【摘要】：現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)抑郁癥的治療效果并不令人滿意,未針對(duì)疾病的異質(zhì)性進(jìn)行區(qū)分治療可能是其原因之一。而中醫(yī)是倡導(dǎo)個(gè)性化治療的醫(yī)學(xué),對(duì)抑郁癥的表現(xiàn)差異用“證候”區(qū)分,選用對(duì)證的方藥進(jìn)行治療,在臨床上治療疾病效果良好。我們前期發(fā)現(xiàn)在同一抑郁癥造模條件下Balb/c小鼠產(chǎn)生品系特異性的氣虛樣證候,本研究重點(diǎn)觀察補(bǔ)氣經(jīng)方四君子湯與理氣方越鞠丸對(duì)經(jīng)歷慢性不可預(yù)知輕度應(yīng)激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)后的該品系小鼠的抗抑郁作用和對(duì)中醫(yī)證候的改善作用,反過來驗(yàn)證其抑郁癥的證候,并探討藥物作用于抑郁癥氣虛易感模型的分子機(jī)制。目的:1.重點(diǎn)對(duì)Balb/c(B/c)雄性小鼠在CUMS下的抑郁癥氣虛證候表現(xiàn)進(jìn)行方藥反證并對(duì)比近交系129/S1(129S)小鼠,從PKA-CREB信號(hào)通路探討病證相關(guān)神經(jīng)與外周的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。2.從性別差異上驗(yàn)證Balb/c模型小鼠的抑郁癥證候的穩(wěn)定性。3.探討補(bǔ)氣藥四君子湯對(duì)Balb/c模型小鼠的防治作用。方法:與研究目的相對(duì)應(yīng),本實(shí)驗(yàn)包括三個(gè)部分:1.給予Balb/c和129/S1雄性兩品系小鼠慢性不可預(yù)知輕度應(yīng)激(CUMS)誘導(dǎo)構(gòu)建抑郁癥疾病模型,連續(xù)造模4周,空白組(CTL)不給予任何刺激。通過蔗糖消耗測(cè)試(Sucrose preference test,SPT)、強(qiáng)迫游泳測(cè)試(Forced swim test,FST)評(píng)判其抑郁樣疾病表現(xiàn),通過抓力(Grip strength)、負(fù)重游泳(Loaded swim test)等測(cè)試等評(píng)判氣虛樣表現(xiàn)。將模型組隨機(jī)分為模型對(duì)照(Veh)組、越鞠丸(Yueju,YJ)組、四君子湯(Sijunzi Decoction,SJZD)組和氟西汀(Fluoxetine,FLX)組。CTL和Veh組給予0.9%生理鹽水灌胃。YJ組予0.2 g/mL的越鞠丸灌胃。SJZD組予0.5g/ml的四君子湯灌胃。FLX組予2mg/mL的氟西汀腹腔注射。給藥1周后進(jìn)行一系列行為學(xué)檢測(cè),通過評(píng)判藥物的抗抑郁樣作用和對(duì)氣虛證候的改善作用來觀測(cè)病證療效。行為學(xué)檢測(cè)結(jié)束后,取上述五組的小鼠海馬和肌肉組織,用蛋白免疫印跡法(WestemBlotting,WB)檢測(cè)海馬和肌肉中PKA、p-CREB的蛋白表達(dá)情況。2.將B/c雌性小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組與模型組。空白對(duì)照組不予任何刺激,模型組給予慢性不可預(yù)知輕度應(yīng)激4周,同方法一評(píng)判其抑郁樣疾病表現(xiàn)和氣虛樣表現(xiàn)。將模型組隨機(jī)分為2組:模型對(duì)照組與中藥四君子湯組。給藥1周后進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè),觀測(cè)病證療效,用蛋白免疫印跡方法檢測(cè)這三組的海馬與肌肉組織中PKA、p-CREB的表達(dá)變化。3.將B/c雄性小鼠隨機(jī)分為空白組與模型組�？瞻讓�(duì)照組不予任何刺激。模型組給予慢性不可預(yù)知輕度應(yīng)激,造模3周。同方法一評(píng)判其抑郁樣疾病表現(xiàn)和氣虛樣表現(xiàn)。將空白組隨機(jī)分為空白對(duì)照(CTL)組與空白+四君子湯(Control+SJZD,CS)組。將Balb/c小鼠的模型組隨機(jī)分為4組,分別為Veh組、YJ組、SJZD組和FLX組�？瞻讓�(duì)照組和Veh組給予0.9%生理鹽水灌胃。YJ組予0.2 g/mL的越鞠丸灌胃。SJZD組予0.5g/ml的四君子湯灌胃。FLX組予2mg/mL的氟西汀腹腔注射。給藥1周后進(jìn)行一系列行為學(xué)檢測(cè),通過評(píng)判藥物的抗抑郁樣作用和對(duì)氣虛證候的改善作用來觀測(cè)藥物對(duì)模型的防治作用。結(jié)果:1.進(jìn)行CUMS抑郁癥造模后,B/c和129S兩品系小鼠都產(chǎn)生了糖偏好下降,不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)等相似的抑郁樣行為。但兩者的證候表現(xiàn)明顯不同。B/c小鼠抑郁癥則表現(xiàn)為氣虛樣證候,抓力、負(fù)重游泳時(shí)間、掌紋血色度均下降;129S小鼠的抑郁癥不具有虛證表現(xiàn),抓力與負(fù)重游泳時(shí)間無明顯變化,掌紋血色度反而升高。理氣藥越鞠丸可改善129s小鼠的抑郁樣表現(xiàn),使糖偏好顯著上升,縮短絕望不動(dòng)時(shí)間和潛伏時(shí)間,改善皮毛評(píng)分,而補(bǔ)氣藥四君子湯則沒有效果。在B/c小鼠上使用四君子湯比越鞠丸在改善抑郁表型上效果更好,兩種方藥都能改善糖偏好,強(qiáng)迫游泳和懸尾的不動(dòng)時(shí)間,以及皮毛評(píng)分,但只有四君子湯能明顯縮短潛伏時(shí)間。四君子湯還能改善B/c小鼠的抓力、負(fù)重游泳時(shí)長(zhǎng)和掌紋血色度等氣虛表型,而越鞠丸不能改善。從蛋白表達(dá)上看,四君子湯和越鞠丸均可逆轉(zhuǎn)B/c小鼠肌肉和海馬中的PKA和p-CREB蛋白表達(dá)的下調(diào),而四君子湯效果更顯著。越鞠丸可逆轉(zhuǎn)129/S1模型肌肉和海馬中下調(diào)的PKA和p-CREB,而四君子湯不能逆轉(zhuǎn)其變化。2.B/c雌性小鼠在CUMS應(yīng)激4周后出現(xiàn)糖偏好下降等抑郁樣表現(xiàn),和抓力下降、負(fù)重游泳時(shí)間減少的氣虛樣證候,四君子湯可逆轉(zhuǎn)此變化而且逆轉(zhuǎn)模型動(dòng)物海馬和肌肉PKA、p-CREB表達(dá)的下調(diào)。3.造模3周時(shí),在B/c小鼠的不動(dòng)時(shí)間尚無變化,抑郁表型尚未完全出現(xiàn)時(shí)給藥,發(fā)現(xiàn)四君子湯可顯著改善模型小鼠的糖偏好、不動(dòng)時(shí)間和潛伏時(shí)間等抑郁表型,以及抓力、爪色等與氣虛相關(guān)的表型,而越鞠丸組均不能改善。另外空白組與空白+四君子湯組的蔗糖消耗百分比、懸尾和強(qiáng)迫游泳測(cè)試的絕望不動(dòng)時(shí)間、抓力、負(fù)重游泳時(shí)長(zhǎng)、掌紋血色度均無顯著差異。結(jié)論1.CUMS應(yīng)激后Balb/c小鼠呈現(xiàn)為氣虛樣抑郁,補(bǔ)氣藥四君子湯可改善其證候表型,可能是通過上調(diào)PKA-CREB信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn)。2.性別不影響抑郁癥氣虛模型的證候。3.CUMS應(yīng)激3周后的Balb/c小鼠尚未完全出現(xiàn)抑郁表型,補(bǔ)氣藥四君子湯對(duì)其有預(yù)防作用。4.補(bǔ)氣藥四君子湯對(duì)無應(yīng)激的Balb/c小鼠無抗抑郁及補(bǔ)氣作用。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5;R-332
【圖文】：

鼠模型組的糖偏好顯著下降ｂ＜０．００１），而１２９／Ｓ１小鼠模型組與空白組的糖偏好無顯著差異逡逑（ｐ＞０．０５）。Ｂａｌｂ／ｃ模型小鼠的抓力第１２天、１７天、２２天均顯著下降，而１２９／Ｓ１模型小鼠逡逑的抓力與空白對(duì)照組相比一直未出現(xiàn)顯著差異。如圖２－３。逡逑１７逡逑

邐Ｂ／Ｃ邐１２９Ｓ逡逑圖２－２慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激４周后兩品系小鼠的抑郁樣行為和證候表型。逡逑Ｆｉｇ２－２邋Ｂ／ｃ邋ａｎｄ邋１２９Ｓ邋ｍｉｃｅ＇ｓ邋ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ－ｌｉｋｅ邋ｂｅｈａｖｉｏｒｓ邋ａｎｄ邋ｓｙｎｄｒｏｍｅ邋ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ邋ａｆｔｅｒ邋４邋ｗｅｅｋ逡逑ＣＵＭＳ．逡逑注：與同品系對(duì)照組（ＣＴＬ）比，＞＜０．０５，＊＊＊ｐ＜０．００１逡逑Ｎｏｔｅ：ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＣＴＬ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｓａｍｅ邋ｓｔｒａｉｎ，＊ｍｅａｎｓｐ＜０．０５，＊＊＊ｍｅａｎｓ／？＜０．００１逡逑３．２在慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激中，兩品系小鼠糖偏好與抓力的時(shí)程變化。逡逑我們監(jiān)測(cè)了造模過程中兩品系小鼠的糖水消耗百分比和抓力的時(shí)程變化。發(fā)現(xiàn)造模１３逡逑天時(shí)，與空白對(duì)照組相比Ｂａｌｂ／ｃ小鼠、１２９／Ｓ１小鼠模型組的糖水消耗百分比均顯著上升逡逑（ｐ＜０．００１，；？＜０．０１），再過５天后糖偏好均顯著下降（ｐ值均＜０．００１）。在第２３天時(shí)Ｂａｌｂ／ｃ小逡逑鼠模型組的糖偏好顯著下降ｂ＜０．００１），而１２９／Ｓ１小鼠模型組與空白組的糖偏好無顯著差異逡逑（ｐ＞０．０５）。Ｂａｌｂ／ｃ模型小鼠的抓力第１２天、１７天、２２天均顯著下降，而１２９／Ｓ１模型小鼠逡逑的抓力與空白對(duì)照組相比一直未出現(xiàn)顯著差異。如圖２－３。逡逑１７逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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