發(fā)布時(shí)間：2020-06-16 23:08

【摘要】：目的:已有研究表明GIT1對(duì)小鼠肺部及骨折愈合過(guò)程中血管形成具有重要影響,GIT1缺失可以導(dǎo)致肺部發(fā)育及骨折愈合障礙,但其機(jī)制尚不完全清楚。本研究通過(guò)對(duì)野生型及GIT1基因敲除型小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化過(guò)程進(jìn)行比較,探索GIT1影響血管形成的機(jī)制。方法:GIT1雜合子小鼠雌雄配對(duì)飼養(yǎng),對(duì)2代新生小鼠采用PCR法行基因型鑒定。分別取GIT1野生型與GIT1基因敲除型小鼠分離培養(yǎng)的2代BMSCs,各分為兩組,一組加內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)液培養(yǎng)作為實(shí)驗(yàn)組,另一組進(jìn)行常規(guī)傳代培養(yǎng)作為對(duì)照組;故實(shí)驗(yàn)分為4組,分別為野生型對(duì)照組(A組)、野生型實(shí)驗(yàn)組(A1組)、基因敲除型對(duì)照組(B組)、基因敲除型實(shí)驗(yàn)組(B1組)。Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞VEGF受體2(VEGF receptor 2,VEGFR2)、VEGFR3、磷酸化VEGFR2(phospho-VEGF receptor 2,pVEGFR2)、pVEGFR3表達(dá);流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物血管性血友病因子(von Willebrand Factor,vWF)、血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子-1(platelet-endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1)、血管內(nèi)皮粘鈣蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-Cadherin)表達(dá)。取野生型小鼠二代BMSCs,根據(jù)加入培養(yǎng)液的不同分為4組:Ⅰ組,原細(xì)胞培養(yǎng)液;Ⅱ組,細(xì)胞培養(yǎng)液中加入VEGFR-3阻斷劑SAR131675;Ⅲ組,加入內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)液;Ⅳ組,內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)液中加入SAR131675。流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物vWF、PECAM-1、VE-Cadherin表達(dá)。結(jié)果Western blot檢測(cè)示,Western blot檢測(cè)示,4組細(xì)胞的VEGFR-2、pVEGFR-2蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異,A1組VEGFR-3、pVEGFR-3蛋白表達(dá)顯著高于其余3組。流式細(xì)胞儀檢測(cè)示,A1組vWF、PECAM-1及VE-Cadherin表達(dá)均顯著高于A、B、B1組,B1組顯著高于A、B組(P0.05);A、B組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。阻斷VEGFR-3實(shí)驗(yàn)中流式細(xì)胞儀檢測(cè)示,Ⅲ組vWF、PECAM-1及VE-Cadherin表達(dá)均顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ組,Ⅳ組高于Ⅰ、Ⅱ組(P0.05);Ⅰ、Ⅱ組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:GIT1通過(guò)VEGFR-3對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化產(chǎn)生影響。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2716725