【摘要】：蛋白激酶C(PKC)家族是一大類亞型多、分布廣、功能重要的絲/蘇氨酸(ser/thr)激酶,參與機(jī)體多種重要的生理生化反應(yīng)。本研究主要探討PKC-δ在機(jī)體抗感染固有免疫中的功能。巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞作為固有免疫系統(tǒng)重要組分在第一道免疫防線中發(fā)揮著重要功能。結(jié)核分枝桿菌感染引起的結(jié)核病及白色念珠菌感染引起的深部真菌感染性疾病正嚴(yán)重危害著人類健康及生活質(zhì)量。此研究目的在于探討PKC-δ在巨噬細(xì)胞抗結(jié)核分枝桿菌中的作用及PKC-δ在中性粒細(xì)胞殺滅白色念珠菌中的功能,進(jìn)而探究PKC-δ在機(jī)體抗感染固有免疫中可能發(fā)揮的作用。體外TDB刺激巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)與WT比,TDB介導(dǎo)的PKC-δ-/-小鼠BMDM產(chǎn)生的TNFα明顯減少(2)與WT比,PKC-δ-/-的BMDM產(chǎn)生的TNFα mRNA轉(zhuǎn)錄水平明顯降低。(3)與WT小鼠比,PKC-δ-/-后TDB誘導(dǎo)IkBα降解明顯減少。(4)TDB誘導(dǎo)WT BMDM Mincle蛋白表達(dá)上調(diào),PKC-δ-/-的則不上調(diào)。(5)與WT比,PKC-δ-/-BMDM中TDB誘導(dǎo)的MinclemRNA水平明顯降低。另外,檢測了 PKC-δ在中性粒細(xì)胞抗真菌感染固有免疫中的作用。白色念珠菌感染小鼠,結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)與WT小鼠比,PKC-δ-/-小鼠的死亡率明顯增加。(2)與WT小鼠比,PKC-δ-/-小鼠的腎膿腫和菌負(fù)荷明顯增加。(3)病理結(jié)果顯示PKC-δ-/-小鼠腎組織大量菌絲生長和炎癥細(xì)胞浸潤。接著Zymosan刺激中性粒細(xì)胞進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)與WT比,PKC-δ-/-中性粒細(xì)胞殺滅白色念珠菌能力降低。(2)中性粒細(xì)胞對白色念珠菌的吞噬作用不依賴PKC-δ。(3)與WT比,Zymosan誘導(dǎo)的PKC-δ-/-中性粒細(xì)胞ROS產(chǎn)生顯著降低。綜上,PKC-δ在巨噬細(xì)胞抗結(jié)核分枝桿菌以及在中性粒細(xì)胞殺滅白色念珠菌中都起到了重要作用,證明PKC-δ在機(jī)體抗感染固有免疫中發(fā)揮重要作用。
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R392
【圖文】：

圖１．２ＮＦ－ｋＢ的活化｜７８］逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ．２邋ＮＦ－ｋＢ邋ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ１，Ｓ！逡逑

因此ＢＭＤＭ的純度鑒定是非常必要的。如前所述提取出小鼠骨髓細(xì)逡逑胞后誘導(dǎo)培養(yǎng)成熟的巨噬細(xì)胞，用巨噬細(xì)胞表面特異性Ｆ４／８０＋ＣＤｌｌｂ＋標(biāo)記，并逡逑用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行了純度鑒定，左為不誘導(dǎo)陰性對照組。結(jié)果如圖３．２所示逡逑丨丨卜丨曬｜逡逑；邋ｉ邋ｒＶ邋０邋０４３邋－邋ｉ邐９Ｓ７逡逑ｉｊ邐％邋Ｉ逡逑８邐１邐Ｈ逡逑ａ邐ｉ．一．．．．．逡逑ｌｏｗｗ榦擇邐＾邐？？邐＇？邋＾邐＇＊邋ｔ．邋＇邋９逡逑ＣＯ邋ｌｉｂ邋嘆，ｎ邋？：邋’邐飛．0．邋？邋ｗ、逡逑圖３．２巨噬細(xì)胞純度鑒定結(jié)果逡逑結(jié)果顯示：骨髓細(xì)胞經(jīng)Ｌ９２９誘導(dǎo)培養(yǎng)成熟的細(xì)胞，經(jīng)鑒定后巨噬細(xì)胞的純逡逑度高達(dá)９８％以上，誘導(dǎo)純度高效果較好，可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。逡逑３．２．２邋ＰＫＣ－Ｓ缺失對ＴＤＢ誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響逡逑之前通過結(jié)核分枝桿菌誘導(dǎo)小鼠炎癥模型的體內(nèi)研[偡⑾鄭海校耍茫釉冢裕模灣義嫌盞嫉男∈筧硌字⒎矯嬗忻饗宰饔謾Ｕ飫鎦饕竅臚ü逋庀赴碳な笛椋義瞎鄄歟校耍茫尤筆Ф韻嗤碳は戮奘上赴喙叵赴蜃臃置誆撓跋臁Ｓ緬義希玻刀鄭恚戾澹裕模路直鶇碳ぃ祝院停校耍茫鄭啃∈蟮模攏停模灣澹玻矗�，邋ＥＬＩ蚜检拆Q瀋锨�，辶x媳冉希祝院停校耍茫Ｐ∈缶捺拖赴謔艿劍裕模麓碳ず笙喙叵赴蜃櫻裕希疲錚艫姆皺義廈誶榭觥＝峁⑾鄭河茫裕模麓碳ぃ祝孕∈蟮木奘上赴�，其细胞因讬言ＮＦａ的钒櫫x希常沖義

本文編號：2757768