【摘要】：自發(fā)性被毛突變小鼠是研究皮膚毛發(fā)和腫瘤等相關(guān)疾病的一種理想的動(dòng)物模型。在2007年,本實(shí)驗(yàn)室在封閉群NIH小鼠的繁育過程中發(fā)現(xiàn)了一窩被毛生長異常的小鼠,之后通過近交交配手段將這種小鼠保留了下來,實(shí)驗(yàn)室將這種小鼠稱為NIH稀毛小鼠。在實(shí)驗(yàn)的第一個(gè)部分,通過對不同日齡的小鼠皮膚切片進(jìn)行HE染色觀察發(fā)現(xiàn)小鼠在出生后42d毛發(fā)周期循環(huán)呈現(xiàn)出異常。為了探明在這一異常表型下的基因表達(dá)情況,選擇42d的雌性NIH稀毛小鼠背部后側(cè)皮膚進(jìn)行取樣,以正常NIH小鼠為對照,提取RNA后進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序,測序后閾值設(shè)定為差異被數(shù)≥2、P0.05共獲得5068個(gè)差異基因。參照數(shù)據(jù)庫進(jìn)行Pathway分析和GO分析,結(jié)果顯示basal cell carcinoma,cell cycle和Hippo,Hedgehog和Wnt signaling pathways等通路在NIH稀毛小鼠中呈現(xiàn)上調(diào)趨勢,而signal transduction,bacterial and parasitic infection和receptor-mediated pathways呈現(xiàn)下調(diào)趨勢。通過基因互作分析來篩選與毛囊發(fā)育相關(guān)的差異基因。為了驗(yàn)證這次測序結(jié)果的準(zhǔn)確性,從中挑選了12個(gè)差異基因,包括8個(gè)下調(diào)基因和4個(gè)上調(diào)基因,通過熒光定量PCR來驗(yàn)證。通過這部分的研究,構(gòu)建了NIH稀毛小鼠出生后42d的背部皮膚差異基因表達(dá)譜,差異基因的生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示NIH稀毛小鼠在毛發(fā)發(fā)育和免疫相關(guān)的通路上存在改變,運(yùn)用免疫組化和定量對Pik3r1基因進(jìn)行了進(jìn)行了分析,對于其在毛發(fā)發(fā)育中的具體功能和作用還需要進(jìn)一步的研究。自發(fā)性被毛突變小鼠在毛發(fā)表型異常的同時(shí)往往伴隨著免疫能力的改變。而單核增生性李斯特桿菌(下文統(tǒng)一簡稱為單增李斯特桿菌)作為一個(gè)革蘭氏陽性的全身性的胞內(nèi)致病菌,常被用來評(píng)價(jià)機(jī)體的固有免疫和適應(yīng)性免疫水平。因此在第二部分實(shí)驗(yàn)中,通過腹腔接種單增李斯特桿菌制作感染模型來評(píng)價(jià)NIH稀毛小鼠的固有免疫能力并分析腸道微生物對感染的影響。結(jié)果顯示NIH稀毛小鼠死亡率高,體重下降明顯,易感器官肝臟和脾臟荷菌數(shù)高,臟器損傷嚴(yán)重。腸道內(nèi)容物的16S測序結(jié)果顯示梭菌、理研菌、毛螺菌和變形菌的豐度發(fā)生改變。這部分的研究結(jié)果表明,稀毛小鼠比正常小鼠更容易受到單增李斯特桿菌的感染。感染單增李斯特桿菌可使小鼠的腸道菌群組成發(fā)生改變,同時(shí)腸道菌群的組成也會(huì)影響單增李斯特桿菌對小鼠的感染。這些結(jié)果將增進(jìn)我們對NIH稀毛小鼠的認(rèn)識(shí),為其作為一種良好的動(dòng)物模型奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R-332
【圖文】：

200μl -20℃預(yù)冷的氯仿，上下顛轉(zhuǎn) 15s，室溫中 15min，離心管傾斜 45°吸取上清至新離心管中與之等量的-20℃預(yù)冷的異丙醇（約 500μl），室溫 離心 10min。棄掉，加入 1ml75%DEPC 水配制的乙醇溶液洗管內(nèi)液體，超凈臺(tái)中干燥 5min-10min。（干燥并使 OD260/280 比值偏低） 水溶解 RNA，測定溶度后標(biāo)記分裝凍于-80℃冰序及生物信息學(xué)分析A 樣品部分送樣檢測質(zhì)量合格（RIN 值＞6.0）后測序。原始數(shù)據(jù)按照如下流程進(jìn)行生物信息學(xué)分析。

第二篇 研究內(nèi)容 第一章 NIH 稀毛小鼠皮膚轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究表型小鼠的準(zhǔn)確區(qū)分。隨著時(shí)間的推進(jìn)，稀毛小鼠出現(xiàn)了無毛--表型變化。在 5-6 周齡也就是第二個(gè)毛發(fā)生長周期的生長期的中鼠呈現(xiàn)出了表型差異的最大化。這一部分我們選擇 7 日齡（P7）12）,21 日齡（P21）, 28 日齡（P28）, 33 日齡（P33）, 42 日齡（P行拍照觀察，結(jié)果如圖 1.2 所示。P7 是兩種小鼠實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確區(qū)分的表型差異較大的日齡。

圖 1.3 NIH 稀毛小鼠皮膚結(jié)構(gòu)的增齡性改變Fig 1.3 Observe the skin structure of the NIH hairless mice注：NIH 表示 NIH 正常小鼠，HL 表示 NIH 稀毛小鼠2.3 RNA 質(zhì)量檢測及測序數(shù)據(jù)質(zhì)控生物學(xué)重復(fù)設(shè)置為 5 個(gè)，但是為了防止 RNA 提取失敗或是樣品運(yùn)送過程中RNA 的降解，每組準(zhǔn)備了 6 個(gè)樣品，待檢測后挑出質(zhì)量較好的 5 個(gè)進(jìn)行測序。RNA 質(zhì)量檢測結(jié)果如圖 1.4 所示。A1,B1,C1,D1,E1,F1 為 NIH 正常小鼠的 RNA樣品，剩下的 6 個(gè)為 NIH 稀毛小鼠的 RNA 樣品。12 個(gè)樣品的 RIN 值均大于 6.0，依順序選擇每組后五個(gè)進(jìn)行后續(xù)測序。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 滕曉坤;導(dǎo)致小鼠無毛突變的關(guān)鍵基因的定位和克隆以及在小鼠毛發(fā)發(fā)育中作用的研究[D];上海交通大學(xué);2008年

2 茅慧華;snthr～（-1Bao）稀毛小鼠生物學(xué)特性的研究、突變基因精確定位和毛發(fā)調(diào)節(jié)基因的QTL定位[D];揚(yáng)州大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 朱拓;NIH稀毛小鼠部分生物學(xué)特性研究[D];吉林大學(xué);2015年

本文編號(hào)：2758964