【摘要】：天然免疫系統(tǒng)是機(jī)體抵抗病原體入侵的第一道防線,其中,Ⅰ型干擾素(typeⅠinterferon,IFN-Ⅰ)介導(dǎo)的抗病毒效應(yīng)在天然免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。病毒感染可誘導(dǎo)大多數(shù)類型的細(xì)胞分泌IFN-Ⅰ,后者通過結(jié)合細(xì)胞表面特異性受體(IFN-α/βreceptor,IFNAR)激活經(jīng)典的賈納斯激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(Janus Kinase-signal transducer and activator of transcription,JAK-STAT)信號(hào)通路,最終誘導(dǎo)上百種干擾素刺激基因(ISGs)的表達(dá),直接發(fā)揮抗病毒作用。相反,病毒為了確保自身復(fù)制進(jìn)化出多種拮抗機(jī)制,逃逸IFN-Ⅰ介導(dǎo)的抗病毒效應(yīng)。Ⅰ型單純皰疹病毒(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)是一種雙鏈線性DNA病毒,在人群中感染普遍,且目前尚無有效疫苗和根治其潛伏感染的藥物。大量研究表明,HSV-1能夠進(jìn)化出多種機(jī)制來逃逸宿主的抗病毒天然免疫。然而,目前關(guān)于HSV-1逃逸IFN-Ⅰ下游信號(hào)通路分子機(jī)制的研究尚不透徹。本研究通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)篩選能明顯抑制IFN-β激活的干擾素刺激應(yīng)答元件(ISRE)活性的病毒蛋白,發(fā)現(xiàn)HSV-1編碼的泛素特異性蛋白酶UL36USP具有顯著的抑制效果。UL36USP是存在于HSV-1皮層蛋白UL36氨基端的去泛素化酶結(jié)構(gòu)域,能夠在病毒感染后剪切出來。本研究發(fā)現(xiàn),外源表達(dá)的野生型UL36USP以及缺失去泛素化酶活性的C40A都能夠明顯抑制IFN-β激活的ISRE啟動(dòng)子的活性和ISG54、ISG56的mRNA水平。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),UL36USP通過特異性結(jié)合干擾素受體的亞單位IFNAR2,從而干擾酪氨酸激酶JAK1和TYK2的激活以及下游STAT1、STAT2的激活。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),UL36USP與IFNAR2結(jié)合后,競(jìng)爭(zhēng)抑制了JAK1和IFNAR2的結(jié)合,且阻斷了IFNAR2對(duì)STAT1的招募。通過構(gòu)建UL36USP穩(wěn)定干擾細(xì)胞系,且利用野生型HSV-1和缺失去泛素化酶活性的重組病毒C40A HSV-1,在病毒感染情況下證實(shí)內(nèi)源性的UL36USP同樣能夠與IFNAR2相互作用,阻斷JAK1和IFNAR2的結(jié)合以及對(duì)下游STAT1的招募,且不依賴其去泛素化酶活性,而干擾UL36USP的表達(dá)則抑制效果明顯減弱。這些結(jié)果表明,HSV-1 UL36USP通過靶向結(jié)合IFNAR2,干擾JAK1和IFNAR2的結(jié)合,從而拮抗IFN-Ⅰ介導(dǎo)的信號(hào)通路。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R392

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1 袁慧;Ⅰ型單純皰疹病毒去泛素化酶UL36USP逃逸Ⅰ型干擾素介導(dǎo)的信號(hào)通路的分子機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2804274