【摘要】：泡沫病毒(foamy virus, FV)泛指反轉錄病毒科中泡沫病毒亞科的病毒,與人免疫缺陷病毒Ⅰ型(human immunodeficiency virus type1, HIV-1)和人T細胞白血病病毒(human T-cell leukemia virus, HTLV)的基因組結構類似,屬于復雜的反轉錄病毒。泡沫病毒具有獨特的進化地位、潛在的致病性及可能改建為優(yōu)良的基因轉移載體等特點,近年逐漸引起各國疾病防控機構及從事病毒學及免疫學基礎研究學者的重視。學界對靈長類泡沫病毒的研究較為深入,對于非靈長類泡沫病毒的研究相對膚淺,主要涉及貓泡沫病毒(feline foamy virus, FFV)和牛泡沫病毒(bovine foamy virus, BFV)。 我室在上世紀九十年代自主分離到一株中國株牛泡沫病毒3026(BFV strain3026, BFV3026),隨之對其基因功能及其與宿主關系開展系列研究。本文以經過實驗室長期培養(yǎng)的BFV3026為出發(fā)材料,構建多株BFV3026原病毒全長基因組DNA感染性克隆(pBS-BFV),篩選獲得了高復制活性的感染性克隆(pBS-BFV-B);通過與實驗室前期獲得的低活性基因組全長DNA克隆(pBS-BFV-Y)進行基因嵌合比較,對影響該病毒復制活性的關鍵因素進行了分析：發(fā)現BFV附屬蛋白BTas的反式激活的能力與pBS-BFV的復制水平密切相關；分子機制探究結果顯示：其第108位氨基酸是DNA結合結構域中的關鍵氨基酸之一,Asp108突變?yōu)锳sn顯著增強BTas蛋白與Tas應答元件(Tas-responsive element, TRE)的相互作用,提高了BTas蛋白反式激活能力,是該感染性克隆具有高復制活性的主要原因；隨之,使用穩(wěn)定整合BFVLTR-GFP的BFV指示細胞系(BFV indicator cell line, BICL)進行了cell-freeBFV3026篩選實驗,獲得了cell-free BFV3026感染性病毒顆粒,滴度約為1×104TCID50/mL;最后,對病毒另一附屬蛋白BBet的功能進行反向遺傳學研究：證實BBet蛋白在BFV3026早期具有負調控功能。 本研究獲得的高活性BFV3026感染性克隆及cell-free的BFV3026毒株,為深入研究BFV3026的分子生物學特征及構建基因轉移載體準備了良好的實驗材料；利用反向遺傳學方法,在病毒水平探索了BFV3026附屬蛋白BTas和BBet在病毒復制過程中的功能,為深入解析BFV的附屬基因的功能及其對復制特征影響提供了重要實驗依據,提示了分析BFV潛在致病性改變可能的研究方向。相關研究結果為解析泡沫病毒獨特的基因表達調控機制提供依據,為全面認識反轉錄病毒及相關重要致病病毒的致病機理提供新視角,同時可作為將泡沫病毒改建為基因轉移載體的理論依據。
【學位授予單位】：南開大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R373
【圖文】：

第一章 引言 生的細胞病變效應（cytopathic effects, CPE)，使得病變細胞在光鏡下成泡沫丨2]。次年，一株病毒從恒河猴體內分離出來，被命名為猴泡沫病毒I型（simianamy virus type 1, SFV-1 ) [3]。泡沫病毒在發(fā)現之初并未引起人們足夠的注意，至上世紀七十年代初，從一位患有鼻咽癌的肯尼亞人體內分離出一株泡沫病，起初被命名為人泡沫病毒（human foamy vim, HFV) [4],后續(xù)的序列比對分表明這株HFV與來自肯尼亞的SFVcpz的同源性最高[5]，因此人們將HFV的命修改為原型泡沫病毒（prototype foamy virus, PFV) [6]。雖說未發(fā)現真正的FV，但文獻報道PFV可經人畜傳染并在人體內復制8]。PFV是泡沫病毒的模毒株，是人們最了解的泡沫病毒之一，是第一個被克隆并獲得全長序列和感性克隆的泡沫病毒泡沫病毒廣泛分布在脊椎動物中，如貓、牛、馬及他非人類靈長類動物（如大srsr、非洲綠猴、狒沸、恒河猴等），許多新型泡沫病毒隨后也被分1?出來（見表1.2)。 ,00 r SFVbab(14720) -

編碼包裝病毒所需要的結構蛋白與酶類，如衣殼蛋白，蛋白酶、反轉錄酶、整合酶和包膜蛋白（圖1.3上部）[54]。此外，在em；和3' LTR之間有2-3個^u放閱讀框（open reading frame，ORF)，編碼病毒自身的反式轉錄激活因子Tas(transactivator of spumavirus)、Bet (between env and tas )等輔助蛋白[彡纟’ 56】(圖1.3)。前病毒cDNA兩端各有一個長末端重復序列（long terminal repeat, LTR),該序列承擔著啟動子和增強子雙重功能。有別于其他的反轉錄病毒，人們在泡沫病毒中發(fā)現了除5’ LTR之外的第二個啟動子，位于em；基因內部，調節(jié)蛋白Tas編碼區(qū)的上游，被稱為內部啟動子（internal promoter, IP) [57]。此IP可指導病毒早期感染時Tas的轉錄、翻譯

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

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本文編號：2738295