【摘要】：背景 大量流行病學(xué)資料表明,適量飲酒有保護(hù)心血管系統(tǒng)的作用,可降低冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病,coronary artery disease, CAD)的發(fā)生率及病死率。早期研究多認(rèn)為酒中的非乙醇活性成分起到了重要作用,后來研究發(fā)現(xiàn)乙醇對心血管系統(tǒng)起主要保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn),低劑量乙醇可通過激活腺苷受體依賴的PI3K-Akt通路增強(qiáng)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)內(nèi)皮型一氧化氮合酶(edothelial nitric oxide synthase, eNOS)的表達(dá)及活性,并增加一氧化氮(nitric oxide, NO)生成及釋放。 然而,乙醇作為一種外源性的小分子有機(jī)化合物,可通過自由擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行代謝,經(jīng)由酒精代謝系統(tǒng)進(jìn)行代謝時(shí)可伴隨產(chǎn)生活性氧(reactive oxygen species, ROS)�；钚匝鯇�(nèi)皮細(xì)胞eNOS有雙面作用,并取決于ROS的水平。大量活性氧可通過eNOS脫偶聯(lián)或者拮抗其上游調(diào)節(jié)分子來抑制eNOS活性,導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂；而少量活性氧可以增強(qiáng)eNOS的活性。而在乙醇干預(yù)時(shí)的ROS水平取決于抗氧化體系的拮抗作用。 近來研究發(fā)現(xiàn),ALDH2不僅代謝乙醛,還可通過氧化丙二醛(malondialdehyde, MDA)和4-羥基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)等毒性醛類物質(zhì)來發(fā)揮間接抗氧化作用,拮抗ROS生成。多項(xiàng)研究結(jié)果表明調(diào)控ALDH2表達(dá)和活性可以影響機(jī)體細(xì)胞對氧化應(yīng)激的應(yīng)答。ALDH2活性可在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)與修飾、翻譯和翻譯后修飾不同水平上進(jìn)行調(diào)節(jié)。尤其是,ALDH2活性可受乙�；揎椀恼{(diào)控,其可被線粒體SIRT3直接脫乙�；鴮�(dǎo)致酶活性下降。 SIRT3具有依賴NAD+的組蛋白脫乙�；富钚�,位于線粒體基質(zhì)中,可以通過調(diào)控線粒體蛋白乙�；接|發(fā)一系列細(xì)胞適應(yīng)性改變來應(yīng)答代謝應(yīng)激。SIRT3活性對細(xì)胞內(nèi)NAD+/NADH比值變化十分敏感,呈正相關(guān)。有意思的是,乙醇代謝會導(dǎo)致NAD+/NADH比值下降,因此很有可能抑制SIRT3活性。 因此,我們提出以下假說：乙醇可通過增強(qiáng)ALDH2酶活性來調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)ROS水平,進(jìn)而影響乙醇增強(qiáng)eNOS活性的作用；且SIRT3依賴的乙�；揎椬饔每赡軈⑴c乙醇對ALDH2活性的調(diào)控過程。依賴于SIRT3的ALDH2乙�；揎椏赡苁且掖急Ｗo(hù)作用的重要機(jī)制,是防治動脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)疾病的新靶點(diǎn)。 方法 1.細(xì)胞培養(yǎng)與處理：培養(yǎng)人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞(human aortic endothelial cells, HAECs),使用內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。待細(xì)胞生長融合至80-90%時(shí),用不同濃度的乙醇刺激不同時(shí)間；用P13K抑制劑或外源性NAD預(yù)處理細(xì)胞時(shí),先用試劑預(yù)處理細(xì)胞24小時(shí)后,再用乙醇繼續(xù)孵育30分鐘； 2. siRNA和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染：用特異性siRNA對細(xì)胞ALDH2和SIRT3進(jìn)行抑制,用構(gòu)建好的SIRT3過表達(dá)質(zhì)粒提高細(xì)胞內(nèi)SIRT3表達(dá)。首先用脂質(zhì)體與siRNA/質(zhì)粒形成復(fù)合物,后轉(zhuǎn)染入HAECs。轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞用／不用ROS清除劑預(yù)處理后,再加入乙醇繼續(xù)孵育； 3.實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測：使用Trizol試劑提取細(xì)胞RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后使用SYBR Green進(jìn)行實(shí)時(shí)定量RT-PCR。基因的相對表達(dá)量采用2-△△ct計(jì)算。 4. Western blotting檢測：使用細(xì)胞裂解液提取細(xì)胞總蛋白,使用Western blotting檢測方法從蛋白水平檢測用于檢測HAECs中ALDH2、eNOS、p-eNOS、 Akt、p-Akt、PI3K、SIRT3、4-HNE等蛋白的表達(dá)量。 5.免疫共沉淀：用裂解液提取細(xì)胞總蛋白,加入抗體和蛋白A/G瓊脂糖吸附球共同孵育4℃過夜進(jìn)行免疫沉淀,高速離心將瓊脂糖球去除并吸取上清液進(jìn)行后續(xù)Western blotting檢測。 6.內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性檢測：應(yīng)用eNOS檢測試劑盒來分析細(xì)胞eNOS的活性,在激發(fā)波長495nm,發(fā)射波長515nm下進(jìn)行吸光度測量。eNOS相對活性用實(shí)驗(yàn)組與對照組的活性比值來表示。 7.線粒體ALDH2酶活性檢測：提取細(xì)胞線粒體,線粒體ALDH2活性是通過在酶標(biāo)儀上監(jiān)測A340nm下NAD+轉(zhuǎn)化為NADH的含量變化所得。ALDH2酶活性單位為nmol/mg/min。 8.線粒體SIRT3活性檢測：采用SIRT3活性熒光定量檢測試劑盒檢測,在激發(fā)光340nm和發(fā)射光440nm檢測熒光值。SIRT3相對活性是實(shí)驗(yàn)組與對照組的活性比值來表示。 9.細(xì)胞內(nèi)ROS水平檢測：應(yīng)用DCFH-DA熒光探針對細(xì)胞內(nèi)活性氧簇進(jìn)行標(biāo)記,后在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行檢測。 10.線粒體NAD+/NADH比值檢測：細(xì)胞收集后提取線粒體,采用NAD+/NADH比值檢測試劑盒進(jìn)行檢測,分別在450nm處讀取NADt和NADH數(shù)值。NAD+/NADH比值計(jì)算式為：[NADt-NADH]/NADH。 結(jié)果 1.乙醇對內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性的作用呈劑量依賴性：在不同濃度乙醇處理細(xì)胞30min后,隨乙醇濃度增加,內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性逐漸升高,在20mM乙醇作用下達(dá)到最高峰(1.67倍,P0.001),而后隨乙醇濃度增加eNOS活性逐漸下降,至100mM乙醇作用時(shí)回到基線水平。乙醇對eNOS活性調(diào)控呈時(shí)間依賴性：在乙醇作用5min后,內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性即開始升高,在30min后達(dá)最大值,之后逐漸下降,且在乙醇作用120min后,內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性仍然顯著高于對照組(P0.001)； 2.20mM乙醇作用30min后可使p-eNOS和p-Akt蛋白表達(dá)明顯增加,與乙醇對eNOS活性的作用趨勢一致,且乙醇的這一作用可被P13K抑制劑拮抗,提示乙醇是通過激活PI3K/Akt通路提高內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性的； 3. ALDH2的活性在乙醇刺激下呈時(shí)間依賴性改變：乙醇處理后15min,內(nèi)皮細(xì)胞ALDH2活性即開始明顯增加,并在30min達(dá)到最大值(1.65倍,P0.001),但隨后即迅速下降,但對ALDH2mRNA和蛋白表達(dá)沒有影響； 4. ALDH2siRNA抑制內(nèi)皮細(xì)胞ALDH2表達(dá)后,可拮抗乙醇增加Akt和eNOS活性的作用； 5.20mM乙醇對細(xì)胞內(nèi)ROS含量沒有影響。而在ALDH2siRNA預(yù)孵育的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn),乙醇干預(yù)細(xì)胞后ROS含量明顯升高66%。且ROS清除劑(NAC和DTT)可拮抗ALDH2siRNA對乙醇內(nèi)皮保護(hù)的抑制作用； 6.乙酰化ALDH2蛋白表達(dá)變化與乙醇刺激呈時(shí)間依賴性。乙醇處理后15min,內(nèi)皮細(xì)胞乙�；疉LDH2蛋白表達(dá)即開始明顯增加,并在30min達(dá)到峰值(P0.001),但隨后即明顯下降,與ALDH2活性變化趨勢一致； 7.20mM乙醇處理15min后SIRT3活性即下降,在30min時(shí)下降最為明顯,然后隨時(shí)間增加又逐漸恢復(fù)到基線水平。且過表達(dá)SIRT3可以抵抗乙醇上調(diào)ALDH2乙�；突钚缘淖饔�； 8. SIRT3過表達(dá)的內(nèi)皮細(xì)胞受乙醇刺激后,ROS水平明顯增加。且乙醇激活A(yù)kt和eNOS的作用也被SIRT3過表達(dá)質(zhì)粒所抑制； 9.乙醇處理內(nèi)皮細(xì)胞15min后NAD+/NADH比值顯著下降,在30min時(shí)下降達(dá)最低值。外源性NAD干預(yù)下,乙醇抑制SIRT3活性的作用明顯減弱,且可抑制乙醇上調(diào)ALDH2和eNOS活性的作用。 結(jié)論 1.乙醇通過激活PI3K-Akt通路提高eNOS活性； 2.乙醇可上調(diào)ALDH2活性； 3. ALDH2是一種內(nèi)源性抗氧化應(yīng)激因子,使細(xì)胞在乙醇處理后保持氧化還原狀態(tài)穩(wěn)定,從而使乙醇增強(qiáng)eNOS活性的作用順利實(shí)現(xiàn)； 4.乙醇通過降低SIRT3活性,上調(diào)ALDH2乙�；胶突钚�； 5.乙醇通過降低NAD+/NADH比值抑制SIRT3活性。 背景 內(nèi)皮衰老是導(dǎo)致動脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)發(fā)生發(fā)展的重要原因。內(nèi)皮細(xì)胞衰老是正常血管隨增齡發(fā)生的自然現(xiàn)象,同時(shí)伴隨端�？s短和端粒酶活性下降,亦稱為復(fù)制性衰老,是老年人發(fā)生AS的主要原因。適量飲酒可以有效預(yù)防老年人AS疾病的發(fā)生,降低冠心病發(fā)病率、死亡率和全因死亡率,具有延緩衰老,延長人類壽命的作用。因此本實(shí)驗(yàn)著重研究飲酒抗衰老的作用機(jī)制,來探討防治AS新的靶分子蛋白。 一些研究發(fā)現(xiàn),低劑量乙醇可以提高靜息內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性,增加NO釋放。既然乙醇可以增強(qiáng)靜息內(nèi)皮細(xì)胞eNOS的活性,那么乙醇的這一作用機(jī)制很可能也存在于衰老內(nèi)皮細(xì)胞中。且以往一項(xiàng)研究表明,適量乙醇攝入可以抵抗增齡相關(guān)的認(rèn)知功能障礙,提示乙醇可以影響衰老進(jìn)程。 SIRT1是一類調(diào)控生物體壽命的重要蛋白,屬于第三類組蛋白去乙�；�。它可以與染色質(zhì)、轉(zhuǎn)錄因子、轉(zhuǎn)錄共調(diào)控因子和非組蛋白底物相互作用,通過去�；饔谜{(diào)節(jié)細(xì)胞生存、衰老、凋亡等發(fā)生發(fā)展等一系列生理病理過程。SIRT1作為一個(gè)重要的細(xì)胞內(nèi)調(diào)控蛋白,其自身的表達(dá)和活性不僅受基因表達(dá)的調(diào)控,還受細(xì)胞內(nèi)NAD+/NADH比值、氧化應(yīng)激、翻譯后修飾和SIRT1核-漿穿梭變化影響。論文I中已證實(shí)適量乙醇可快速上調(diào)NAD+/NADH比值而影響SIRT3活性,由于SIRT1與SIRT3同源性較高,催化活性域的氨基酸序列同源性可達(dá)89%,故乙醇很有可能也會影響SIRT1的生物學(xué)功能。 我們前期研究發(fā)現(xiàn)這乙醇增強(qiáng)靜息內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性的作用可被乙醇誘導(dǎo)的高活性乙醛脫氫酶2(aldehyde dehydrogenase2, ALDH2)所調(diào)控,ALDH2起到“分子開關(guān)”作用。那么,乙醇是否可通過調(diào)控ALDH2影響內(nèi)皮衰老,目前還無相關(guān)報(bào)道。線粒體ALDH2是一種酒精代謝關(guān)鍵酶,在心血管系統(tǒng)表達(dá)豐富。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)高活性的ALDH2可能會預(yù)防AS的發(fā)生發(fā)展。國內(nèi)外陸續(xù)有研究表明,ALDH2具有拮抗衰老的作用。我們前期研究已證實(shí)ALDH2是一種內(nèi)源性抗氧化應(yīng)激因子。而氧化應(yīng)激學(xué)說是衰老機(jī)制理論的重要組成部分,尤其是可影響SIRT1功能,故ALDH2可能是通過抗氧化應(yīng)激來影響SIRT1功能,進(jìn)而發(fā)揮抑制衰老的作用,是防治AS的新靶點(diǎn)。 因此我們提出如下假說：乙醇具有延緩內(nèi)皮復(fù)制性衰老的作用,且SIRT1與ALDH2這兩種抗衰老蛋白均可能在此過程中發(fā)揮重要介導(dǎo)作用；低劑量乙醇可能通過上調(diào)ALDH2活性誘導(dǎo)SIRT1生物學(xué)功能增強(qiáng),進(jìn)而延緩內(nèi)皮衰老、拮抗AS發(fā)生與發(fā)展。 方法 1.細(xì)胞培養(yǎng)與處理：培養(yǎng)人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞(human aortic endothelial cells, HAECs),使用內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基在37℃和5%CO2孵育箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。 2.構(gòu)建HAECs復(fù)制性衰老模型：采用連續(xù)傳代方法構(gòu)建內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)制性衰老模型,每一代細(xì)胞傳代前均行細(xì)胞數(shù)目檢測,計(jì)算群體倍增水平(population doubling level, PDL)。本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)PDL22細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)后會進(jìn)入衰老狀態(tài),故將PDL22作為本實(shí)驗(yàn)的衰老模型。 3.乙醇處理衰老細(xì)胞：待衰老細(xì)胞生長融合至85%左右時(shí),饑餓24h后用不同濃度乙醇(OmM,5mM,20mM,50mM,100mM)處理6天。 4.細(xì)胞活性檢測：采用CCK-8試劑盒進(jìn)行檢測,在450nnm處測定吸光度值。 5.p-半乳糖苷酶染色：對細(xì)胞進(jìn)行p-半乳糖苷酶染色,衰老細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)染,并在光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)染色陽性細(xì)胞數(shù)目。 6. BrdU增殖檢測：BrdU可代替胸腺嘧啶摻入到新合成的DNA中,用免疫細(xì)胞化學(xué)法標(biāo)記BrdU,并在酶標(biāo)儀上450nm處讀取吸光度值來檢測細(xì)胞增殖能力。 7. siRNA和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染：用特異性siRNA對細(xì)胞ALDH2和SIRT1進(jìn)行抑制,用ALDH2表達(dá)質(zhì)粒和特異性定位核／胞質(zhì)的SIRT1過表達(dá)質(zhì)粒分別提高細(xì)胞內(nèi)ALDH2和核／胞質(zhì)內(nèi)SIRT1表達(dá)。首先用脂質(zhì)體與siRNA/質(zhì)粒形成復(fù)合物,后轉(zhuǎn)染入HAECs。轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞再加入乙醇繼續(xù)孵育； 8.實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測：使用Trizol試劑提取細(xì)胞RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后使用SYBR Green進(jìn)行實(shí)時(shí)定量RT-PCR�；虻南鄬Ρ磉_(dá)量采用2-△△ct的計(jì)算方法。 9. Western blotting檢測：使用細(xì)胞裂解液提取細(xì)胞總蛋白,使用Western blotting檢測方法從蛋白水平檢測用于檢測細(xì)胞中ALDH2、eNOS、SIRT1等蛋白的表達(dá)量。 10.內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性檢測：應(yīng)用eNOS檢測試劑盒來分析細(xì)胞eNOS的活性,在激發(fā)波長495nm,發(fā)射波長515nm下進(jìn)行吸光度測量。eNOS相對活性是用實(shí)驗(yàn)組與對照組的活性比值來表示的。 11.線粒體ALDH2酶活性檢測：提取細(xì)胞線粒體,線粒體ALDH2活性是通過在酶標(biāo)儀上監(jiān)測A340nm下NAD+轉(zhuǎn)化為NADH的含量變化所得。ALDH2酶活性單位為nmol/mg/min。 12.免疫熒光染色：細(xì)胞培養(yǎng)終止后,用一抗反應(yīng)液進(jìn)行孵育,隨后用熒光標(biāo)記的二抗進(jìn)行處理,最后用含DAPI的防淬滅封片劑封片在免疫共聚焦顯微鏡下觀察。 結(jié)果 1.通過對HAECs細(xì)胞株連續(xù)傳代培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、SA-β-gal衰老染色、BrdU增殖檢測、細(xì)胞活性等指標(biāo)變化表明,PDL8細(xì)胞屬于年輕細(xì)胞,而PDL22細(xì)胞開始進(jìn)入衰老狀態(tài)； 2.衰老細(xì)胞中eNOS蛋白、mRNA表達(dá)和活性均明顯下降,表明內(nèi)皮復(fù)制性衰老伴隨內(nèi)皮功能下降； 3.通過檢測不同濃度(0mM、5mM、20mM、50mM、100mM)乙醇處理6天后細(xì)胞細(xì)胞衰老表型的變化,結(jié)果顯示20mM乙醇有延緩內(nèi)皮衰老的作用,5mM乙醇對內(nèi)皮衰老表型改變不大,而50Mm和100mM乙醇明顯降低細(xì)胞數(shù)目； 4.20mM乙醇可增加衰老內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)eNOS mRNA和蛋白表達(dá),并增強(qiáng)其活性,進(jìn)一步證實(shí)20mM乙醇有改善衰老內(nèi)皮細(xì)胞功能的作用； 5. SIRT1在衰老細(xì)胞內(nèi)的分布發(fā)生明顯變化：與年輕PDL8細(xì)胞相比,衰老細(xì)胞內(nèi)SIRT1在核內(nèi)蛋白表達(dá)明顯下降,而在胞質(zhì)中表達(dá)增強(qiáng),但是SIRT1的總蛋白量沒有發(fā)生改變,即SIRT1發(fā)生了核漿轉(zhuǎn)位； 6.通過特異性過表達(dá)衰老細(xì)胞內(nèi)核/胞質(zhì)SIRT1發(fā)現(xiàn),定位核而非胞質(zhì)的SIRT1具有抵抗內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)制性衰老的作用； 7.20mM乙醇可增強(qiáng)衰老內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)SIRT1在核中的表達(dá),抑制其在胞漿中的蛋白表達(dá),即乙醇有抑制衰老內(nèi)皮細(xì)胞SIRT1核漿轉(zhuǎn)位的作用；進(jìn)一步應(yīng)用SIRT1siRNA特異性抑制其表達(dá)后,乙醇延緩內(nèi)皮衰老的作用明顯削弱； 8.與年輕細(xì)胞相比,衰老細(xì)胞內(nèi)ALDH2蛋白、mRNA表達(dá)和活性明顯下降,提示在內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)制性衰老進(jìn)程中,ALDH2表達(dá)和活性明顯下降； 9.應(yīng)用ALDH2過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染PDL22細(xì)胞后6天,結(jié)果表明ALDH2過表達(dá)可明顯延緩HAECs復(fù)制性衰老并改善內(nèi)皮功能； 10.20mM乙醇可增加衰老內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)ALDH2mRNA和蛋白表達(dá),并增強(qiáng)其活性；應(yīng)用ALDH2特異性siRNA轉(zhuǎn)染PDL22細(xì)胞來抑制其表達(dá)后,結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙醇延緩內(nèi)皮衰老的作用明顯減弱； 11.ALDH2特異性siRNA轉(zhuǎn)染PDL22細(xì)胞后再用乙醇孵育,結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙醇抑制SIRT1核漿轉(zhuǎn)位的作用明顯削弱。 結(jié)論 1.成功建立HAECs復(fù)制性衰老模型； 2.乙醇具有延緩HAECs復(fù)制性衰老并增強(qiáng)衰老內(nèi)皮細(xì)胞功能的作用； 3. HAECs復(fù)制性衰老伴隨SIRT1核漿轉(zhuǎn)位,乙醇可通過抑制SIRT1核漿轉(zhuǎn)位來延緩HAECs復(fù)制性衰老； 4. HAECs復(fù)制性衰老伴隨ALDH2表達(dá)和活性下降,乙醇可通過增強(qiáng)ALDH2表達(dá)和活性來延緩HAECs復(fù)制性衰老； 5.乙醇可通過增強(qiáng)ALDH2表達(dá)和活性,來抑制SIRT1核漿轉(zhuǎn)位,ALDH2-SIRT1通路可能是乙醇延緩內(nèi)皮衰老的重要分子機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R363

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1 賈紅亮;呂海濤;孫凌;張建敏;嚴(yán)文華;朱伯會;曹磊;周萬平;丁粵粵;;辛伐他汀對內(nèi)皮細(xì)胞釋放微顆粒的影響及其機(jī)制的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國兒科學(xué)術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2010年

2 馬向紅;黃體鋼;楊萬松;周麗娟;;四氫生物喋呤對內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮和超氧陰離子的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病分會第八次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2004年

3 冷曄;丁祖泉;高艷琴;;剪切力對內(nèi)皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞—小腸黏膜下基質(zhì)復(fù)合培養(yǎng)物的影響[A];第八屆全國生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

4 宋明寶;于學(xué)軍;朱光旭;;鈣離子跨縫隙連接在內(nèi)皮細(xì)胞與平滑肌細(xì)胞間傳遞的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第11次心血管病學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

5 武曉靜;黃嵐;趙剛;;內(nèi)皮細(xì)胞表型改變對平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換及遷移的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第11次心血管病學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

6 林云鋒;田衛(wèi)東;陳希哲;閆征斌;喬鞠;李志勇;劉磊;鄭曉輝;湯煒;;大鼠脂肪源性內(nèi)皮細(xì)胞成脂潛能的研究[A];2005'中國修復(fù)重建外科論壇論文匯編[C];2005年

7 馬剛;林曉曦;金云波;李偉;王維;胡曉潔;許志成;楊川;;嬰幼兒血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定[A];第四屆華東六省一市整形外科學(xué)術(shù)會議暨2007年浙江省整形、美容學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

8 易龍;陳春燁;金鑫;于斌;舒芙蓉;麋漫天;;人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)方法的改進(jìn)[A];中國營養(yǎng)學(xué)會第十次全國營養(yǎng)學(xué)術(shù)會議暨第七屆會員代表大會論文摘要匯編[C];2008年

9 單志新;林秋雄;楊敏;鄧春玉;朱杰寧;麥麗萍;符永恒;林曙光;余細(xì)勇;;血管緊張素Ⅱ通過AP-1調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞中巨噬細(xì)胞移動抑制因子的表達(dá)[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

10 劉啟兵;劉璐璐;黃繼云;顏森泉;韓峰;樓宜嘉;;S-亞硝酰谷胱甘肽經(jīng)由活性氧-線粒體通路致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[A];中國毒理學(xué)會第五次全國學(xué)術(shù)大會論文集[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 陳丹;科學(xué)家成功逆轉(zhuǎn)老鼠衰老進(jìn)程[N];科技日報(bào);2010年

2 吳一福;西京醫(yī)院振蕩法支架種植內(nèi)皮細(xì)胞獲成功[N];中國醫(yī)藥報(bào);2008年

3 編譯/任秋凌;再生醫(yī)學(xué)使衰老細(xì)胞返老還童[N];北京科技報(bào);2004年

4 ;中藥抗血栓機(jī)理及對內(nèi)皮細(xì)胞的生物醫(yī)學(xué)研究取得佳績[N];科技日報(bào);2000年

5 趙軍;耳毒性藥物對耳蝸螺旋動脈平滑肌和內(nèi)皮細(xì)胞電生理特性的影響項(xiàng)目[N];科技日報(bào);2007年

6 吳一福;PTFE血管材料可攜載VEGF基因轉(zhuǎn)染[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

7 楊茜;美學(xué)者發(fā)現(xiàn)抗癌藥新生物指標(biāo)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

8 衣曉峰 李媛媛;化療可以有另一種方式[N];健康報(bào);2006年

9 紀(jì)英超;Tumsatatin使腫瘤細(xì)胞糧盡援絕[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

10 張以緒;要想皮膚好 關(guān)鍵在三通[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 閭宏偉;S1P2受體介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞衰老的作用研究[D];中南大學(xué);2012年

2 薛麗;乙醛脫氫酶2在乙醇對內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)中的作用及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2012年

3 李寒;開放MitK_（ATP）通道對缺血再灌注心肌保護(hù)作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

4 賈素潔;內(nèi)源性一氧化氮合酶抑制物與內(nèi)皮細(xì)胞通訊功能障礙及（口山）酮的保護(hù)作用[D];中南大學(xué);2007年

5 張毅民;內(nèi)皮源性降鈣素基因相關(guān)肽合成與釋放調(diào)節(jié)機(jī)制及其病理生理意義[D];中南大學(xué);2010年

6 杜歡;基于絡(luò)脈理論的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)控腦微環(huán)境的分子機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

7 邢邯英;血紅素加氧酶-1對糖尿病血管病變的影響及機(jī)制初探[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

8 房凱;高表達(dá)Caveolin-1抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖的信號傳遞機(jī)制研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

9 付嘉;重組人β2糖蛋白1及其第一結(jié)構(gòu)域?qū)沽字贵w綜合癥患者血清誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞活化的影響及作為耐受原的初步探討[D];吉林大學(xué);2006年

10 楊敏;黃芪衛(wèi)矛合劑對糖尿病腎病大鼠腎臟內(nèi)皮細(xì)胞損傷的干預(yù)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王大鵬;VEGF及其受體FLK-1在人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞UPR過程中的表達(dá)[D];中國醫(yī)科大學(xué);2003年

2 邰海服;單純肥胖大鼠血管內(nèi)皮損傷與血脂關(guān)系及丹皮酚的保護(hù)作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2009年

3 楊小芳;促紅細(xì)胞生成素預(yù)防培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的研究[D];蘭州大學(xué);2009年

4 朱紅梅;腫瘤上清液誘導(dǎo)的正常內(nèi)皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞的特性研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2002年

5 李健;鎂對培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞缺氧再復(fù)氧損傷的保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];青島大學(xué);2003年

6 胡學(xué)峰;生物陶瓷人工骨血管化的探索[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 聶志華;胰島素、血管緊張素Ⅱ?qū)θ搜軆?nèi)皮細(xì)胞NF－κB的激活和血脂康干預(yù)的影響[D];江西醫(yī)學(xué)院;2005年

8 劉漪淪;K562細(xì)胞條件培養(yǎng)基對內(nèi)皮細(xì)胞氧化還原態(tài)的影響及其在腫瘤血管生成中的意義[D];四川大學(xué);2005年

9 王雪青;三氧化二砷對內(nèi)皮細(xì)胞增殖和分泌一氧化氮的影響[D];四川大學(xué);2004年

10 高卉;Ghrelin對缺氧/復(fù)氧血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響[D];四川大學(xué);2004年

本文編號：2745826