【摘要】：小分子熱休克蛋白(small heat shock proteins, sHSPs)是熱休克蛋白的重要組成部分。在各種應(yīng)激狀態(tài)的刺激下,它們?cè)诮M織中表達(dá)迅速增加,參與對(duì)組織的保護(hù)作用從而防止組織損傷。小分子熱休克蛋白,α-晶體蛋白,是晶狀體中的結(jié)構(gòu)蛋白,存在兩種不同的亞基,即αA-和αB-晶體蛋白。 晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡已被揭示為非遺傳性白內(nèi)障病理機(jī)制之一,研究表明氧化應(yīng)激壓力是晶狀體上皮廣泛應(yīng)對(duì)的一種環(huán)境壓力并證明是白內(nèi)障形成的重要因素。α-晶體蛋白在對(duì)抗外界刺激所引起的細(xì)胞凋亡中有著重要的作用�；趯�(duì)α-晶體蛋白生物功能的認(rèn)識(shí),我們實(shí)驗(yàn)室以及其他研究實(shí)驗(yàn)室的工作都表明α-晶體蛋白可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡途徑中兩個(gè)重要的家族：Caspase和Bcl-2家族來(lái)抑制細(xì)胞凋亡,而且還有研究表明aA-晶體蛋白和aB-晶體蛋白在特定的應(yīng)激狀態(tài)下表現(xiàn)了不同的抗凋亡機(jī)制。比如。在由紫外線和氧化應(yīng)激壓力導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡過(guò)程中,aA-晶體蛋白是通過(guò)調(diào)節(jié)激活A(yù)KT信號(hào)通路來(lái)抑制細(xì)胞凋亡,而aB-晶體蛋白則是通過(guò)負(fù)性調(diào)節(jié)MAPK信號(hào)通路來(lái)抑制細(xì)胞凋亡。雖然已有研究表明aA-晶體蛋白和aB-晶體蛋白能夠調(diào)節(jié)Caspase和Bcl-2家族的成員,但是其具體的分子機(jī)制,尤其體內(nèi)調(diào)節(jié)機(jī)制并未被詳細(xì)闡述。 本實(shí)驗(yàn)的首要目的就是研究α-晶體蛋白與Caspase-3和Bax之間的相互作用對(duì)小鼠眼睛發(fā)育的影響。其主要研究方法和結(jié)果如下： (1)首先本實(shí)驗(yàn)小組首先通過(guò)表面等離子共振技術(shù)分析得知aA-晶體蛋白和aB-晶體蛋白能夠和Caspase-3蛋白相互作用并顯示出不同程度的作用強(qiáng)度； (2)運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù),通過(guò)對(duì)小鼠不同胚胎時(shí)期的眼睛組織切片進(jìn)行熒光染色,可得知aA-晶體蛋白和aB-晶體蛋白與Caspase-3在小鼠不同胚胎時(shí)期都有表達(dá),并且aA-晶體蛋白和Caspase-3以及aB-晶體蛋白與Caspase-3都存在共定位表達(dá),但是兩者共定位的胚胎時(shí)期不同,而且表達(dá)量均有顯著差異； (3)通過(guò)酵母雙雜交系統(tǒng),初步確定aA-晶體蛋白和aB-晶體蛋白能夠與Bax在體外結(jié)合,并且顯示了對(duì)Bax結(jié)合的不同的親和性； (4)運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù),通過(guò)對(duì)小鼠不同胚胎時(shí)期的眼睛組織切片進(jìn)行熒光染色,可得知aA-晶體蛋白和aB-晶體蛋白與Bax在小鼠不同胚胎時(shí)期都有表達(dá),并且aA-晶體蛋白和Bax以及aB-晶體蛋白與Bax都有共定位表達(dá),但兩者在小鼠不同胚胎時(shí)期的表達(dá)量不同； (5)以新生小鼠的晶狀體為材料,通過(guò)免疫共沉淀以及Western Blot技術(shù)分析進(jìn)一步證實(shí)了在小鼠的晶狀體中aA-晶體蛋白和aB-晶體蛋白均可與Caspase-3和Bax在小鼠晶狀體內(nèi)形成相互作用的蛋白復(fù)合物。 本研究首次提供體內(nèi)和體外證據(jù)表明aA-晶體蛋白和aB-晶體蛋白能夠直接與Caspase-3和Bax結(jié)合形成相互作用的蛋白復(fù)合物,并通過(guò)對(duì)Caspase-3和Bax活性的調(diào)節(jié),保護(hù)小鼠眼睛晶狀體的正常發(fā)育。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R339.14;Q51

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2790996