【摘要】：目的觀察白藜蘆醇對實驗性早發(fā)性卵巢功能不全大鼠抗苗勒管激素、黃體生成素、卵泡刺激素、雌二醇、丙二醛和超氧化物歧化酶水平及卵巢組織中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表達的影響,探討其作用機制。方法將90只5周齡SPF級SD健康雌性大鼠按隨機數(shù)字表法隨機分為低劑量白藜蘆醇灌胃治療組(a組18只)、中劑量白藜蘆醇灌胃治療組(b組18只)、高劑量白藜蘆醇灌胃治療組(c組18只)、模型對照組(d組18只)、空白對照組(e組18只)。空白對照組從造模前的動物中隨機抽取;低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量治療組、模型對照組從成功造模(72只每天給予雷公藤多苷片50mg/kg共灌胃14天根據(jù)觀測指標確定早發(fā)性卵巢功能不全成模)的動物中隨機分組獲得。低劑量、中劑量、高劑量治療組分別采用每日20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg灌胃劑量,模型對照組采用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液灌胃。ELISA法檢測大鼠血清性激素:抗苗勒管激素(AMH)、黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)水平和血清中丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量。HE染色鏡檢大鼠單位卵巢面積內(nèi)成熟卵泡、閉鎖卵泡和黃體數(shù)。同時采用免疫組化法比較各組卵巢組織中p-Akt、p-m TOR、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白含量表達差異。Western-blot法比較各組卵巢組織中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白含量的表達差異。結(jié)果不同濃度白藜蘆醇灌胃治療組大鼠較模型對照組大鼠血清中AMH、E2和?SOD水平高(P0.05),LH、FSH和MDA水平低(P0.05);卵巢組織中p-PI3K、p-Akt、p-m TOR、Bcl-2蛋白含量表達高(P0.05),Bax和Caspase-3蛋白含量表達低(P0.05)。不同濃度白藜蘆醇灌胃治療組大鼠較空白對照組大鼠血清中AMH、E2和SOD水平低(P0.05),LH、FSH和MDA水平高(P0.05);卵巢組織中p-PI3K、p-Akt、p-m TOR、Bcl-2蛋白含量表達低(P0.05),Bax和Caspase-3蛋白含量表達高(P0.05)。與低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量治療組、空白對照組比較,模型對照組組卵巢內(nèi)顆粒細胞層數(shù),成熟卵泡數(shù)以及黃體數(shù)量少(P0.05),閉鎖卵泡數(shù)明顯增加(P0.05)。結(jié)論1、經(jīng)白藜蘆醇灌胃治療后早發(fā)性卵巢功能不全的大鼠血清中AMH、E2和SOD水平升高,LH、FSH和MDA水平降低,卵巢內(nèi)顆粒細胞層數(shù)、成熟卵泡數(shù)以及黃體數(shù)量明顯增加,閉鎖卵泡數(shù)量減少,早發(fā)性卵巢功能不全的大鼠卵巢功能有所改善。2、經(jīng)白藜蘆醇灌胃治療后早發(fā)性卵巢功能不全的大鼠卵巢組織中p-PI3K、p-Akt、p-m TOR、Bcl-2蛋白含量表達高,Bax和Caspase-3蛋白含量表達低。白藜蘆醇激活了PI3K/Akt/m TOR信號通路并抑制了顆粒細胞凋亡。3、白藜蘆醇對早發(fā)性卵巢功能不全大鼠的治療效果是通過激活PI3K/Akt/m TOR信號通路和抗氧化應(yīng)激機制,發(fā)揮抑制顆粒細胞凋亡的作用。
【學位授予單位】：錦州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332
【圖文】：

按 ECL 試劑盒說明書的方法混合后避光顯影。條帶最ro Plus6.0 軟件進行灰度值測定。計學方法數(shù)據(jù)采用 SPSS19.0 軟件進行系統(tǒng)的統(tǒng)計學分析。其中計量資料用x ±s）的形式表示，多組間用單因素方差分析進行比較，組間兩 法，以 P<0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。結(jié) 果鼠體重變化對照組大鼠體重相對空白對照組、白藜蘆醇灌胃治療組（低、中、，但差異無統(tǒng)計學意義（圖 1）。

三、卵巢形態(tài)及 HE 染色鏡檢結(jié)果白藜蘆醇治療組大鼠于第 9 周末在動情周期間期麻醉取卵巢，模型對照組與空白對照組大鼠也在動情周期間期取卵巢。與低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量治療組、空白對照組比較，肉眼觀察，模型對照組卵巢體積有所減小（圖 2）。各組均取右側(cè)卵巢，4μm 連續(xù)切片，每間隔 10 張留取 1 張切片(即第 11 張)，HE染色鏡檢，低倍視野拍一個整體照片，每張切片隨機選取 5 個高倍視野，計數(shù)其中的成熟卵泡、閉鎖卵泡及黃體數(shù)；應(yīng)用 Image-Pro Plus 6.0 圖像分析軟件計算該視野下的面積；算出單位面積內(nèi)的成熟卵泡、閉鎖卵泡及黃體數(shù)。與低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量治療組、空白對照組比較，模型對照組發(fā)現(xiàn)卵巢內(nèi)顆粒細胞層數(shù)，成熟的卵泡數(shù)以及黃體數(shù)相對變少，而閉鎖卵泡數(shù)顯著增多（圖3）。五組大鼠單位卵巢面積中成熟卵泡數(shù)、閉鎖卵泡數(shù)和黃體數(shù)（表 5）。a b c d e

模型對照組發(fā)現(xiàn)卵巢內(nèi)顆粒細胞層數(shù)，成熟的卵泡數(shù)以及黃體數(shù)相對變少，而閉鎖卵泡數(shù)顯著增多（圖3）。五組大鼠單位卵巢面積中成熟卵泡數(shù)、閉鎖卵泡數(shù)和黃體數(shù)（表 5）。a b c d e圖 2 卵巢大體組織注：a：低劑量治療組卵巢組織；b：中劑量治療組卵巢組織；c：高劑量治療組卵巢組織；d：模型對照組卵巢組織；e：空白對照組卵巢組織。圖 3 卵巢組織 HE 染色鏡檢結(jié)果注： 示閉鎖卵泡； 示成熟卵泡； 示黃體。a：低劑量治療組卵巢組織 HE 染色鏡檢（×40）；b：中劑量治療組卵巢組織 HE 染色鏡檢（×40）；c：高劑量治療組卵巢組織 HE

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 茍毅;余天霧;黃中榮;張雷達;;白藜蘆醇對大鼠肝缺血再灌注損傷的保護作用及其與Sirt1-p53通路的關(guān)系[J];第三軍醫(yī)大學學報;2017年13期

2 冒湘琳;鮑偉倩;趙丕文;牛建昭;趙福建;陶仕英;;二仙湯對卵巢早衰大鼠卵巢儲備功能的影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2017年02期

3 吳潔;陳蓉;;早發(fā)性卵巢功能不全的激素補充治療專家共識[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2016年12期

4 韓夢欣;李斌;;誘導性多潛能干細胞治療卵巢功能不全的實驗研究進展[J];老年醫(yī)學與保健;2016年04期

5 李曉彤;房~D恭;尚潔;郭瀟聰;;卵巢早衰的針灸治療思路與探討[J];中華中醫(yī)藥雜志;2016年08期

6 雷軍榮;涂獻坤;張華斌;張晶;秦軍;羅杰;石松生;楊衛(wèi)忠;;白藜蘆醇通過激活PI3K/Akt信號通路減輕大鼠腦缺血再灌注損傷[J];中國臨床神經(jīng)外科雜志;2016年07期

7 楊靜;梁嘉麗;秦佳佳;;PI3K/Akt信號通路與卵巢早衰相關(guān)性的研究進展[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展;2016年02期

8 王松露;任錦錦;朱玲;羅頌平;;卵巢早衰的中西醫(yī)治療概況[J];中醫(yī)藥臨床雜志;2016年01期

9 黃輝;屠潤琪;劉芳麗;馮得敏;劉文一;袁偉;程學敏;崔留欣;;白藜蘆醇對慢性鉛暴露小鼠腦組織Nrf2信號通路的影響[J];衛(wèi)生研究;2015年06期

10 莊t熲

本文編號：2795792