【摘要】：目的:1.觀察生理狀態(tài)下骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)的過表達(dá)對造血的影響。2.5-氟尿嘧啶誘導(dǎo)的骨髓抑制或應(yīng)激造血條件下BMP4對造血干/祖細(xì)胞的周期、凋亡的調(diào)控以及相關(guān)機(jī)制的初步探討。3.研究BMP4蛋白的過表達(dá)對Lineage~-c-kit~+Sca-1~+造血干細(xì)胞移植后的歸巢效率和造血重建能力的影響。方法:1.BMP4過表達(dá)的C57BL/6品系轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建和繁育。2.血常規(guī)儀器檢測轉(zhuǎn)基因小鼠的外周血各參數(shù),通過流式細(xì)胞儀和特異性抗體標(biāo)記各譜系造血祖細(xì)胞觀察骨髓中各血系細(xì)胞的比例。3.熒光定量PCR檢測骨髓基質(zhì)中的造血調(diào)控因子Csf2、Csf3、CXCL12、SCF、ANG-1、Hif-1α的mRNA表達(dá)情況。4.Western-blot法檢測骨髓基質(zhì)中整合素α4蛋白的表達(dá)水平。5.5-FU以150mg/kg的劑量誘導(dǎo)骨髓抑制模型,提取骨髓有核細(xì)胞。6.動態(tài)觀察骨髓抑制后的外周血細(xì)胞數(shù)和骨髓有核細(xì)胞數(shù),7.通過c-kit/Sca-1熒光抗體雙標(biāo)HSPC,分別用Annexin V/PI和Ki-67/DAPI雙染法觀察其凋亡和細(xì)胞周期的變化。8.流式分選技術(shù)分選出造血干細(xì)胞,通過靜脈注射移植入接受致死性劑量輻照的小鼠體內(nèi),16小時(shí)后觀察經(jīng)過CFSE示蹤的造血干細(xì)胞的歸巢效率。通過觀察組間小鼠的生存期,判斷所移植造血干細(xì)胞的重建能力。結(jié)果:1.相對于野生型組,生理狀態(tài)下轉(zhuǎn)基因小鼠外周血粒細(xì)胞數(shù)明顯增高(P0.01)。2.轉(zhuǎn)基因組骨髓基質(zhì)中Csf3和整合素α4的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)(P0.05)。3.5-FU骨髓抑制后外周血細(xì)胞數(shù)和骨髓有核細(xì)胞數(shù)在第4天達(dá)到最低點(diǎn)。4.生理狀態(tài)下,野生型組和轉(zhuǎn)基因組造血干/祖細(xì)胞周期和凋亡率無明顯差異。骨髓抑制第4天,轉(zhuǎn)基因組骨髓中造血干/祖細(xì)胞的G_0期比例明顯降低(P0.01),凋亡率明顯上升(P0.05)。5.轉(zhuǎn)基因組骨髓基質(zhì)中維持造血干/祖細(xì)胞靜息的低氧誘導(dǎo)因子HIF-1α和趨化因子CXCL12明顯下調(diào)(P0.01)。6.致死性輻照后,轉(zhuǎn)基因組造血干細(xì)胞的移植效率和移植后小鼠生存期均明顯低于野生型組(P0.01)。結(jié)論:1.生理狀態(tài)下,BMP4的過表達(dá)可以促進(jìn)粒系增生。同時(shí)可能是通過Csf3發(fā)揮此功能。2.骨髓抑制或造血應(yīng)激條件下,BMP4的過表達(dá)降低了CXCL12和Hif-1α的mRNA表達(dá)水平,促進(jìn)造血干細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期,同時(shí)增加造血干細(xì)胞的凋亡率。3.造血微環(huán)境中BMP4過表達(dá)削弱了HSC的歸巢效率和長期重建能力。
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R329.2
【圖文】：

、小鼠外周血血象的檢測提取小鼠的外周血，觀察紅細(xì)胞，白細(xì)胞等參數(shù)，并對各類白細(xì)胞的成分例進(jìn)行了檢測，結(jié)果表明，在生理情況下，BMP4 的過表達(dá)沒有對外周血產(chǎn)生顯的影響。A：基因編輯簡圖 B：PCR 篩選結(jié)果圖 1 BMP4 鼠的構(gòu)建與篩選Fig.1 Establishment and screening of the transgenic mice

、小鼠外周血血象的檢測提取小鼠的外周血，觀察紅細(xì)胞，白細(xì)胞等參數(shù)，并對各類白細(xì)胞的成分例進(jìn)行了檢測，結(jié)果表明，在生理情況下，BMP4 的過表達(dá)沒有對外周血產(chǎn)生顯的影響。A：基因編輯簡圖 B：PCR 篩選結(jié)果圖 1 BMP4 鼠的構(gòu)建與篩選Fig.1 Establishment and screening of the transgenic mice

三、5-FU 骨髓抑制后的血象及骨髓有核細(xì)胞數(shù)變化組間無明顯差異5-FU 以 150mg/kg 的劑量對小鼠進(jìn)行骨髓抑制，并觀察 0 至 8 天中外周血白細(xì)胞（WBC）和骨髓有核細(xì)胞（BMNC）數(shù)量的動態(tài)變化。如圖 2 所示，野生型和轉(zhuǎn)基因鼠的造血系統(tǒng)同時(shí)在第 4 天受到最大程度的破壞，并且損傷程度無顯著差異。

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5 ;Nature:重大突破,揭示維生素C調(diào)節(jié)造血干細(xì)胞功能阻止白血病產(chǎn)生機(jī)制[J];中學(xué)生物教學(xué);2017年16期

6 張靜靜;呂紅霞;楊巖;周棟;黃丹;劉虹辰;王嬌;王睿;閆金松;;外周造血干細(xì)胞采集與凍存質(zhì)量分析[J];中國醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版);2017年01期

7 ;人類首次在實(shí)驗(yàn)室中誘導(dǎo)出功能性造血干細(xì)胞[J];上海醫(yī)藥;2017年11期

8 ;實(shí)驗(yàn)室首次培育出人體造血干細(xì)胞[J];科技傳播;2017年10期

9 ;違背常理!造血干細(xì)胞既“殺敵”也“自損”[J];微創(chuàng)醫(yī)學(xué);2017年04期

10 ;美造出有造血干細(xì)胞功能的細(xì)胞[J];健康博覽;2017年07期

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2 宋學(xué)輝;羅志紅;栗玉萍;代敏;;5471份無償捐獻(xiàn)造血干細(xì)胞血液標(biāo)本相關(guān)數(shù)據(jù)分析[A];中國輸血協(xié)會第四屆輸血大會論文集[C];2006年

3 李罡燦;宋艷萍;胡凱;杜明珠;王浩;王琦俠;;不同凍存條件對造血干細(xì)胞保存效果的臨床研究[A];第10屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2005年

4 孟愛民;李德冠;張恒;;造血干細(xì)胞衰老與臨床轉(zhuǎn)化研究[A];轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研討會論文集[C];2010年

5 程濤;;造血干細(xì)胞基礎(chǔ)研究若干重要方向[A];中國生理學(xué)會第24屆全國會員代表大會暨生理學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2014年

6 ;滿載愛心 踐行企業(yè)社會責(zé)任 太平洋人壽舉辦捐獻(xiàn)造血干細(xì)胞現(xiàn)場采血活動[A];黑龍江保險(xiǎn)2014年第3期（總第170期）[C];2014年

7 王瑩;王云貴;金潔;錢其軍;錢文斌;;嵌合型溶瘤腺病毒對造血干細(xì)胞體外凈化作用的研究[A];2009年浙江省中醫(yī)藥學(xué)會血液病學(xué)術(shù)年會、浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會血液病學(xué)術(shù)年會暨國家級中西醫(yī)結(jié)合血液病新進(jìn)展繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

8 劉宗印;肖東杰;;造血干細(xì)胞4℃短期儲存后細(xì)胞活性的研究[A];第十屆全國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2005年

9 王立生;孫惠燕;;MicroRNA-486-5p調(diào)節(jié)造血干細(xì)胞紅系分化及機(jī)制研究[A];第13屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

10 何吉;秦斐;朱發(fā)明;劉晉輝;陳舒;戴兵;項(xiàng)盈;嚴(yán)力行;;重組人脫氧核糖核酸酶預(yù)防凍存復(fù)蘇后臍血造血干細(xì)胞凝集[A];中國輸血協(xié)會第四屆輸血大會論文集[C];2006年

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4 中國青年報(bào)·中青在線見習(xí)記者 杜沂蒙;13年，造血干細(xì)胞志愿者悔捐率為零[N];中國青年報(bào);2018年

5 記者 房名名 實(shí)習(xí)生 金晴龍;寧夏造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)突破30例[N];寧夏日報(bào);2018年

6 梅喜光;鄭州市造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)達(dá)250例[N];中國紅十字報(bào);2018年

7 記者 宋育欣;我省完成第68例造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)[N];吉林日報(bào);2018年

8 本報(bào)記者 雷宇 通訊員 郭哲;新疆姑娘為意大利男孩捐造血干細(xì)胞[N];中國青年報(bào);2014年

9 本報(bào)記者 曹萍;我省造血干細(xì)胞累計(jì)捐獻(xiàn)673例[N];河南日報(bào);2018年

10 記者 莊越 通訊員 黃玉潔;我市造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)志愿者超萬人[N];溫州日報(bào);2018年

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1 張宇;造血干細(xì)胞（CD34~+細(xì)胞）體外高效擴(kuò)增及向紅細(xì)胞分化制備通用血液的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2018年

2 蔡鵬程;核糖體蛋白Urb2通過P53信號途徑調(diào)控斑馬魚造血干細(xì)胞的發(fā)育[D];西南大學(xué);2018年

3 王童潔;轉(zhuǎn)錄因子Nupr1和Trim27在造血干細(xì)胞中的功能研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2018年

4 楊定華;vIL-10基因修飾造血干細(xì)胞誘導(dǎo)小鼠心臟移植免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2003年

5 閆鳳英;造血調(diào)控因子HAPO、PF4對造血干細(xì)胞調(diào)節(jié)的體內(nèi)外研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

6 薛興奎;趨化分子LTD4、S1P和SDF-1對造血干細(xì)胞作用及其機(jī)制的研究[D];浙江大學(xué);2007年

7 張華玲;造血干細(xì)胞轉(zhuǎn)染多藥耐藥基因和體外擴(kuò)增支持大劑量化療的研究[D];山東大學(xué);2007年

8 李斯丹;骨重塑在造血干細(xì)胞動員中的機(jī)制及應(yīng)用研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

9 周帆;應(yīng)用單細(xì)胞技術(shù)研究小鼠造血干細(xì)胞發(fā)生[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

10 陳寶忠;補(bǔ)髓生血沖劑對慢性再生障礙性貧血患者臨床及對造血干細(xì)胞凋亡相關(guān)基因和細(xì)胞因子影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2001年

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2 葛俊男;臍帶血造血干細(xì)胞的分離與貯藏工藝過程研究[D];河北科技大學(xué);2019年

3 Givaapil Ariunjargal（阿榮吉日嘎拉）;多解剖部位不同造血發(fā)育階段小鼠造血干細(xì)胞的分離及其生物學(xué)特性[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2018年

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6 蘇麗華;G-CSF誘導(dǎo)小鼠造血干細(xì)胞動員過程中成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞的變化[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2017年

7 韓林峰;造血干細(xì)胞自動磁分選儀的研制及初步應(yīng)用[D];上海師范大學(xué);2009年

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9 梁雨蒙;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞微泡生物學(xué)特性及促進(jìn)造血干細(xì)胞體外擴(kuò)增作用的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

10 衛(wèi)佳;干細(xì)胞因子修飾的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對造血干細(xì)胞的作用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

本文編號：2778344