、CD163和GM-CSF源性M2的CD206表型。C1INH減少M(fèi)1的腫瘤壞死因子(TNF-α)和IL-6表達(dá),而增加M2的15脂氧合酶(ALOX15)和IL-10表達(dá)。C1INH抑制M1的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(i NOS) mRNA,而提高M(jìn)2的精氨酸酶1(Arg1) mRNA表達(dá)。C1INH促進(jìn)M1的殺菌活性和M2對(duì)菌的吞噬功能。C1INH阻斷CD14-TLR4介導(dǎo)信號(hào)傳導(dǎo)通路。結(jié)論:C1INH調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化。
【部分圖文】：

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均用x±s表示，n=6。采用單因素方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)顯著性評(píng)價(jià)，用SPSS軟件進(jìn)行最小顯著性檢驗(yàn)，計(jì)算各組間比較的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1C1INH對(duì)M1和M2極化表型的作用CD14是M1的表面標(biāo)記物，CD163是M-CSF源性巨噬細(xì)胞分化表面標(biāo)記物，CD206是IL-4誘導(dǎo)的M2表面標(biāo)記物［5，13，14］。在靜態(tài)狀態(tài)下，C1INH抑制M-CSF源性巨噬細(xì)胞的CD14、CD163和GM-CSF源性巨噬細(xì)胞的CD206表面標(biāo)記物的表達(dá)(圖1)。在極化狀態(tài)下，C1INH抑制M1的CD14、CD163和M2的CD206表面標(biāo)記物的表達(dá)(圖2)。結(jié)果提示:C1INH對(duì)巨噬細(xì)胞極化表面標(biāo)志物具有調(diào)節(jié)作用。2.2C1INH對(duì)M1和M2的標(biāo)記基因表達(dá)的影響IFN-γ或IL-13誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化不同的基因表達(dá)趨化因子和細(xì)胞因子是有差異的［5］。我們發(fā)現(xiàn)C1INH抑制M1的TNF-α和IL-6表達(dá)，而增加M2的15-脂氧合酶和IL-10表達(dá)(圖3A～D)。C1INH抑制M1iNOSmＲNA和提高M(jìn)2Arg1mＲNA表達(dá)(圖3E、F)。結(jié)果提示:C1INH具有調(diào)節(jié)M1和M2的標(biāo)記基因趨化因子和細(xì)胞因子分泌及相關(guān)酶表達(dá)。2.3C1INH提高極化巨噬細(xì)胞殺菌活性和對(duì)菌的吞噬功能M1具有很高的殺菌活性［4，6，7］，而M2顯圖1C1INH對(duì)靜息巨噬細(xì)胞(CD14、CD163和CD206)表型的影響Fig．1EffectofC1INHonphenotype(CD14，CD163andCD206)ofrestingmacrophagesNote:FITC-conjugatedantibodiesforCD14(A)，CD163(B)，andCD206(C)wereused.Flowcytometricmeasurementofsurfacemarkerexpressiondepictedasfoldchangeofmeanfluorescenceintensity(MFI)r

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均用x±s表示，n=6。采用單因素方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)顯著性評(píng)價(jià)，用SPSS軟件進(jìn)行最小顯著性檢驗(yàn)，計(jì)算各組間比較的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1C1INH對(duì)M1和M2極化表型的作用CD14是M1的表面標(biāo)記物，CD163是M-CSF源性巨噬細(xì)胞分化表面標(biāo)記物，CD206是IL-4誘導(dǎo)的M2表面標(biāo)記物［5，13，14］。在靜態(tài)狀態(tài)下，C1INH抑制M-CSF源性巨噬細(xì)胞的CD14、CD163和GM-CSF源性巨噬細(xì)胞的CD206表面標(biāo)記物的表達(dá)(圖1)。在極化狀態(tài)下，C1INH抑制M1的CD14、CD163和M2的CD206表面標(biāo)記物的表達(dá)(圖2)。結(jié)果提示:C1INH對(duì)巨噬細(xì)胞極化表面標(biāo)志物具有調(diào)節(jié)作用。2.2C1INH對(duì)M1和M2的標(biāo)記基因表達(dá)的影響IFN-γ或IL-13誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化不同的基因表達(dá)趨化因子和細(xì)胞因子是有差異的［5］。我們發(fā)現(xiàn)C1INH抑制M1的TNF-α和IL-6表達(dá)，而增加M2的15-脂氧合酶和IL-10表達(dá)(圖3A～D)。C1INH抑制M1iNOSmＲNA和提高M(jìn)2Arg1mＲNA表達(dá)(圖3E、F)。結(jié)果提示:C1INH具有調(diào)節(jié)M1和M2的標(biāo)記基因趨化因子和細(xì)胞因子分泌及相關(guān)酶表達(dá)。2.3C1INH提高極化巨噬細(xì)胞殺菌活性和對(duì)菌的吞噬功能M1具有很高的殺菌活性［4，6，7］，而M2顯圖1C1INH對(duì)靜息巨噬細(xì)胞(CD14、CD163和CD206)表型的影響Fig．1EffectofC1INHonphenotype(CD14，CD163andCD206)ofrestingmacrophagesNote:FITC-conjugatedantibodiesforCD14(A)，CD163(B)，andCD206(C)wereused.Flowcytometricmeasurementofsurfacemarkerexpressiondepictedasfoldchangeofmeanfluorescenceintensity(MFI)r

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均用x±s表示，n=6。采用單因素方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)顯著性評(píng)價(jià)，用SPSS軟件進(jìn)行最小顯著性檢驗(yàn)，計(jì)算各組間比較的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1C1INH對(duì)M1和M2極化表型的作用CD14是M1的表面標(biāo)記物，CD163是M-CSF源性巨噬細(xì)胞分化表面標(biāo)記物，CD206是IL-4誘導(dǎo)的M2表面標(biāo)記物［5，13，14］。在靜態(tài)狀態(tài)下，C1INH抑制M-CSF源性巨噬細(xì)胞的CD14、CD163和GM-CSF源性巨噬細(xì)胞的CD206表面標(biāo)記物的表達(dá)(圖1)。在極化狀態(tài)下，C1INH抑制M1的CD14、CD163和M2的CD206表面標(biāo)記物的表達(dá)(圖2)。結(jié)果提示:C1INH對(duì)巨噬細(xì)胞極化表面標(biāo)志物具有調(diào)節(jié)作用。2.2C1INH對(duì)M1和M2的標(biāo)記基因表達(dá)的影響IFN-γ或IL-13誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化不同的基因表達(dá)趨化因子和細(xì)胞因子是有差異的［5］。我們發(fā)現(xiàn)C1INH抑制M1的TNF-α和IL-6表達(dá)，而增加M2的15-脂氧合酶和IL-10表達(dá)(圖3A～D)。C1INH抑制M1iNOSmＲNA和提高M(jìn)2Arg1mＲNA表達(dá)(圖3E、F)。結(jié)果提示:C1INH具有調(diào)節(jié)M1和M2的標(biāo)記基因趨化因子和細(xì)胞因子分泌及相關(guān)酶表達(dá)。2.3C1INH提高極化巨噬細(xì)胞殺菌活性和對(duì)菌的吞噬功能M1具有很高的殺菌活性［4，6，7］，而M2顯圖1C1INH對(duì)靜息巨噬細(xì)胞(CD14、CD163和CD206)表型的影響Fig．1EffectofC1INHonphenotype(CD14，CD163andCD206)ofrestingmacrophagesNote:FITC-conjugatedantibodiesforCD14(A)，CD163(B)，andCD206(C)wereused.Flowcytometricmeasurementofsurfacemarkerexpressiondepictedasfoldchangeofmeanfluorescenceintensity(MFI)r

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