【摘要】：中東呼吸綜合征冠狀病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV）于2012年在中東地區(qū)首次被鑒定出來(lái)，隨后逐漸擴(kuò)散，在很多國(guó)家都報(bào)道了感染病例。MERS-CoV能導(dǎo)致非常嚴(yán)重的呼吸道病癥，致死率很高，引發(fā)了全球關(guān)于MERS大流行潛在可能性的廣泛關(guān)注。 人的細(xì)胞表面蛋白二肽基肽酶4（Dipeptidyl Peptidase-4，DPP4）是MERS-CoV的受體。MERS-CoV通過(guò)其表面S蛋白與DPP4結(jié)合，進(jìn)而攻擊人體細(xì)胞。 本論文首先鑒定了MERS-CoV受體結(jié)合區(qū)（receptor binding domain，RBD）在S蛋白上的精確位置，并用蛋白質(zhì)晶體學(xué)方法解析了RBD與DPP4復(fù)合物的3.0 的結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示，與SARS-CoV RBD類似，MERS-CoV的RBD可以進(jìn)一步分為兩個(gè)部分，即骨架區(qū)域（core subdomain）和受體結(jié)合區(qū)域（receptor-bindingsubdomain）。其中骨架區(qū)域在SARS-CoV和MERS-CoV中非常保守，而受體結(jié)合區(qū)域則差異明顯。RBD結(jié)合受體DPP4的區(qū)域位于DPP4的β-螺旋槳結(jié)構(gòu)域（β-propeller domain），而非α/β水解酶結(jié)構(gòu)域（α/β hydrolase domain）。 然后，本論文采用點(diǎn)突變和常用的生化方法（如Pull-down，SPR等），鑒定了RBD和DPP4上對(duì)二者的結(jié)合起關(guān)鍵作用的氨基酸。同時(shí)與清華大學(xué)醫(yī)學(xué)院張林琦教授實(shí)驗(yàn)室合作，構(gòu)建了MERS-CoV假病毒系統(tǒng)，進(jìn)一步驗(yàn)證了這些關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)的突變對(duì)假病毒侵染能力的影響。DPP4上的這些關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)在不同物種中的保守性將有助于解釋MERS-CoV的宿主選擇性。 最后，張林琦教授實(shí)驗(yàn)室利用我們鑒定的RBD片段，從酵母展示的人源scFv文庫(kù)中篩選到了兩株高中和能力的單克隆抗體。本論文基于此制備了兩個(gè)中和抗體的Fab片段，然后分別獲得了Fab-RBD復(fù)合物的晶體。未來(lái)的工作將集中于解析這兩種晶體的結(jié)構(gòu)，更深入的了解抗體識(shí)別的表位及抗體發(fā)揮中和作用的機(jī)制。 RBD-DPP4復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)提供的原子分辨率的信息詳細(xì)解釋了病毒識(shí)別受體的機(jī)制，這些信息將有助于研發(fā)針對(duì)MERS-CoV的特異性的預(yù)防和治療方法。而RBD及RBD的抗體有望在將來(lái)應(yīng)用于針對(duì)MERS-CoV的特異的預(yù)防和治療，在臨床上有很好的應(yīng)用前景。
【學(xué)位授予單位】：清華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R373
【圖文】：

本章總體寫(xiě)作思路

SARS-CoV的電鏡照片

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李廣興;潘龍;;冠狀病毒基因組結(jié)構(gòu)和相關(guān)蛋白研究進(jìn)展[J];東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年09期

2 宋麗麗;畢玉_g;甘書(shū)鉆;孫新寬;磨美蘭;;冠狀病毒顆粒樣疫苗研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年04期

3 楊揚(yáng);譚文杰;;冠狀病毒附屬基因功能研究[J];病毒學(xué)報(bào);2014年03期

4 李廣興;王新;潘龍;杜威威;黃小丹;孫剛;楊貴君;任曉峰;;IBV HH06株N基因原核表達(dá)及間接ELISA方法的建立[J];東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年05期

5 胡北俠;楊少華;張秀美;張偉;曹三杰;許傳田;黃慶華;張琳;黃艷艷;文心田;;雞傳染性支氣管炎病毒變異株全基因組序列分析[J];病毒學(xué)報(bào);2014年04期

6 吳家兵;黃永;龔磊;;中東呼吸綜合征流行病學(xué)研究進(jìn)展[J];安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2014年04期

7 朱海俠;陳雷;曾亮明;傅星源;張?zhí)N冰;俞建萍;翁燕梅;潘海城;張淵魁;;雞傳染性支氣管炎病毒SX01株的分離鑒定及M基因序列分析[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2014年12期

8 張楓;謝正德;;呼吸道合胞病毒F基因及蛋白的相關(guān)研究進(jìn)展[J];病毒學(xué)報(bào);2015年02期

9 王

本文編號(hào)：2730003