【摘要】：目的用細(xì)胞膜綠色熒光探針Di O標(biāo)記人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(h BMMSCs),探討其對(duì)h BMMSCs生物學(xué)功能的影響。方法采用Ficoll密度梯度離心法分離、培養(yǎng)h BMMSCs;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Di O對(duì)h BMMSCs的標(biāo)記效率;通過Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、平板克隆實(shí)驗(yàn)、生長曲線分析、成脂及成骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)Di O對(duì)h BMMSCs遷移、增殖和多向分化能力的影響。結(jié)果Di O對(duì)h BMMSC的標(biāo)記效率可達(dá)(99.5±0.4)%;Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、平板克隆實(shí)驗(yàn)、生長曲線分析、成脂及成骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與未標(biāo)記h BMMSCs相比,標(biāo)記后的h BMMSCs遷移、增殖及成脂、成骨分化能力未見明顯改變,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。結(jié)論經(jīng)Di O處理未見明顯影響h BMMSCs的生物學(xué)功能,可做為安全、有效的h BMMSCs體外標(biāo)記綠色熒光染料。
【圖文】：

注:A，未標(biāo)記hBMMSCs白光圖;B，DiO標(biāo)記的hBMMSCs白光圖;C，DiO標(biāo)記的hBMMSCs熒光圖。圖1DiO標(biāo)記后hBMMSCs熒光圖(×100)2．2hBMMSCs的標(biāo)記效率熒光顯微鏡下可觀察到經(jīng)DiO標(biāo)記24h后的hBMMSCs呈現(xiàn)綠色熒光，見圖1。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，標(biāo)記DiO的hBMMSCs陽性率可達(dá)到(99．5±0．4)%，未標(biāo)記的hBMMSCs陽性率僅為(0．5±0．4)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=568．4，P＜0．05)。2．3DiO標(biāo)記對(duì)hBMMSCs遷移能力的影響Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，DiO標(biāo)記的hBMMSCs遷移數(shù)目約為(88．0±3．1)個(gè)，與未標(biāo)記hBMMSCs(87．3±1．5)個(gè)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0．05，P＞0．05)。2．4DiO標(biāo)記對(duì)hBMMSCs增殖能力的影響克隆形成試驗(yàn)結(jié)果顯示，2周后DiO標(biāo)記的hBMMSCs形成的克隆數(shù)目約為(203．7±17．9)個(gè)，與未標(biāo)記hBMMSCs(196．7±12．0)個(gè)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0．32，P＞0．05)。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示，DiO標(biāo)記后hBMMSCs與未標(biāo)記hBMMSCs的生長曲線變化基本一致，(F=0．005，P＞0．05)，見圖2。圖2DiO標(biāo)記后hBMMSCs生長曲線2．5DiO標(biāo)記對(duì)hBMMSCs分化能力的影響分別對(duì)DiO標(biāo)記與未標(biāo)記的hBMMSCs進(jìn)行成脂和成骨誘導(dǎo)，成脂誘導(dǎo)6d后兩組細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下均可觀察到折光性很強(qiáng)的小空泡出現(xiàn)，提示脂滴形成，誘導(dǎo)2周后，細(xì)胞用油紅O染色，兩組細(xì)胞胞漿中均可見大量桔紅色的小脂滴(圖3A)。細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)3周后，用茜素紅染色，光鏡下可看見大量陽性的胞質(zhì)染成紅棕色的多邊形細(xì)胞(圖3B)。表明DiO標(biāo)記對(duì)hBMMSCs向成脂細(xì)胞和成骨細(xì)胞分化的能力無明顯影響。注:A，油紅O染色;B，茜素紅S染色。圖3DiO標(biāo)記后hBMMSCs成脂誘導(dǎo)和成骨誘導(dǎo)(×100)·54·臨床檢驗(yàn)雜志2016年1月第34卷第1期ChinJClinLabSci，Jan．2016，Vol．34，No．1

注:A，未標(biāo)記hBMMSCs白光圖;B，DiO標(biāo)記的hBMMSCs白光圖;C，DiO標(biāo)記的hBMMSCs熒光圖。圖1DiO標(biāo)記后hBMMSCs熒光圖(×100)2．2hBMMSCs的標(biāo)記效率熒光顯微鏡下可觀察到經(jīng)DiO標(biāo)記24h后的hBMMSCs呈現(xiàn)綠色熒光，見圖1。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，標(biāo)記DiO的hBMMSCs陽性率可達(dá)到(99．5±0．4)%，未標(biāo)記的hBMMSCs陽性率僅為(0．5±0．4)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=568．4，P＜0．05)。2．3DiO標(biāo)記對(duì)hBMMSCs遷移能力的影響Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，DiO標(biāo)記的hBMMSCs遷移數(shù)目約為(88．0±3．1)個(gè)，與未標(biāo)記hBMMSCs(87．3±1．5)個(gè)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0．05，P＞0．05)。2．4DiO標(biāo)記對(duì)hBMMSCs增殖能力的影響克隆形成試驗(yàn)結(jié)果顯示，2周后DiO標(biāo)記的hBMMSCs形成的克隆數(shù)目約為(203．7±17．9)個(gè)，與未標(biāo)記hBMMSCs(196．7±12．0)個(gè)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0．32，P＞0．05)。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示，DiO標(biāo)記后hBMMSCs與未標(biāo)記hBMMSCs的生長曲線變化基本一致，(F=0．005，P＞0．05)，見圖2。圖2DiO標(biāo)記后hBMMSCs生長曲線2．5DiO標(biāo)記對(duì)hBMMSCs分化能力的影響分別對(duì)DiO標(biāo)記與未標(biāo)記的hBMMSCs進(jìn)行成脂和成骨誘導(dǎo)，成脂誘導(dǎo)6d后兩組細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下均可觀察到折光性很強(qiáng)的小空泡出現(xiàn)，提示脂滴形成，誘導(dǎo)2周后，細(xì)胞用油紅O染色，兩組細(xì)胞胞漿中均可見大量桔紅色的小脂滴(圖3A)。細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)3周后，用茜素紅染色，光鏡下可看見大量陽性的胞質(zhì)染成紅棕色的多邊形細(xì)胞(圖3B)。表明DiO標(biāo)記對(duì)hBMMSCs向成脂細(xì)胞和成骨細(xì)胞分化的能力無明顯影響。注:A，油紅O染色;B，茜素紅S染色。圖3DiO標(biāo)記后hBMMSCs成脂誘導(dǎo)和成骨誘導(dǎo)(×100)·54·臨床檢驗(yàn)雜志2016年1月第34卷第1期ChinJClinLabSci，Jan．2016，Vol．34，No．1

注:A，未標(biāo)記hBMMSCs白光圖;B，DiO標(biāo)記的hBMMSCs白光圖;C，DiO標(biāo)記的hBMMSCs熒光圖。圖1DiO標(biāo)記后hBMMSCs熒光圖(×100)2．2hBMMSCs的標(biāo)記效率熒光顯微鏡下可觀察到經(jīng)DiO標(biāo)記24h后的hBMMSCs呈現(xiàn)綠色熒光，見圖1。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，標(biāo)記DiO的hBMMSCs陽性率可達(dá)到(99．5±0．4)%，未標(biāo)記的hBMMSCs陽性率僅為(0．5±0．4)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=568．4，P＜0．05)。2．3DiO標(biāo)記對(duì)hBMMSCs遷移能力的影響Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，DiO標(biāo)記的hBMMSCs遷移數(shù)目約為(88．0±3．1)個(gè)，與未標(biāo)記hBMMSCs(87．3±1．5)個(gè)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0．05，P＞0．05)。2．4DiO標(biāo)記對(duì)hBMMSCs增殖能力的影響克隆形成試驗(yàn)結(jié)果顯示，2周后DiO標(biāo)記的hBMMSCs形成的克隆數(shù)目約為(203．7±17．9)個(gè)，與未標(biāo)記hBMMSCs(196．7±12．0)個(gè)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0．32，P＞0．05)。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示，DiO標(biāo)記后hBMMSCs與未標(biāo)記hBMMSCs的生長曲線變化基本一致，(F=0．005，P＞0．05)，見圖2。圖2DiO標(biāo)記后hBMMSCs生長曲線2．5DiO標(biāo)記對(duì)hBMMSCs分化能力的影響分別對(duì)DiO標(biāo)記與未標(biāo)記的hBMMSCs進(jìn)行成脂和成骨誘導(dǎo)，成脂誘導(dǎo)6d后兩組細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下均可觀察到折光性很強(qiáng)的小空泡出現(xiàn)，提示脂滴形成，誘導(dǎo)2周后，細(xì)胞用油紅O染色，兩組細(xì)胞胞漿中均可見大量桔紅色的小脂滴(圖3A)。細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)3周后，用茜素紅染色，光鏡下可看見大量陽性的胞質(zhì)染成紅棕色的多邊形細(xì)胞(圖3B)。表明DiO標(biāo)記對(duì)hBMMSCs向成脂細(xì)胞和成骨細(xì)胞分化的能力無明顯影響。注:A，油紅O染色;B，茜素紅S染色。圖3DiO標(biāo)記后hBMMSCs成脂誘導(dǎo)和成骨誘導(dǎo)(×100)·54·臨床檢驗(yàn)雜志2016年1月第34卷第1期ChinJClinLabSci，Jan．2016，Vol．34，No．1

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