【摘要】：第一部分 表皮干細胞的體外分離、培養(yǎng)及鑒定 目的體外分離培養(yǎng)表皮干細胞,并對所取表皮干細胞進行形態(tài)學,特異標志物進行檢測,以確保所取細胞為表皮干細胞。 方法根據之前研究者的體外培養(yǎng)的表皮干細胞方法進行綜合,并成功提取出表皮干細胞,進行體外培養(yǎng),選取表皮干細胞特定的表面標記物CK19,整合素β1運用免疫熒光染色鑒定,并對細胞進行整合素a6和CD71雙染色通過流式細胞儀檢測,鑒定所取的細胞為表皮干細胞。 結果根據倒置相差顯微鏡所得細胞形態(tài),免疫熒光檢測結果顯示所取細胞CK19及整合素p1陽性,及流式細胞儀檢測指標結果所取細胞整合素a6陽性,CD71陰性。 結論體外成功分離培養(yǎng)出表皮干細胞。 第二部分 不同頻率低強度電磁場對表皮干細胞beta-catenin, Myc基因的影響 目的觀察表皮干細胞的增殖、分化相關基因myc, beta-catenin在低頻電磁場中的變化。 方法從大鼠背部皮膚處分離的第2代表皮干細胞(EpiSC)分為實驗組和對照組,實驗組又根據低強度磁場頻率不同分為15,50,75Hz組。將各組細胞進行形態(tài)學觀察,免疫熒光染色檢測,RT-PCR檢測相關基因的表達變化,免疫組化鑒定細胞的相關蛋白表達情況。 結果表皮干細胞在受到低強度磁場刺激后myc,β-catenin與對照組比有顯著差異(P0.01),且不同頻率下存在差異,50Hz75Hz15Hz(P0.05)。 結論低強度脈沖電磁場能促進表皮干細胞分化,不同頻率刺激效果不同。 第三部分 Nanog和β-catenin對表皮干細胞增殖、分化中新的調控點 目的明確在表皮干細胞的增殖和分化的過程中Nanog通路和wnt/β-catenin通路是否存在內在聯系。 方法本實驗從大鼠背部皮膚處分離的第2代表皮干細胞(EpiSC)分為實驗組和對照組,將各組細胞進行形態(tài)學觀察,免疫熒光染色檢測,用MTT法測定表皮干細胞的增殖,免疫組化鑒定細胞的相關蛋白整合素β-1及CK15表達情況。Western Blotting、PCR測定β-catenin和Nanog含量水平的變化。 結果MTT法檢測到10-7M SP顯著促進EpSCs的增殖,且EpSCs仍保持其干細胞性。Western Blotting檢測到β-catenin和Nanog蛋白在最初24小時少量表達, Nanog蛋白水平在24h后顯著表達并持續(xù)72h,72h后明顯下降。而β-catenin蛋白水平在整個過程中持續(xù)升高。PCR檢測到Nanog mRNA在整個過程中表達降低,β-catenin mRNA和Myc mRNA在整個增殖過程中持續(xù)高表達。 結論實驗表明10-7M神經肽SP物質可有效的刺激表皮干細胞的增殖,表明Nanog通路和wnt/β-catenin通路的可能存在聯系。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R329

【參考文獻】

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1 陳偉;楊恬;連小華;楊珂;黃恩毅;;大鼠表皮干細胞的分布與體外分離培養(yǎng)[J];第三軍醫(yī)大學學報;2007年05期

2 張鳴生;何斌;朱洪翔;吳博;龐文君;李東風;林秋雄;劉旋安;徐達傳;;不同頻率低強度脈沖電磁場對表皮干細胞增殖的影響[J];中華物理醫(yī)學與康復雜志;2006年11期

3 唐紅英;伍素華;蘇踴躍;陳建;劉月明;梁光萍;孫榮距;羅向東;;RNA干擾抑制整合素β_1在人表皮干細胞中的表達[J];中華燒傷雜志;2006年03期

本文編號：2728839