【摘要】：目的:探討β-胡蘿卜素對脂多糖(LPS)刺激巨噬細胞RAW264.7炎癥因子的影響及其機制。方法:采用5μg/ml的LPS刺激巨噬細胞24 h后用不同濃度的β-胡蘿卜素(20、40、80、160μmol/L)處理細胞3 h,MTT法測細胞活性,熒光定量PCR測炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA相對表達量,ELISA測炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌量,Western blot測NF-κB p65蛋白相對表達量。5μg/ml的LPS和不同濃度的NF-κB抑制劑PDTC(1、5、10μg/ml)共同處理巨噬細胞24 h,Western blot測NF-κB p65蛋白相對表達量,熒光定量PCR、ELISA測炎癥因子的表達和分泌。比較LPS+PDTC組和LPS+PDTC+β-胡蘿卜素組炎癥因子和NF-κB p65蛋白相對表達的變化。結(jié)果:與LPS組相比,不同濃度的β-胡蘿卜素對LPS刺激的巨噬細胞的細胞活性有提升作用,對炎癥因子和NF-κB p65蛋白的表達有抑制作用;抑制NF-κB蛋白的表達可以抑制LPS刺激的巨噬細胞炎癥因子的分泌;LPS+PDTC+β-胡蘿卜素組對炎癥因子的抑制作用比LPS+PDTC組明顯,且差異顯著(P0.05),但兩組對NF-κB p65蛋白的表達不明顯。結(jié)論:β-胡蘿卜素可以通過抑制NF-κB通路中NF-κB p65蛋白的表達抑制LPS刺激的巨噬細胞炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌,且此通路不是唯一相關(guān)的通路。
【圖文】：

至PVDF膜上，用3%的BSA封閉3h，一抗為鼠源的NF-κBp65抗體(1∶1000)，兔源的β-actin抗體(1∶5000)，4℃孵育過夜。1×TBST洗膜后分別加入相應(yīng)的二抗:HＲP標記的山羊抗鼠IgG(1∶2000)和HＲP標記的山羊抗兔IgG(1∶3000)，37℃孵育1h。1×TBST洗膜后，感光，ECL顯色，用密度比值表示目的蛋白量。1.3統(tǒng)計學方法應(yīng)用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析，數(shù)據(jù)用x±s形式表示，并采用單因素方差分析數(shù)據(jù)，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義，P＜0.01表示差異具有顯著統(tǒng)計學意義。2結(jié)果2.1β-胡蘿卜素對ＲAW264.7細胞活性的影響如圖1所示，β-胡蘿卜素作用ＲAW264.7細胞3h，可以提升細胞活性，且在濃度為20、40、80μmol/L時，差異極顯著(P＜0.01);β-胡蘿卜素作用ＲAW264.7細胞6h，濃度為160μmol/L時，極顯著降低細胞活性(P＜0.01);β-胡蘿卜素作用ＲAW264.7細胞12h，濃度為80、160μmol/L時，極顯著降低細胞活性(P＜0.01)，所以，選取不同濃圖1不同濃度的β-胡蘿卜素作用不同的時間對ＲAW264.7細胞活性的影響Fig．1Differentconcentrationanddifferenttimeofβ-car-oteneoncellviabilityofＲAW264.7cellsNote:Comparedwiththecontrolgroup(0μmol/L)，*.P＜0.05，＊＊.P＜0.01.度的β-胡蘿卜素作用細胞3h作為本試驗的作用時間，在此濃度和時間范圍內(nèi)，β-胡蘿卜素對細胞無明顯毒性，可作為試驗用安全濃度范圍。LPS可以激活巨噬細胞，如圖2所示，5μg/ml的LPS刺激ＲAW264.7細胞24h，細胞活性略有上升，繼續(xù)用不同濃度的β-胡蘿卜素處理細胞3h，細胞活性隨著β-胡蘿卜素濃度的升高而升高，有劑量依賴效應(yīng)。由圖2可知，β-胡蘿卜素對LPS刺激后的巨噬細胞有增殖作用，基于細胞活性方面，此細胞模型建模成功，對細胞沒有毒性。2.2β-胡?

?.01);β-胡蘿卜素作用ＲAW264.7細胞12h，濃度為80、160μmol/L時，極顯著降低細胞活性(P＜0.01)，所以，選取不同濃圖1不同濃度的β-胡蘿卜素作用不同的時間對ＲAW264.7細胞活性的影響Fig．1Differentconcentrationanddifferenttimeofβ-car-oteneoncellviabilityofＲAW264.7cellsNote:Comparedwiththecontrolgroup(0μmol/L)，*.P＜0.05，＊＊.P＜0.01.度的β-胡蘿卜素作用細胞3h作為本試驗的作用時間，在此濃度和時間范圍內(nèi)，β-胡蘿卜素對細胞無明顯毒性，可作為試驗用安全濃度范圍。LPS可以激活巨噬細胞，如圖2所示，5μg/ml的LPS刺激ＲAW264.7細胞24h，細胞活性略有上升，繼續(xù)用不同濃度的β-胡蘿卜素處理細胞3h，細胞活性隨著β-胡蘿卜素濃度的升高而升高，有劑量依賴效應(yīng)。由圖2可知，β-胡蘿卜素對LPS刺激后的巨噬細胞有增殖作用，基于細胞活性方面，此細胞模型建模成功，對細胞沒有毒性。2.2β-胡蘿卜素對LPS刺激ＲAW264.7細胞炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α的影響LPS可激活巨噬細胞，誘導其分泌一系列的炎癥因子，炎癥因子的分泌是評價炎癥嚴重程度的一個量化指標，如圖3A所示，LPS誘導巨噬細胞炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-αmＲNA的表達，用不同濃度的β-胡蘿卜素處理細胞后，炎癥因子mＲNA相對表達量降低，且差異極顯著(P＜0.01);如圖3B所示，LPS刺激巨噬細胞炎癥因子的分泌，不同濃度的β-胡蘿卜素可降低其分泌量，提示β-胡蘿卜素對炎癥因子的表達和分泌有一定的抑制作用。2.3β-胡蘿卜素對LPS刺激ＲAW264.7細胞NF-κBp65蛋白表達的影響NF-κB通路是炎癥通路中重要的通路之一，如圖4所示，用不同濃度的β-胡蘿卜素處理LPS刺激后的巨噬細胞，NF-κBp65蛋白表達量隨β-胡蘿卜素濃度的升高而降低，說明，β

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 汪之頊,蔭士安;β-胡蘿卜素轉(zhuǎn)化為維生素A的機制、調(diào)節(jié)和生物學意義[J];國外醫(yī)學(衛(wèi)生學分冊);2003年05期

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