本文關(guān)鍵詞：左氧氟沙星在大鼠胃黏膜體外模型中的轉(zhuǎn)運特征及可能參與的載體蛋白相關(guān)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的采用大鼠胃黏膜與Ussing chamber技術(shù)建立胃黏膜體外模型研究左氧氟沙星在體外模型中的跨膜轉(zhuǎn)運特征,并評價藥物濃度、時間、方向、p H值、P-糖蛋白抑制劑(維拉帕米、環(huán)孢素A)及有機陽離子轉(zhuǎn)運體抑制劑(西咪替丁)對左氧氟沙星跨胃黏膜轉(zhuǎn)運的影響。方法1建立左氧氟沙星跨胃黏膜轉(zhuǎn)運體外模型Wistar大鼠術(shù)前禁食24小時,麻醉后開腹,將新鮮胃迅速從腹腔中取出,并使用生理鹽水對漿膜面充分清洗,自胃小彎沿軸向剖開,黏膜面在4℃Krebs-ringer液中輕柔漂洗后,使用水泡法將腺體部分未損壞的胃黏膜層與黏膜下層分離,然后將黏膜層小心地安裝在尤斯擴散池中間的插口內(nèi)固定,膜兩側(cè)擴散池中加入37℃、p H=7.4的Krebs-Ringer液6m L,并通入CO 2/O 2(5%/95%)混合氣體。待此條件下平衡30min后,將溶液換成新鮮Krebs-Ringer液,進行相關(guān)實驗。2左氧氟沙星跨胃黏膜轉(zhuǎn)運研究(1)評價濃度及方向?qū)ψ笱醴承强缥葛つまD(zhuǎn)運的影響實驗吸收方向(黏膜側(cè)到漿膜側(cè)的轉(zhuǎn)運,M-S)實驗:于M側(cè)和S側(cè)分別加入Krebs-Ringer液6ml。M側(cè)加入左氧氟沙星標準品,使其終濃度分別達10、25、50、100、150μg/m L,并分別于20,40,60,80,100,120,140,160min時于S側(cè)取200μl樣品,每次取樣后補充200μL Krebs-Ringer液。使用高效液相色譜法檢測各個樣本中左氧氟沙星濃度。分泌方向(漿膜側(cè)到黏膜側(cè)的轉(zhuǎn)運,S-M)實驗:S側(cè)加入左氧氟沙星標準品,余同吸收方向?qū)嶒灐?2)評價不同的載體蛋白抑制劑對胃黏膜轉(zhuǎn)運的影響實驗M-S:M側(cè)加入含左氧氟沙星50μg·m L-1與載體蛋白抑制劑的Krebs-Ringer液6 m L,S側(cè)加入空白Krebs-Ringer液6m L。于20,40,60,80,100,120,140,160min時從S側(cè)各取樣品200μL,每次取樣后補充200μL Krebs-Ringer液,使用高效液相色譜法檢測各個樣本中左氧氟沙星濃度。S-M:M側(cè)加入含載體蛋白抑制劑的Krebs-Ringer液6 m L,S側(cè)加入含左氧氟沙星50μg·m L-1的Krebs-Ringer液6m L,余同M-S。(3)評價p H對胃黏膜轉(zhuǎn)運的影響實驗將Krebs-ringer液p H值分別調(diào)至4.0、7.4、8.0,重復上述M-S轉(zhuǎn)運實驗。3建立左氧氟沙星檢測的HPLC方法各個時間段樣本經(jīng)微孔濾膜過濾后,使用HPLC進行左氧氟沙星濃度檢測,HPLC條件:流動相為乙腈-50mmol·L-1檸檬酸溶液-1mol·L-1醋酸銨溶液(17:82:1;v/v/v),Welch C18分析柱,流速1.0m L·min-1,紫外檢測波長295nm,柱溫40℃,進樣量20μL。評價專屬性、線性、回收率、精密度、穩(wěn)定性。結(jié)果1對研究左氧氟沙星跨大鼠胃黏膜體外模型轉(zhuǎn)運方式中所涉及的胃黏膜剝離方法、Ussing chamber技術(shù)以及本實驗所用的HPLC對左氧氟沙星的檢測方法穩(wěn)定、可靠。2左氧氟沙星跨大鼠胃黏膜雙向累積透過量均隨時間的增加而增加,各個濃度的左氧氟沙星分泌方向累計透過量均大于其吸收方向的累計透過量。各個濃度的左氧氟沙星累積透過量之間以及各個濃度的左氧氟沙星表觀滲透系數(shù)之間比較無顯著性差異(P0.05);各個濃度的左氧氟沙星分泌方向累計透過量均大于其吸收方向的累計透過量。不同濃度的左氧氟沙星分泌方向Papp明顯大于吸收方向Papp,且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3左氧氟沙星(50μg?m L-1)在p H為4.0、7.4、8.0時的P app值分別為(0.95±0.07),(1.60±0.11),(1.37±0.24),Papp值在p H為7.4時最大,p H=4時的Papp值明顯小于p H=7.4時(P0.01),p H=8.0時Papp值小于p H=7.4(P0.05)。4加入環(huán)孢素A后左氧氟沙星(50ug/m L)Papp(S-M)/Papp(M-S)由2.20變?yōu)?.06(P0.05);加入維拉帕米后左氧氟沙星(50ug/m L)Papp(S-M)/Papp(M-S)由2.20變?yōu)?.08(P0.01);加入西咪替丁后左氧氟沙星(50ug/m L)Papp(S-M)/Papp(M-S)由2.20變?yōu)?.78(P0.05)。結(jié)論1剝離大鼠胃黏膜是本實驗的技術(shù)難點,本實驗中所采用的水泡法能夠達到藥物跨膜轉(zhuǎn)運研究的技術(shù)要求。2不同濃度的左氧氟沙星跨大鼠胃黏膜轉(zhuǎn)運的累積透過量及Papp均具有顯著的方向性差異,且有一定的p H依賴性,并且P-糖蛋白抑制劑環(huán)孢素A及維拉帕米可增加左氧氟沙星的吸收,減少左氧氟沙星的分泌。表明左氧氟沙星在大鼠胃黏膜體外模型中可能以載體蛋白介導的方式進行轉(zhuǎn)運,P-糖蛋白可能參與左氧氟沙星跨胃黏膜轉(zhuǎn)運過程。3有機陽離子轉(zhuǎn)運體抑制劑西咪替丁對左氧氟沙星跨胃黏膜轉(zhuǎn)運無顯著影響,間接說明有機陽離子轉(zhuǎn)運體可能在正常大鼠胃黏膜組織中無表達或者不參與左氧氟沙星跨正常大鼠胃黏膜轉(zhuǎn)運過程。
【關(guān)鍵詞】：左氧氟沙星 胃黏膜 尤斯擴散池 高效液相色譜法 轉(zhuǎn)運
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R573;R-332
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 1 前言13-16
• 2 材料與方法16-22
• 3 結(jié)果22-30
• 4 討論30-35
• 5 結(jié)論35-36
• 6 存在的問題36
• 7 下一步設想36
• 8 參考文獻36-43
• 簡歷43-44
• 致謝44-45
• 文獻綜述45-54
• 1 喹諾酮類抗菌藥轉(zhuǎn)運方式——載體介導的主動轉(zhuǎn)運45-46
• 2 參與轉(zhuǎn)運的載體46-49
• 3 結(jié)論49-50
• 4 參考文獻50-54

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 胡興萍;胡詠梅;張磊;張珊珊;許建明;;左氧氟沙星在人胃黏膜上皮細胞中的攝取特征[J];中國臨床藥理學雜志;2014年08期

2 王華丙;張振義;包銳;陳宇星;;ABC轉(zhuǎn)運蛋白的結(jié)構(gòu)與轉(zhuǎn)運機制[J];生命的化學;2007年03期

3 涂春華;楊冬梓;;P-糖蛋白結(jié)構(gòu)及作用機制[J];中國生物化學與分子生物學報;2009年01期

  本文關(guān)鍵詞：左氧氟沙星在大鼠胃黏膜體外模型中的轉(zhuǎn)運特征及可能參與的載體蛋白相關(guān)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：280225