【摘要】：第一部分 HO-1基因?qū)μケP間充質(zhì)干細(xì)胞(PMSCs)生存能力的作用目的 探討在缺氧條件下HO-1基因修飾對胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞(PMSCs)生存能力的影響。方法 1、分離、培養(yǎng)PMSCs;2、使用慢病毒轉(zhuǎn)染PMSCs,使其穩(wěn)定表達(dá)HO-1基因。3、檢測上調(diào)HO-1基因后的PMSC在缺氧條件下的增殖、凋亡、遷移能力。結(jié)果 1、將胎盤組織分離出PMSCs并培養(yǎng)。3天后可見呈克隆樣生長的梭形細(xì)胞,10天可達(dá)80%匯合。2、慢病毒轉(zhuǎn)染的PMSCs可高表達(dá)HO-1基因及蛋白。3、HO-1過表達(dá)組細(xì)胞的增殖能力、遷移能力明顯提高,凋亡減少。結(jié)論 HO-1修飾后的PMSCs在缺氧條件下存活能力提高。第二部分 缺氧條件下HO-1參與調(diào)控PMSCs的促血管生成功能目的 研究缺氧條件下HO-1對PMSCs分泌血管生成相關(guān)因子的調(diào)控及對HUVEC功能的影響。方法 1、通過QT-PCR法檢測上調(diào)HO-1基因后PMSCs中VEGF、PIGF、s Eng、s Flt-1 m RNA的表達(dá)變化。2、通過ELISA法檢測上調(diào)HO-1基因后PMSCs缺氧培養(yǎng)上清中VEGF、PIGF、s Eng、s Flt-1蛋白的表達(dá)變化。3、使用上調(diào)HO-1基因表達(dá)的PMSCs培養(yǎng)上清培養(yǎng)HUVEC,使用CCK8法檢測HUVEC的增殖、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡。觀察HO-1上調(diào)后PMSCs對HUVEC功能的影響。采用HUVEC小管形成實驗分析PMSCs培養(yǎng)上清的促血管生成能力。結(jié)果1、上調(diào)HO-1基因后,PMSCs的在缺氧條件下血管生成相關(guān)因子VEGF、PIGF m RNA表達(dá)增高,抗血管生成因子s Flt-1、s Eng m RNA表達(dá)降低。2、上調(diào)HO-1基因的PMSCs缺氧培養(yǎng)上清中,VEGF蛋白表達(dá)量明顯升高,s Eng蛋白表達(dá)減少。3、上調(diào)HO-1基因的PMSCs可提高HUVEC增殖能力,減少細(xì)胞凋亡。HO-1過表達(dá)組上清液培養(yǎng)的HUVEC小管及管腔分支點增多。結(jié)論 促進(jìn)HO-1表達(dá)可以提高PMSCs分泌促血管生成因子能力,同時可作用于HUVEC并提高其細(xì)胞活性。提示HO-1修飾后的PMSCs在缺氧條件下可能具有促進(jìn)血管新生成的作用。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R329.2
【圖文】：

圖 1-4 人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞表面分子的表達(dá)二、穩(wěn)定表達(dá) HO-1 蛋白的 PMSCs 的建立1.轉(zhuǎn)染 PMSCs 后，過表達(dá)組合陰性對照組相比，HO-1 的 mRNA 表達(dá)明顯升高（10.49±0.08430 vs.1.018±0.04148；P＜0.05）；陰性對照與空白對照相比，HO-1mRNA的表達(dá)無明顯差異（1.018±0.04148 vs. 0.9425±0.1646；P＞0.05）。

圖 1-7圖 1-7 HO-1 過表達(dá)組細(xì)胞增殖活性高于陰性對照組（HO-1 為過表達(dá)陰性對照組，*P＜0.05）。2.遷移能力缺氧處理的 PMSCs，過表達(dá) HO-1 組和陰性對照組相比，過表達(dá)組的目明顯升高（348.2±28.82 vs.52.08±6.732，P＜0.05)。如圖 1-bAsobranceaHO-1NC0.00.51.0

實驗結(jié)果PMSCs 分泌血管生成相關(guān)因子.缺氧處理后，檢測 PMSCs 血管生成相關(guān)因子 mRNA 的表達(dá)量，過表達(dá) HO-1 PMSCs 組與陰性對照組相比，VEGF mRNA 的表達(dá)升高（2.908±0.3145 vs.±0.0072，P＜0.05），PIGF mRNA 的表達(dá)量升高（1.378±0.1319 vs.0.9381259，P＜0.05），sENG mRNA 表達(dá)降低（0.1366±0.0202 vs.1.051±0.1206，05），sflt-1 mRNA 表達(dá)降低（0.4044±0.0613 vs.0.9426±0.0979，P＜。如圖 2-1.

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本文編號：2759487