【摘要】：G蛋白信號通路抑制因子(G-protein pathway suppressor2, GPS2)作為JNK (c-Jun N-terminal kinase)途徑的抑制因子被發(fā)現(xiàn)以來,已經(jīng)被證實參與了多種細胞進程。GPS2可以與多種轉(zhuǎn)錄因子如p53、乳頭瘤病毒E2和調(diào)節(jié)因子X4的變異體3(Regulatory Factor X4variant transcript3, RFX4_3v)相互作用,調(diào)節(jié)目的基因的表達。 GPS2是輔抑制復(fù)合物SMRT (Silencing Mediator for Retinoid and Thyroid-hormone receptors)的組成部分,對SMRT功能的發(fā)揮起著不可或缺的作用。SMRT復(fù)合物介導(dǎo)了他莫昔芬(40HT)對雌激素受體(estrogen receptor a, ERa)的轉(zhuǎn)錄抑制,過表達GPS2能夠增加SMRT的抑制作用,而SMRT和GPS2的敲除能夠促進乳腺癌細胞MCF7的增殖,暗示了GPS2對乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展過程中有重要作用。 SUMO (Small Ubiquition Related Modifier)修飾作為一種重要的翻譯后修飾方式,能夠調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的定位、穩(wěn)定性及活性,本文的研究重點是確定GPS2的SUMO修飾,并進一步研究SUMO修飾對GPS2功能的影響,內(nèi)容包括： 1在COS-7細胞中外源轉(zhuǎn)染GPS2和SUMO1,通過免疫印跡和免疫共沉淀實驗確定了GPS2能夠被SUMO修飾。 2對GPS2進行序列分析和定點突變技術(shù),確定GPS2存在兩個SUMO修飾位點,K45和K71,并且這兩個位點突變之后,GPS2的抑制功能有所減弱,暗示SUMO修飾參與了GPS2介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄抑制。 3通過免疫熒光和核質(zhì)分離實驗,確定SUMO修飾能夠影響GPS2的細胞定位,促進了GPS2在細胞核中定位。并通過半衰期實驗,證明SUMO修飾能夠延長GPS2的半衰期,是通過增加GPS2與β-轉(zhuǎn)導(dǎo)素相似因子-1(transducin beta-like1, TBL1)的相互作用實現(xiàn)的。 4利用螢光素酶報告基因技術(shù),確定SUMO修飾增加GPS2對ERa的轉(zhuǎn)錄抑制作用是由于SUMO修飾促進了GPS2與SMRT之間的相互作用而實現(xiàn)的,并且這種抑制作用并不依賴于配體的存在。除此之外,利用MTT實驗證實,SUMO修飾介導(dǎo)了GPS2抑制HeLa細胞和MCF-7細胞增殖的功能。 本研究主要證明了GPS2能夠被SUMO1修飾,并且GPS2的SUMO修飾為GPS2在細胞核中定位,增加了GPS2的蛋白穩(wěn)定性,增強了GPS2抑制ERa轉(zhuǎn)錄活性的功能,抑制了癌細胞的增殖,對癌癥的發(fā)生提供了理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R363

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 龐朋沙;過倩萍;伍會健;;細胞內(nèi)AhR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的機制研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2010年13期

2 劉文棟;龐朋沙;伍會健;;蛋白質(zhì)多聚SUMO化修飾及其功能[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2009年11期

本文編號：2742397