【摘要】：目的:下丘腦-垂體-腎上腺軸參與能量平衡的調(diào)節(jié),且對(duì)生殖和發(fā)育有著復(fù)雜的影響,GC(glucocorticoid,糖皮質(zhì)激素)在外周的作用報(bào)道較多,但對(duì)其在中樞的直接作用報(bào)道較少。因此,本研究通過(guò)側(cè)腦室注射地塞米松,探討其對(duì)能量代謝和生殖系統(tǒng)的影響。方法:將24只小鼠隨機(jī)分成2組,每組12只,通過(guò)腦立體定位儀,在小鼠皮下埋置ALZET 1004,通過(guò)與kit3連接,分別將乙醇(對(duì)照組、CON組)和地塞米松(DEX組)緩慢、持續(xù)的送入小鼠側(cè)腦室,連續(xù)給藥28天。1、置管前的當(dāng)天和置管后每天早上同一時(shí)間測(cè)量小鼠的體重和攝食量;置管后第27天進(jìn)行小鼠腹腔葡萄糖耐量試驗(yàn);置管后第29天處死小鼠,迅速分離小鼠棕色脂肪組織、性腺周?chē)鶺AT(white adipose tissue,白色脂肪組織)、腎臟周?chē)鶺AT,皮下WAT,并稱(chēng)重;迅速分離下丘腦,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(realtime PCR)檢測(cè)Ag RP、NPY、POMC m RNA的表達(dá)情況;分離完整的大腦組織,免疫組化檢測(cè)Ag RP、NPY、POMC蛋白的表達(dá)水平。2、置管后第15天起,每天進(jìn)行雌鼠陰道上皮脫落細(xì)胞涂片、染色,以觀察動(dòng)情周期;置管后第22天起,在小鼠處于動(dòng)情間期時(shí),眼眶內(nèi)眥靜脈取血,分離出血清,酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定雌二醇水平;置管后第29天處死小鼠,分離卵巢、子宮,HE染色進(jìn)行觀察;分離小鼠的下丘腦,realtime PCR檢測(cè)Kiss-1m RNA的表達(dá)水平。結(jié)果:1、小鼠側(cè)腦室慢性持續(xù)性藥物干預(yù)第6天起,DEX組的攝食量明顯多于CON組(P0.05),第12天起,DEX組的體重明顯大于CON組(P0.05)。葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示兩組小鼠在各監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)的血糖值均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。第29天處死小鼠,發(fā)現(xiàn)DEX組性腺周?chē)鶺AT的重量大于CON組(P0.05)。而兩組間其余部分脂肪無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。DEX組下丘腦Ag RP、NPY m RNA表達(dá)量明顯升高(P0.01),兩組間POMC m RNA表達(dá)量無(wú)明顯差異。免疫組化的結(jié)果也顯示出同樣的趨勢(shì)。2、小鼠側(cè)腦室慢性持續(xù)性干預(yù)28天,均未對(duì)其動(dòng)情周期產(chǎn)生影響,兩組均表現(xiàn)為規(guī)律、完整的4-5天動(dòng)情周期。兩組間卵巢和子宮病理形態(tài)無(wú)明顯差異。兩組間血清雌二醇水平和下丘腦Kiss1 m RNA表達(dá)無(wú)明顯差異。結(jié)論:1、GC慢性持續(xù)地直接作用于中樞會(huì)對(duì)能量代謝產(chǎn)生影響。GC通過(guò)上調(diào)食欲刺激因子Ag RP、NPY的表達(dá),導(dǎo)致小鼠攝食量、體重增加,性腺周?chē)鶺AT重量增加。但中樞GC長(zhǎng)期持續(xù)的作用不會(huì)引起機(jī)體葡萄糖耐量的改變。2、GC慢性持續(xù)地作用于中樞可能不會(huì)影響生殖功能。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R33
【圖文】：

Cannula、Catheter Tube連接。（3）用ALZET配備的 1ml注射器小心將配好的工作液抽出，然接好的管路注滿(mǎn)，再將注射器的針頭插入到ALZET膠囊滲透泵的底緩慢推注液體，直到泵的外口有液體滲出，說(shuō)明泵已經(jīng)注滿(mǎn)，注以免產(chǎn)生氣泡影響泵的注液量。（4）將灌注好的ALZET膠囊滲透泵與Pump flow moderator連Brian infusion cannula有液體滲出，說(shuō)明管路及滲透泵均充盈（5）本實(shí)驗(yàn)采用ALZET 1004，持續(xù)注射 28 天，將DEX儲(chǔ)存液配置成DEX工作液，即實(shí)驗(yàn)組注射DEX的量為 14ug/100ul，每天注射對(duì)照組注射溶劑乙醇的濃度與實(shí)驗(yàn)組乙醇的稀釋倍數(shù)相同，均稀對(duì)照組溶劑乙醇的濃度為 14%。（6）將充盈好的泵放入無(wú)菌 0.9%生理鹽水中， 37℃水浴 4囊滲透泵已經(jīng)完全準(zhǔn)備好，可以開(kāi)始工作。

圖 1.2 ALZET 膠囊滲透泵實(shí)物圖2.3 小鼠側(cè)腦室植入滲透泵（1）麻醉：小鼠稱(chēng)重后腹腔注射 10%的水合氯醛完全失去意識(shí)后再進(jìn)行下一步操作。（2）將麻醉好的小鼠剃去頭頂部毛發(fā)，以俯臥位上方，并使水平上的左右 2 根鋼針的尖端剛好對(duì)準(zhǔn)小并將小鼠的舌頭拉出，避免小鼠在注射過(guò)程中窒息死鋼針，直至松緊適宜，整個(gè)頭顱水平固定，不能搖動(dòng)看），使小鼠頭部固定良好，大腦平面平整，左右對(duì)稱(chēng)（3）用碘伏消毒頭皮，在頭頂正中切開(kāi)皮膚，并灼燒皮下組織和骨膜，暴露顱骨，可見(jiàn)清晰骨縫，找（4）移動(dòng)定位儀針尖至Bregma點(diǎn)（如圖：1.3），后 0.5mm，旁開(kāi) 1.0mm，即 X軸調(diào)整為 1.0mm，Y軸調(diào)整

bregma示意圖

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本文編號(hào)：2784104