【摘要】：目的:研究人原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(primary human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)被DENV-2感染后,與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells,Treg)共培養(yǎng),HUVEC與Treg細(xì)胞相互作用對(duì)各自主要炎性細(xì)胞因子的影響。方法:用C6/36細(xì)胞擴(kuò)增DENV-2病毒,RT-PCR鑒定病毒,用DENV-2感染HUVECs細(xì)胞,Real-Time RT-PCR鑒定被感染HUVECs內(nèi)病毒NS1片段表達(dá)量,以此反映HUVECs感染病毒情況。密度梯度離心法從人濃縮白細(xì)胞分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),磁珠陰性分選Treg細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+CD25+CD10.01)后下降。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)經(jīng)免疫磁珠陰性分選的Treg細(xì)胞純度為84.3±0.5%。DENV-2感染后HUVECs IL-6、IL-8、TNF-αm RNA表達(dá)均有上調(diào),感染后24h IL-6 m RNA表達(dá)量為31.83±5.24;IL-8 m RNA表達(dá)量為26.83±5.81;TNF-α為427low細(xì)胞純度。HUVECs經(jīng)DENV-2感染后,用Transwell與Treg細(xì)胞共培養(yǎng),對(duì)照組用磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate S1P)1型特異性受體激動(dòng)劑CYM-5442預(yù)處理24h后與Treg細(xì)胞共培養(yǎng),Real-time RT-PCR分別檢測(cè)HUVECs IL-6、IL-8、TNF-α的m RNA和Treg IL-10、TGF-β的m RNA相對(duì)表達(dá)量;雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清中上述細(xì)胞因子表達(dá)。結(jié)果:感染后HUVECs中DENV-2 NS1基因表達(dá)在24h達(dá)到峰值(3.03±0.26,P.25±0.94),與Treg共培養(yǎng)后上述細(xì)胞因子在各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)有所降低,但仍高于未感染DENV-2的對(duì)照組。CYM-5442預(yù)處理被感染的HUVEC IL-6、IL-8、TNF-α的m RNA表達(dá)顯著下降,與之共培養(yǎng)的Treg細(xì)胞所產(chǎn)生的IL-10、TGF-β相較未預(yù)處理組也下調(diào)。結(jié)論:被DENV-2感染的原代HUVECs能增強(qiáng)Treg細(xì)胞IL-10與TGF-β的分泌,同時(shí)Treg細(xì)胞產(chǎn)生的抑制性細(xì)胞因子能降低被感染的HUVECs炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生。
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【圖文】：

A B圖 2-1 DENV-2 感染 C6/36 細(xì)胞 4 天后細(xì)胞病變（×200）Fig.2-1 Cytopathic effect of DENV-infected C6/36 cells after 4 daysA.對(duì)照組 C6/36 細(xì)胞；B.感染 DENV 的 C6/36 細(xì)胞圖 2-2 DENV-2 NS1 片段部分序列擴(kuò)增Fig.2-2 Partial sequence of NS1 amplification fragment

胞出現(xiàn)明顯融合、腫脹、空泡等電泳出略大于 400bp 產(chǎn)物與預(yù)期BV-2 感染 C6/36 細(xì)胞 4 天后細(xì)胞病變athic effect of DENV-infected C6/36 c組 C6/36 細(xì)胞；B.感染 DENV 的 C6

稀釋度孔數(shù)孔數(shù)孔數(shù)10P-18 0 53 0 53/5310P-28 0 45 0 45/4510P-38 0 37 0 37/3710P-48 0 29 0 29/2910P-58 0 21 0 21/2110P-67 1 13 1 13/1410P-73 5 6 6 6/1210P-83 5 3 11 3/142.3 HUVECs 的培養(yǎng)和鑒定2.3.1 HUVECs 的培養(yǎng)HUVECs 呈貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞形態(tài)為梭形，鵝卵石樣排列。

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本文編號(hào)：2758115