本文關鍵詞：地塞米松對SNI模型大鼠的鎮(zhèn)痛效應及機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景糖皮質(zhì)激素既是機體重要的生理物質(zhì),又是廣泛應用于臨床的免疫抑制劑[1,2],而地塞米松(Dexamethasone,Dex)是一種人工合成的糖皮質(zhì)激素(Glucocorticoid,GC)。糖皮質(zhì)激素受體(Glucocorticoid Receptor,GR)是一種激素依賴的轉錄調(diào)節(jié)因子,是核受體超家族的成員。研究發(fā)現(xiàn)GR廣泛表達于外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)[3]。研究發(fā)現(xiàn)傷害性信息的傳遞以及病理性疼痛時中樞痛覺敏化的產(chǎn)生和發(fā)展與GR表達關系密切[4-6]。神經(jīng)病理性疼痛是由神經(jīng)損傷導致的一類慢性痛,腫瘤造成的骨壓縮、感染、自身免疫疾病、創(chuàng)傷和糖尿病等均可引起的此類疼痛[7]。除了自發(fā)痛和痛覺過敏的癥狀之外,它還可以誘發(fā)機體對正常無害刺激產(chǎn)生痛覺超敏,即觸誘發(fā)痛[8,9]。研究者已開始逐漸認識到神經(jīng)病理性疼痛并不單純是一種癥狀,而是神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂所導致的一個綜合后果[10,11]。因此,探索其痛覺敏化產(chǎn)生的機制對神經(jīng)病理性疼痛的治療顯得尤為重要。近年研究顯示,在外周神經(jīng)損傷模型、癌痛模型以及外周炎性痛模型中,均可觀察到位于脊髓背角的膠質(zhì)細胞不同程度的活化[12-14]。研究表明膠質(zhì)細胞在神經(jīng)病理性疼痛中具有重要作用,是中樞痛敏發(fā)生和維持的關鍵性因素[15]。研究發(fā)現(xiàn),作為絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated Protein Kinases,MAPK)信號通路家族中的一員,p38MAPK在多種神經(jīng)病理性疼痛過程中的活化位置特異性出現(xiàn)在小膠質(zhì)細胞上[16]。諸多證據(jù)表明脊髓小膠質(zhì)細胞p38MAPK的活化與神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)展有著密切聯(lián)系[17-19]。地塞米松具有調(diào)節(jié)外周免疫反應及對腦組織的抗炎作用,而小膠質(zhì)細胞也在腦組織的免疫及炎癥反應過程中發(fā)揮著重要的作用[20]。小膠質(zhì)細胞在脊髓背角的增生影響神經(jīng)病理性痛過程中神經(jīng)敏化的形成[21],在體外糖皮質(zhì)激素能夠影響B(tài)V-2小膠質(zhì)細胞的增殖和活化[22]。但在體內(nèi),糖皮質(zhì)激素能否通過調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細胞中p38MAPK信號通路從而影響神經(jīng)病理性痛過程中樞痛敏的形成還未可知。目的建立SNI大鼠模型,檢測地塞米松和p38抑制劑sb203580給藥前后SNI大鼠機械痛閾的變化,檢測疼痛炎癥因子IL-6釋放的改變,GR和磷酸化p38蛋白表達的變化,證明地塞米松對SNI大鼠神經(jīng)病理性疼痛的影響可能是介導p38MAPK信號通路實現(xiàn)的,并在原代小膠質(zhì)細胞中,給予地塞米松與sb203580觀察GR、磷酸化p38表達和小膠質(zhì)細胞活性之間的關系,從而探討地塞米松對SNI模型大鼠的鎮(zhèn)痛效應及可能機制。材料和方法1.分組:動物實驗中,將大鼠隨機分為分為9組:正常組(Naive組,n=10),模型組(SNI組,n=10),假手術組(Sham組,n=10),地塞米松單純注藥組(D ex組,n=10),地塞米松處理組(SNI+Dex組,n=10),生理鹽水處理組(SNI+NS組,n=10),SB203580單純注藥組(sb203580組,n=10),SB203580處理組(S NI+sb203580組,n=10),SB23580溶質(zhì)二甲基亞砜組(SNI+DMSO組,n=10);細胞實驗中,將細胞分為5組:DPBS組(n=4),谷氨酸組(GLU組,n=4),地塞米松處理組(GLU+Dex組,n=4),DMSO處理組(GLU+DMSO組,n=4),SB處理組(GLU+sb203580組,n=4)。2.SNI模型建立:Sham組只暴露坐骨神經(jīng)及其分支但不結扎。模型組切開大鼠后肢皮膚后,充分暴露坐骨神經(jīng)及其分支,選擇性結扎并剪斷腓總神經(jīng)和脛神經(jīng)。3.蛛網(wǎng)膜下腔置管:在L5-L6間隙穿刺,大鼠出現(xiàn)甩尾、抖動反射時,將PE10導管前端向上置入,導管內(nèi)有清亮的腦脊液流出或大鼠出現(xiàn)甩尾反射,提示蛛網(wǎng)膜下腔置管成功。4.機械痛閾測定:采用Von frey絲測定大鼠50%縮足閾值。5.蛋白印記檢測(Western-blot):檢測Sham組與SNI組大鼠3天、7天、14天、21天脊髓GR蛋白及磷酸化p38的表達,及其余各組7天脊髓GR蛋白及磷酸化p38的表達情況。6.酶聯(lián)免疫吸附檢測(ELisa):檢測各組大鼠7天血清IL-6蛋白的含量。7.原代小膠質(zhì)細胞培養(yǎng):原代培養(yǎng)脊髓膠質(zhì)細胞后進行小膠質(zhì)細胞分離純化并鑒定。8.細胞免疫熒光化學檢測:檢測各組細胞GR及CD11b/c的蛋白表達熒光強度。結果1.大鼠機械痛閾結果顯示:SNI組大鼠術后7天、14天、21天和28天的50%縮足閾值顯著降低(P0.05);建模早期蛛網(wǎng)膜下腔注射Dex后,SNI+Dex組大鼠術后7天術側50%縮足閾值顯著升高(P0.05);后期注射Dex,SNI+Dex組大鼠10天、11天、12天術側50%縮足閾值升高(P0.05);SNI+sb203580組大鼠7天、9天、11天大鼠50%縮足閾值升高(P0.05)。2.Western-blot結果顯示:SNI組術后7天、14天21天GR表達降低,伴隨術后3天、7天磷酸化p38的表達水平升高(P0.05);SNI+Dex組大鼠脊髓GR表達水平提高,而p38磷酸化水平顯著降低(P0.05);SNI+sb203580組脊髓磷酸化p38表達水平顯著降低(P0.05)但GR表達變化無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.Elisa結果顯示:同Sham組相比,SNI組大鼠血清IL-6蛋白含量顯著升高(P0.05);同SNI組相比,SNI+Dex組與SNI+sb203580組大鼠血清IL-6含量均顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.細胞免疫熒光結果顯示:GLU組小膠質(zhì)細胞突起縮短,形態(tài)變圓,呈阿米巴樣,但GLU+Dex組小膠質(zhì)細胞形態(tài)為細長分支狀;GLU組小膠質(zhì)細胞中CD11b/c的熒光強度顯著提高(P0.05),GLU+Dex組GR熒光強度提高,而小膠質(zhì)細胞中CD11b/c強度下降;GLU+sb203580組細胞CD11b/c熒光強度顯著下降(P0.05)。結論地塞米松對SNI模型大鼠早期機械痛敏的抑制作用可通過介導小膠質(zhì)細胞中的p38MAPK信號蛋白實現(xiàn)。
【關鍵詞】：地塞米松 p38MAPK 小膠質(zhì)細胞 SNI模型
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R614;R-332
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-13
• 縮略詞13-14
• 引言14-17
• 材料與方法17-31
• 結果31-39
• 討論39-43
• 結論43-44
• 參考文獻44-48
• 綜述48-58
• 參考文獻54-58
• 個人簡歷及在讀期間發(fā)表論文58-59
• 致謝59

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本文編號：277440