【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)采用低熱量飲食法復(fù)制具有生長追趕的宮內(nèi)發(fā)育遲緩(CG-IUGR)成年大鼠模型,檢測大鼠糖脂代謝的變化,檢測肝臟及骨骼肌組織中鐘基因CLOCK和BMAL1的表達(dá)水平,分析IUGR對成年CG-IUGR大鼠生物鐘基因CLOCK、BMAL1表達(dá)的影響及其在成年CG-IUGR大鼠糖脂代謝異常中的可能作用。方法:選取SD大鼠為實(shí)驗(yàn)動物,分為control組和CG-IUGR組。采用低熱量飲食法復(fù)制成年CG-IUGR大鼠模型。1.測量兩組大鼠的體重和身長(從出生第一天開始至8w齡)并計(jì)算其體重指數(shù)(BMI);稱量兩組大鼠8w齡時的腎周脂肪重量。2.檢測兩組大鼠糖脂代謝的相關(guān)指標(biāo):(1)血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)及游離脂肪酸(FFA)水平;(2)空腹血糖(FBG)及血清胰島素(FINS)水平;(3)葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(GTT)和胰島素耐量實(shí)驗(yàn)(ITT);(4)葡萄糖負(fù)荷15min后的血清胰島素(INS)水平;3.檢測肝臟和骨骼肌糖原合成酶(GS)的活性。4.通過實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RTFQ-PCR)和免疫印跡法(Western Blot)技術(shù)分別檢測兩組大鼠肝臟和骨骼肌組織中CLOCK和BMAL1 mRNA和蛋白的相對表達(dá);5.采用Pearson,s法,分析CLOCK和BMAL1 mRNA相對表達(dá)水平與GS酶活性的相關(guān)性。結(jié)果:1.CG-IUGR組大鼠生長發(fā)育的過程中體重和BMI均顯著高于control組大鼠;其8w齡的腎周脂肪重量也顯著增加(P0.05)。2.與control組大鼠相比,CG-IUGR大鼠的血清TG、TC及FFA的水平均顯著增加(P0.05);血清FINS水平降低(P0.05);葡萄糖和INS負(fù)荷后的血糖水平均顯著增加(P0.05);葡萄糖負(fù)荷后15min時的血清INS水平亦明顯增加(P0.05)。3.與control組大鼠相比,CG-IUGR大鼠肝臟和骨骼肌組織的GS酶活性均降低(P0.05)。4.與control組大鼠相比較,CG-IUGR大鼠肝臟和骨骼肌組織中CLOCK和BMAL1 mRNA及蛋白的相對表達(dá)水平均下降(P0.05)。5.CG-IUGR組大鼠肝臟和骨骼肌組織中CLOCK和BMAL1 mRNA的相對表達(dá)水平與其GS酶的活性呈正相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論:1.IUGR可降低成年CG-IUGR大鼠糖脂代謝的能力和肝臟及骨骼肌組織中GS酶的活性。2.IUGR可下調(diào)成年CG-IUGR大鼠肝臟和骨骼肌組織中CLOCK和BMAL1的相對表達(dá)水平,這可能與成年CG-IUGR大鼠糖脂代謝紊亂的發(fā)生有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R363
【圖文】：

遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)術(shù)論文 杜運(yùn)松Temperature Time Cycle95℃ 30s 195℃ 5s 3955-65℃ 30s 3965℃ 0.05s 195℃ 10s 1(3)如下圖可知溶解曲線呈現(xiàn)單一峰，選擇 Cq 值最小的孔相對應(yīng)的溫度選為最佳溫度。CLOCK、BMAL1 及β-actin 基因的最佳退火溫度依次為 59℃、60℃、56℃，見圖 2、3、4。

(3)如下圖可知溶解曲線呈現(xiàn)單一峰，選擇 Cq 值最小的孔相對應(yīng)的溫度選為最佳溫度。CLOCK、BMAL1 及β-actin 基因的最佳退火溫度依次為 59℃、60℃、56℃，見圖 2、3、4。圖 2 CLOCK 退火溫度優(yōu)化擴(kuò)增曲線和溶解曲線Fig2 The amplification and dissociation curve of CLOCK in its optimizationof annealing temperature

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2727530