發(fā)布時間：2020-06-25 04:24

【摘要】：現代醫(yī)學對抑郁癥的治療效果并不令人滿意,未針對疾病的異質性進行區(qū)分治療可能是其原因之一。而中醫(yī)是倡導個性化治療的醫(yī)學,對抑郁癥的表現差異用“證候”區(qū)分,選用對證的方藥進行治療,在臨床上治療疾病效果良好。我們前期發(fā)現在同一抑郁癥造模條件下Balb/c小鼠產生品系特異性的氣虛樣證候,本研究重點觀察補氣經方四君子湯與理氣方越鞠丸對經歷慢性不可預知輕度應激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)后的該品系小鼠的抗抑郁作用和對中醫(yī)證候的改善作用,反過來驗證其抑郁癥的證候,并探討藥物作用于抑郁癥氣虛易感模型的分子機制。目的:1.重點對Balb/c(B/c)雄性小鼠在CUMS下的抑郁癥氣虛證候表現進行方藥反證并對比近交系129/S1(129S)小鼠,從PKA-CREB信號通路探討病證相關神經與外周的分子生物學基礎。2.從性別差異上驗證Balb/c模型小鼠的抑郁癥證候的穩(wěn)定性。3.探討補氣藥四君子湯對Balb/c模型小鼠的防治作用。方法:與研究目的相對應,本實驗包括三個部分:1.給予Balb/c和129/S1雄性兩品系小鼠慢性不可預知輕度應激(CUMS)誘導構建抑郁癥疾病模型,連續(xù)造模4周,空白組(CTL)不給予任何刺激。通過蔗糖消耗測試(Sucrose preference test,SPT)、強迫游泳測試(Forced swim test,FST)評判其抑郁樣疾病表現,通過抓力(Grip strength)、負重游泳(Loaded swim test)等測試等評判氣虛樣表現。將模型組隨機分為模型對照(Veh)組、越鞠丸(Yueju,YJ)組、四君子湯(Sijunzi Decoction,SJZD)組和氟西汀(Fluoxetine,FLX)組。CTL和Veh組給予0.9%生理鹽水灌胃。YJ組予0.2 g/mL的越鞠丸灌胃。SJZD組予0.5g/ml的四君子湯灌胃。FLX組予2mg/mL的氟西汀腹腔注射。給藥1周后進行一系列行為學檢測,通過評判藥物的抗抑郁樣作用和對氣虛證候的改善作用來觀測病證療效。行為學檢測結束后,取上述五組的小鼠海馬和肌肉組織,用蛋白免疫印跡法(WestemBlotting,WB)檢測海馬和肌肉中PKA、p-CREB的蛋白表達情況。2.將B/c雌性小鼠隨機分為空白對照組與模型組。空白對照組不予任何刺激,模型組給予慢性不可預知輕度應激4周,同方法一評判其抑郁樣疾病表現和氣虛樣表現。將模型組隨機分為2組:模型對照組與中藥四君子湯組。給藥1周后進行行為學檢測,觀測病證療效,用蛋白免疫印跡方法檢測這三組的海馬與肌肉組織中PKA、p-CREB的表達變化。3.將B/c雄性小鼠隨機分為空白組與模型組。空白對照組不予任何刺激。模型組給予慢性不可預知輕度應激,造模3周。同方法一評判其抑郁樣疾病表現和氣虛樣表現。將空白組隨機分為空白對照(CTL)組與空白+四君子湯(Control+SJZD,CS)組。將Balb/c小鼠的模型組隨機分為4組,分別為Veh組、YJ組、SJZD組和FLX組�？瞻讓φ战M和Veh組給予0.9%生理鹽水灌胃。YJ組予0.2 g/mL的越鞠丸灌胃。SJZD組予0.5g/ml的四君子湯灌胃。FLX組予2mg/mL的氟西汀腹腔注射。給藥1周后進行一系列行為學檢測,通過評判藥物的抗抑郁樣作用和對氣虛證候的改善作用來觀測藥物對模型的防治作用。結果:1.進行CUMS抑郁癥造模后,B/c和129S兩品系小鼠都產生了糖偏好下降,不動時間延長等相似的抑郁樣行為。但兩者的證候表現明顯不同。B/c小鼠抑郁癥則表現為氣虛樣證候,抓力、負重游泳時間、掌紋血色度均下降;129S小鼠的抑郁癥不具有虛證表現,抓力與負重游泳時間無明顯變化,掌紋血色度反而升高。理氣藥越鞠丸可改善129s小鼠的抑郁樣表現,使糖偏好顯著上升,縮短絕望不動時間和潛伏時間,改善皮毛評分,而補氣藥四君子湯則沒有效果。在B/c小鼠上使用四君子湯比越鞠丸在改善抑郁表型上效果更好,兩種方藥都能改善糖偏好,強迫游泳和懸尾的不動時間,以及皮毛評分,但只有四君子湯能明顯縮短潛伏時間。四君子湯還能改善B/c小鼠的抓力、負重游泳時長和掌紋血色度等氣虛表型,而越鞠丸不能改善。從蛋白表達上看,四君子湯和越鞠丸均可逆轉B/c小鼠肌肉和海馬中的PKA和p-CREB蛋白表達的下調,而四君子湯效果更顯著。越鞠丸可逆轉129/S1模型肌肉和海馬中下調的PKA和p-CREB,而四君子湯不能逆轉其變化。2.B/c雌性小鼠在CUMS應激4周后出現糖偏好下降等抑郁樣表現,和抓力下降、負重游泳時間減少的氣虛樣證候,四君子湯可逆轉此變化而且逆轉模型動物海馬和肌肉PKA、p-CREB表達的下調。3.造模3周時,在B/c小鼠的不動時間尚無變化,抑郁表型尚未完全出現時給藥,發(fā)現四君子湯可顯著改善模型小鼠的糖偏好、不動時間和潛伏時間等抑郁表型,以及抓力、爪色等與氣虛相關的表型,而越鞠丸組均不能改善。另外空白組與空白+四君子湯組的蔗糖消耗百分比、懸尾和強迫游泳測試的絕望不動時間、抓力、負重游泳時長、掌紋血色度均無顯著差異。結論1.CUMS應激后Balb/c小鼠呈現為氣虛樣抑郁,補氣藥四君子湯可改善其證候表型,可能是通過上調PKA-CREB信號通路來實現。2.性別不影響抑郁癥氣虛模型的證候。3.CUMS應激3周后的Balb/c小鼠尚未完全出現抑郁表型,補氣藥四君子湯對其有預防作用。4.補氣藥四君子湯對無應激的Balb/c小鼠無抗抑郁及補氣作用。
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332
【圖文】：

鼠模型組的糖偏好顯著下降ｂ＜０．００１），而１２９／Ｓ１小鼠模型組與空白組的糖偏好無顯著差異逡逑（ｐ＞０．０５）。Ｂａｌｂ／ｃ模型小鼠的抓力第１２天、１７天、２２天均顯著下降，而１２９／Ｓ１模型小鼠逡逑的抓力與空白對照組相比一直未出現顯著差異。如圖２－３。逡逑１７逡逑

邐Ｂ／Ｃ邐１２９Ｓ逡逑圖２－２慢性不可預知溫和應激４周后兩品系小鼠的抑郁樣行為和證候表型。逡逑Ｆｉｇ２－２邋Ｂ／ｃ邋ａｎｄ邋１２９Ｓ邋ｍｉｃｅ＇ｓ邋ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ－ｌｉｋｅ邋ｂｅｈａｖｉｏｒｓ邋ａｎｄ邋ｓｙｎｄｒｏｍｅ邋ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ邋ａｆｔｅｒ邋４邋ｗｅｅｋ逡逑ＣＵＭＳ．逡逑注：與同品系對照組（ＣＴＬ）比，＞＜０．０５，＊＊＊ｐ＜０．００１逡逑Ｎｏｔｅ：ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＣＴＬ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｓａｍｅ邋ｓｔｒａｉｎ，＊ｍｅａｎｓｐ＜０．０５，＊＊＊ｍｅａｎｓ／？＜０．００１逡逑３．２在慢性不可預知溫和應激中，兩品系小鼠糖偏好與抓力的時程變化。逡逑我們監(jiān)測了造模過程中兩品系小鼠的糖水消耗百分比和抓力的時程變化。發(fā)現造模１３逡逑天時，與空白對照組相比Ｂａｌｂ／ｃ小鼠、１２９／Ｓ１小鼠模型組的糖水消耗百分比均顯著上升逡逑（ｐ＜０．００１，；？＜０．０１），再過５天后糖偏好均顯著下降（ｐ值均＜０．００１）。在第２３天時Ｂａｌｂ／ｃ小逡逑鼠模型組的糖偏好顯著下降ｂ＜０．００１），而１２９／Ｓ１小鼠模型組與空白組的糖偏好無顯著差異逡逑（ｐ＞０．０５）。Ｂａｌｂ／ｃ模型小鼠的抓力第１２天、１７天、２２天均顯著下降，而１２９／Ｓ１模型小鼠逡逑的抓力與空白對照組相比一直未出現顯著差異。如圖２－３。逡逑１７逡逑

【參考文獻】

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本文編號：2728855