發(fā)布時間：2020-08-07 14:13

【摘要】：目的:下丘腦-垂體-腎上腺軸參與能量平衡的調(diào)節(jié),且對生殖和發(fā)育有著復(fù)雜的影響,GC(glucocorticoid,糖皮質(zhì)激素)在外周的作用報道較多,但對其在中樞的直接作用報道較少。因此,本研究通過側(cè)腦室注射地塞米松,探討其對能量代謝和生殖系統(tǒng)的影響。方法:將24只小鼠隨機分成2組,每組12只,通過腦立體定位儀,在小鼠皮下埋置ALZET 1004,通過與kit3連接,分別將乙醇(對照組、CON組)和地塞米松(DEX組)緩慢、持續(xù)的送入小鼠側(cè)腦室,連續(xù)給藥28天。1、置管前的當(dāng)天和置管后每天早上同一時間測量小鼠的體重和攝食量;置管后第27天進行小鼠腹腔葡萄糖耐量試驗;置管后第29天處死小鼠,迅速分離小鼠棕色脂肪組織、性腺周圍WAT(white adipose tissue,白色脂肪組織)、腎臟周圍WAT,皮下WAT,并稱重;迅速分離下丘腦,實時熒光定量PCR(realtime PCR)檢測Ag RP、NPY、POMC m RNA的表達情況;分離完整的大腦組織,免疫組化檢測Ag RP、NPY、POMC蛋白的表達水平。2、置管后第15天起,每天進行雌鼠陰道上皮脫落細(xì)胞涂片、染色,以觀察動情周期;置管后第22天起,在小鼠處于動情間期時,眼眶內(nèi)眥靜脈取血,分離出血清,酶聯(lián)免疫吸附測定雌二醇水平;置管后第29天處死小鼠,分離卵巢、子宮,HE染色進行觀察;分離小鼠的下丘腦,realtime PCR檢測Kiss-1m RNA的表達水平。結(jié)果:1、小鼠側(cè)腦室慢性持續(xù)性藥物干預(yù)第6天起,DEX組的攝食量明顯多于CON組(P0.05),第12天起,DEX組的體重明顯大于CON組(P0.05)。葡萄糖耐量實驗結(jié)果顯示兩組小鼠在各監(jiān)測時間點的血糖值均無統(tǒng)計學(xué)差異。第29天處死小鼠,發(fā)現(xiàn)DEX組性腺周圍WAT的重量大于CON組(P0.05)。而兩組間其余部分脂肪無統(tǒng)計學(xué)差異。DEX組下丘腦Ag RP、NPY m RNA表達量明顯升高(P0.01),兩組間POMC m RNA表達量無明顯差異。免疫組化的結(jié)果也顯示出同樣的趨勢。2、小鼠側(cè)腦室慢性持續(xù)性干預(yù)28天,均未對其動情周期產(chǎn)生影響,兩組均表現(xiàn)為規(guī)律、完整的4-5天動情周期。兩組間卵巢和子宮病理形態(tài)無明顯差異。兩組間血清雌二醇水平和下丘腦Kiss1 m RNA表達無明顯差異。結(jié)論:1、GC慢性持續(xù)地直接作用于中樞會對能量代謝產(chǎn)生影響。GC通過上調(diào)食欲刺激因子Ag RP、NPY的表達,導(dǎo)致小鼠攝食量、體重增加,性腺周圍WAT重量增加。但中樞GC長期持續(xù)的作用不會引起機體葡萄糖耐量的改變。2、GC慢性持續(xù)地作用于中樞可能不會影響生殖功能。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R33
【圖文】：

Cannula、Catheter Tube連接。（3）用ALZET配備的 1ml注射器小心將配好的工作液抽出，然接好的管路注滿，再將注射器的針頭插入到ALZET膠囊滲透泵的底緩慢推注液體，直到泵的外口有液體滲出，說明泵已經(jīng)注滿，注以免產(chǎn)生氣泡影響泵的注液量。（4）將灌注好的ALZET膠囊滲透泵與Pump flow moderator連Brian infusion cannula有液體滲出，說明管路及滲透泵均充盈（5）本實驗采用ALZET 1004，持續(xù)注射 28 天，將DEX儲存液配置成DEX工作液，即實驗組注射DEX的量為 14ug/100ul，每天注射對照組注射溶劑乙醇的濃度與實驗組乙醇的稀釋倍數(shù)相同，均稀對照組溶劑乙醇的濃度為 14%。（6）將充盈好的泵放入無菌 0.9%生理鹽水中， 37℃水浴 4囊滲透泵已經(jīng)完全準(zhǔn)備好，可以開始工作。

圖 1.2 ALZET 膠囊滲透泵實物圖2.3 小鼠側(cè)腦室植入滲透泵（1）麻醉：小鼠稱重后腹腔注射 10%的水合氯醛完全失去意識后再進行下一步操作。（2）將麻醉好的小鼠剃去頭頂部毛發(fā)，以俯臥位上方，并使水平上的左右 2 根鋼針的尖端剛好對準(zhǔn)小并將小鼠的舌頭拉出，避免小鼠在注射過程中窒息死鋼針，直至松緊適宜，整個頭顱水平固定，不能搖動看），使小鼠頭部固定良好，大腦平面平整，左右對稱（3）用碘伏消毒頭皮，在頭頂正中切開皮膚，并灼燒皮下組織和骨膜，暴露顱骨，可見清晰骨縫，找（4）移動定位儀針尖至Bregma點（如圖：1.3），后 0.5mm，旁開 1.0mm，即 X軸調(diào)整為 1.0mm，Y軸調(diào)整

bregma示意圖

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本文編號：2784104