【摘要】：泡沫病毒(foamy virus, FV)泛指反轉(zhuǎn)錄病毒科中泡沫病毒亞科的病毒,與人免疫缺陷病毒Ⅰ型(human immunodeficiency virus type1, HIV-1)和人T細(xì)胞白血病病毒(human T-cell leukemia virus, HTLV)的基因組結(jié)構(gòu)類似,屬于復(fù)雜的反轉(zhuǎn)錄病毒。泡沫病毒具有獨(dú)特的進(jìn)化地位、潛在的致病性及可能改建為優(yōu)良的基因轉(zhuǎn)移載體等特點(diǎn),近年逐漸引起各國(guó)疾病防控機(jī)構(gòu)及從事病毒學(xué)及免疫學(xué)基礎(chǔ)研究學(xué)者的重視。學(xué)界對(duì)靈長(zhǎng)類泡沫病毒的研究較為深入,對(duì)于非靈長(zhǎng)類泡沫病毒的研究相對(duì)膚淺,主要涉及貓泡沫病毒(feline foamy virus, FFV)和牛泡沫病毒(bovine foamy virus, BFV)。 我室在上世紀(jì)九十年代自主分離到一株中國(guó)株牛泡沫病毒3026(BFV strain3026, BFV3026),隨之對(duì)其基因功能及其與宿主關(guān)系開展系列研究。本文以經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期培養(yǎng)的BFV3026為出發(fā)材料,構(gòu)建多株BFV3026原病毒全長(zhǎng)基因組DNA感染性克隆(pBS-BFV),篩選獲得了高復(fù)制活性的感染性克隆(pBS-BFV-B);通過與實(shí)驗(yàn)室前期獲得的低活性基因組全長(zhǎng)DNA克隆(pBS-BFV-Y)進(jìn)行基因嵌合比較,對(duì)影響該病毒復(fù)制活性的關(guān)鍵因素進(jìn)行了分析：發(fā)現(xiàn)BFV附屬蛋白BTas的反式激活的能力與pBS-BFV的復(fù)制水平密切相關(guān)；分子機(jī)制探究結(jié)果顯示：其第108位氨基酸是DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域中的關(guān)鍵氨基酸之一,Asp108突變?yōu)锳sn顯著增強(qiáng)BTas蛋白與Tas應(yīng)答元件(Tas-responsive element, TRE)的相互作用,提高了BTas蛋白反式激活能力,是該感染性克隆具有高復(fù)制活性的主要原因；隨之,使用穩(wěn)定整合BFVLTR-GFP的BFV指示細(xì)胞系(BFV indicator cell line, BICL)進(jìn)行了cell-freeBFV3026篩選實(shí)驗(yàn),獲得了cell-free BFV3026感染性病毒顆粒,滴度約為1×104TCID50/mL;最后,對(duì)病毒另一附屬蛋白BBet的功能進(jìn)行反向遺傳學(xué)研究：證實(shí)BBet蛋白在BFV3026早期具有負(fù)調(diào)控功能。 本研究獲得的高活性BFV3026感染性克隆及cell-free的BFV3026毒株,為深入研究BFV3026的分子生物學(xué)特征及構(gòu)建基因轉(zhuǎn)移載體準(zhǔn)備了良好的實(shí)驗(yàn)材料；利用反向遺傳學(xué)方法,在病毒水平探索了BFV3026附屬蛋白BTas和BBet在病毒復(fù)制過程中的功能,為深入解析BFV的附屬基因的功能及其對(duì)復(fù)制特征影響提供了重要實(shí)驗(yàn)依據(jù),提示了分析BFV潛在致病性改變可能的研究方向。相關(guān)研究結(jié)果為解析泡沫病毒獨(dú)特的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制提供依據(jù),為全面認(rèn)識(shí)反轉(zhuǎn)錄病毒及相關(guān)重要致病病毒的致病機(jī)理提供新視角,同時(shí)可作為將泡沫病毒改建為基因轉(zhuǎn)移載體的理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：南開大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R373
【圖文】：

第一章 引言 生的細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathic effects, CPE)，使得病變細(xì)胞在光鏡下成泡沫丨2]。次年，一株病毒從恒河猴體內(nèi)分離出來(lái)，被命名為猴泡沫病毒I型（simianamy virus type 1, SFV-1 ) [3]。泡沫病毒在發(fā)現(xiàn)之初并未引起人們足夠的注意，至上世紀(jì)七十年代初，從一位患有鼻咽癌的肯尼亞人體內(nèi)分離出一株泡沫病，起初被命名為人泡沫病毒（human foamy vim, HFV) [4],后續(xù)的序列比對(duì)分表明這株HFV與來(lái)自肯尼亞的SFVcpz的同源性最高[5]，因此人們將HFV的命修改為原型泡沫病毒（prototype foamy virus, PFV) [6]。雖說(shuō)未發(fā)現(xiàn)真正的FV，但文獻(xiàn)報(bào)道PFV可經(jīng)人畜傳染并在人體內(nèi)復(fù)制8]。PFV是泡沫病毒的模毒株，是人們最了解的泡沫病毒之一，是第一個(gè)被克隆并獲得全長(zhǎng)序列和感性克隆的泡沫病毒泡沫病毒廣泛分布在脊椎動(dòng)物中，如貓、牛、馬及他非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物（如大srsr、非洲綠猴、狒沸、恒河猴等），許多新型泡沫病毒隨后也被分1?出來(lái)（見表1.2)。 ,00 r SFVbab(14720) -

編碼包裝病毒所需要的結(jié)構(gòu)蛋白與酶類，如衣殼蛋白，蛋白酶、反轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和包膜蛋白（圖1.3上部）[54]。此外，在em；和3' LTR之間有2-3個(gè)^u放閱讀框（open reading frame，ORF)，編碼病毒自身的反式轉(zhuǎn)錄激活因子Tas(transactivator of spumavirus)、Bet (between env and tas )等輔助蛋白[彡纟’ 56】(圖1.3)。前病毒cDNA兩端各有一個(gè)長(zhǎng)末端重復(fù)序列（long terminal repeat, LTR),該序列承擔(dān)著啟動(dòng)子和增強(qiáng)子雙重功能。有別于其他的反轉(zhuǎn)錄病毒，人們?cè)谂菽《局邪l(fā)現(xiàn)了除5’ LTR之外的第二個(gè)啟動(dòng)子，位于em；基因內(nèi)部，調(diào)節(jié)蛋白Tas編碼區(qū)的上游，被稱為內(nèi)部啟動(dòng)子（internal promoter, IP) [57]。此IP可指導(dǎo)病毒早期感染時(shí)Tas的轉(zhuǎn)錄、翻譯

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

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本文編號(hào)：2738295