【摘要】：磷酸鈣納米顆粒憑借其良好的安全性和生物學(xué)特性,被廣泛地用于醫(yī)學(xué)治療和診斷領(lǐng)域。為了探索磷酸鈣納米顆粒作為疫苗佐劑的效果,本研究首先利用共沉淀的方式制備了八種不同磷鈣比(P/Ca=0.15/0.30/0.45/0.60/0.75/0.90/1.00/1.10)的磷酸鈣納米顆粒,這些顆粒的大小均在10 nm～100 nm之間,并且隨著P/Ca的增加,顆粒形態(tài)從近似球形狀逐漸變成長(zhǎng)條的棒狀。其次,以VZVgE作為免疫原,在小鼠體內(nèi)證實(shí)了磷酸鈣納米顆粒具有佐劑效應(yīng)。同時(shí)通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)初步認(rèn)為其可能是通過(guò)促進(jìn)抗原提呈細(xì)胞-樹(shù)突狀細(xì)胞的增殖和吞噬抗原的能力,或者是通過(guò)促進(jìn)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α來(lái)發(fā)揮佐劑效果。緊接著,為了提升磷酸鈣納米顆粒的佐劑效應(yīng),使其引發(fā)的免疫應(yīng)答類型偏向于細(xì)胞免疫反應(yīng),本研究改變了磷酸鈣納米顆粒制備方法中磷元素的來(lái)源,用雙膦酸鹽(唑來(lái)膦酸和利塞膦酸)替代了 Na2HPO4·12H2O,制備了兩種新型的顆粒:唑來(lái)膦酸鈣和利塞膦酸鈣。在小鼠體內(nèi)評(píng)估實(shí)驗(yàn)中也證明了這兩種顆粒具有更優(yōu)的佐劑效應(yīng)。最后,為了考察磷酸鈣納米顆粒作為佐劑在吸附顆�？乖瓡r(shí)是否會(huì)影響抗原的表位結(jié)構(gòu),本研究以HPV45 VLP作為模擬抗原進(jìn)行考察,因此,本研究針對(duì)HPV45 VLP建立了一套免疫化學(xué)質(zhì)量分析方法用于抗原表位的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明磷酸鈣納米顆粒、利塞膦酸鈣和唑來(lái)膦酸鈣顆粒作為疫苗佐劑吸附HPV45 VLP抗原后,幾乎不會(huì)影響HPV45 VLP表位的完整性。綜上所述,經(jīng)過(guò)一系列的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,我們對(duì)磷酸鈣納米顆粒作為疫苗佐劑有了更深入的認(rèn)識(shí),這也為今后對(duì)其進(jìn)行更加充分的研究和改造提供一定的基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R392
【圖文】：

邐ＩＴｓ邐逡逑如硝酸鈣溶液），另一種是含有磷酸根離子的水溶液（例如淲酸氫二胺）。為了使逡逑最終制備得到的磷酸鈣納米顆粒在各項(xiàng)性質(zhì)中均具有較好的一致性（比如大小相逡逑近、形狀相似，以及晶體或非晶體的性質(zhì)保持一致），在兩種反應(yīng)試劑有效地混逡逑合時(shí)，控制好最適的反應(yīng)條件（比如混合時(shí)環(huán)境的ｐＨ、溫度、鈣離子及磷酸根逡逑離子的濃度、攪拌速度和攪拌時(shí)間）１２＇圖２顯示的是磷酸鈣納米顆粒常用的制逡逑備工藝的簡(jiǎn)單示意圖。這種制備工藝的一大優(yōu)勢(shì)就是在生產(chǎn)過(guò)程中不需要添加有逡逑機(jī)溶劑。最近，Ｃａｓｔｒｏ等人１５４１在一個(gè)規(guī)模較大的內(nèi)消旋振蕩流反應(yīng)器中利用連續(xù)逡逑流沉淀法成功制備出了納米大小的羥基磷灰石（主要成分為磷酸鈣）。這種利用逡逑連續(xù)模式的制備方法有希望用于規(guī)�；募{米大小、物理化學(xué)性質(zhì)可控的羥基磷逡逑灰石的生產(chǎn)。邐？逡逑（邐＾邐ｒ邐＾逡逑

ＡＰＣｓ）攝取并遞呈，隨后促進(jìn)抗原被運(yùn)輸?shù)揭髁馨徒Y(jié)。雖然以磷酸鈣納米顆逡逑粒作為疫苗佐劑已經(jīng)被廣泛開(kāi)發(fā)和測(cè)試，但是人們對(duì)其作為佐劑發(fā)揮作用的途徑逡逑仍然不是很清楚。圖３闡述的是磷酸鈣納米顆粒作為疫苗佐劑可能涉及的三種作逡逑用機(jī)制。逡逑３．１儲(chǔ)存庫(kù)效應(yīng)逡逑對(duì)于疫苗佐劑的作用機(jī)制研宄，儲(chǔ)存庫(kù)效應(yīng)應(yīng)該是最早被提出來(lái)的一個(gè)說(shuō)法。逡逑Ｇｌｅｎｎｙ等人［７＜］首先提出了鋁鹽佐劑發(fā)揮佐劑效應(yīng)的作用機(jī)制是因?yàn)殇X鹽佐劑的逡逑儲(chǔ)存庫(kù)效應(yīng)。顆粒樣的材料基本上都能為抗原提供一個(gè)儲(chǔ)存空間，隨后不斷釋放逡逑出抗原，使抗原可以持續(xù)刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)，發(fā)揮更持久的免疫保護(hù)作用１７５］。逡逑目前也有許多佐劑，包括油包水乳液和納米樣顆粒，均被報(bào)道稱其能協(xié)助抗原刺逡逑１０逡逑

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本文編號(hào)：2730330