發(fā)布時間：2020-08-20 13:17

【摘要】：結(jié)核分支桿菌引發(fā)的結(jié)核病仍然是威脅世界人民健康,制約經(jīng)濟發(fā)展的重大傳染病。多藥耐藥分支桿菌的出現(xiàn)以及艾滋病感染患者增加使得形勢更加嚴(yán)峻,因此,當(dāng)前迫切需要研發(fā)更高效的抗菌藥物替代傳統(tǒng)抗生素。嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白(Eosinophil cationic protein,ECP),又名RNase3,屬于人核糖核酸酶A家族的成員,除具有催化單鏈核糖核酸作用還發(fā)現(xiàn)其同時具有抗菌作用,在機體的先天免疫反應(yīng)中扮演重要角色。目的:本文旨在研究ECP的抗分支桿菌作用及其相關(guān)機制。方法:1)胞外水平檢測ECP對快速生長且不致病型的M.aurum分枝桿菌的生長抑制和細(xì)胞沉聚作用,即測定ECP對M.aurum的最小100%抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration,MIC_(100)),與此同時,構(gòu)建小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7感染M.aurum的體外模型并以此模型檢測ECP對細(xì)胞內(nèi)M.aurum的作用并與細(xì)胞外試驗對比;其次,通過實時熒光定量PCR檢測兩個參與自噬重要過程的BECN1和ATG5基因的轉(zhuǎn)錄表達水平,同時采用蛋白免疫印跡和免疫熒光檢測另一個自噬相關(guān)蛋白LC3,驗證ECP是否能誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞自噬;最后,對比添加自噬誘導(dǎo)劑Rapamycin或自噬抑制劑Bafilomycin A和3MA條件下ECP在胞內(nèi)抗菌效果。結(jié)果:ECP能有效抑制M.aurum的生長,體外MIC_(100)低至5 uM;胞內(nèi)MIC_(100)為2 uM,該濃度對小鼠巨噬細(xì)胞無細(xì)胞毒性。相較于對照組,0.75 uM(細(xì)胞內(nèi)的MIC_(100),2 uM)的ECP處理24 h后自噬基因BECN1和ATG5的轉(zhuǎn)錄水平表達顯著上調(diào),與qPCR結(jié)果一致,蛋白免疫印跡證實ECP能提高LC3-Ⅰ轉(zhuǎn)化為LC3-Ⅱ。自噬誘導(dǎo)劑Rapamycin能提高ECP(0.75 uM)對巨噬細(xì)胞內(nèi)M.aurum的抑制作用,與此同時自噬抑制劑Bafilomycin A和3MA均能抑制ECP的作用。結(jié)論:ECP在細(xì)胞內(nèi)外均能有效抑制M.aurum,除通過破壞分支桿菌細(xì)胞壁發(fā)揮抑菌作用,其還能誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的自噬作用,進一步清除細(xì)胞內(nèi)的分支桿菌。
【學(xué)位授予單位】：重慶理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R378.911

【參考文獻】

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1 Ameer Khusro;Chirom Aarti;Paul Agastian;;Anti-tubercular peptides:A quest of future therapeutic weapon to combat tuberculosis[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2016年11期

本文編號：2798023