【摘要】：研究背景隨著全球健康和世界經濟的高速發(fā)展進程,傳染疾病在世界范圍內的傳播變得更加快捷,特別是流感病毒,每年的流感疫情都會導致大約3百萬-5百萬的病人入院治療�？共《舅幬锸乾F(xiàn)階段主要的治療手段,但是由于其存在藥物耐受,治療窗口期短等問題,急需有其他手段來更有效的治療流感病毒感染�？贵w治療是近些年來研究的熱點,通過有效的抗體篩選手段,篩選得到能夠有效中和流感病毒的抗體成為眾多科學家研究的目標。研究目的應用記憶B細胞培養(yǎng)實驗平臺,從免疫流感疫苗的志愿者血液中篩選得到具有中和H1N1流感病毒的抗體,并通過體外結合活性,中和活性等功能性實驗,初步評估篩選得到的抗體,并為研發(fā)抗流感病毒提供有效治療藥物。研究方法基于記憶B細胞培養(yǎng)平臺,從免疫流感疫苗的志愿者血液中分離PBMC,磁珠分選CD19~+CD27~+記憶B細胞,在含IL-2,IL-21及293T-mCD40L滋養(yǎng)層細胞的培養(yǎng)基中培養(yǎng)13天,進行ELISA檢測篩選陽性有效孔;對陽性有效孔進行裂解,反轉錄,單細胞PCR獲得抗體基因,并構建到IgG抗體表達載體上進行表達,純化;進而,利用ELISA結合活性實驗,Western-Blot實驗,HAI實驗等進行體外實驗鑒定;研究結果我們成功的建立起記憶B細胞培養(yǎng)平臺,并篩選得到16株具有H1N1蛋白結合活性的抗體,其中,7株具有H1N1熒光病毒中和活性(單克隆抗體Hb-B3,B5,C6,E7,A8,A9,C9具有強的中和活性),并且,Hb-B5和Hb-A9能夠廣譜結合流感病毒的HA蛋白(H1,H3,H5,H7,H10),其中Hb-A9具有流感病毒組1(H1N1,H5N1,H5N6)和組2的交叉中和活性(H7N9)。結論單克隆抗體Hb-B3,B5,C6,E7,A8,A9,C9在實驗中展現(xiàn)出強的中和活性,其中Hb-B5在體外結合實驗中顯示出廣譜結合活性,可以為之后研究流感病毒診斷試劑開發(fā)提供依據,抗體Hb-A9具有很好的流感病毒組1和組2中和活性,可以作為潛力抗體進行下一步的研究,并應用到臨床治療上。
【學位授予單位】：廣州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R392
【圖文】：

通常被簡稱為流感，為一種由流在世界各地傳播。每年的流感季都造成約 3感在北半球及南半球爆發(fā)的季節(jié)主要為冬季致死的案例多半發(fā)生在免疫力低下的小孩感染流感病毒的癥狀可輕可重[3]，最常見的癥嚨痛、咳嗽和疲倦感等（圖 1）。被感染者持續(xù)一周后解除，但咳嗽的癥狀可能會持續(xù)嘔吐癥狀[4]，例如孩童感染 H5N1 亞型流感人感染者中并不常見；惡心和嘔吐一般發(fā)生感可能的誘發(fā)的并發(fā)癥包括病毒性肺炎、次疾病惡化（如氣喘或心臟衰竭）等，給我

圖 2：流感病毒電鏡掃描圖類的血清型包含 H1N1、H2N2、H3N2、10N7、H7N9[11]。其中，根據它們的組 1 包括 H1，H2，H5，H6，H8，，H4，H7 ，H10，H14 和 H15[12]。近, 也包含在 HA 的分型里面[13, 14]，這組 1 的流感病毒中（圖 3）。

圖 2：流感病毒電鏡掃描圖能感染人類的血清型包含 H1N1、H2N2、H3N2、H5N1、H7H7N3、H10N7、H7N9[11]。其中，根據它們的系統(tǒng)發(fā)育關 1 和組 2：組 1 包括 H1，H2，H5，H6，H8，H9，H11，2 包括 H3，H4，H7 ，H10，H14 和 H15[12]。近期還在蝙H17, H18, 也包含在 HA 的分型里面[13, 14]，這兩個新的亞也被分到組 1 的流感病毒中（圖 3）。

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本文編號：2790894