發(fā)布時間：2020-06-17 01:35

【摘要】：AKR7A3屬醛酮還原酶(AKR),是NADPH依賴型的氧化還原酶超家族當(dāng)中的一種。AKR7A3在體內(nèi)參與了很多極為重要的體內(nèi)生理活動,比如說激素合成、藥物排出體外、炎癥反應(yīng)以及解毒過程中有著不可忽視的作用。AKR7A3在肝、腎和子宮等器官發(fā)生癌變的過程中表達量有變化。作為黃曲霉毒素解毒酶被人們廣泛所了解。文獻表明AKR7A3和肝癌的發(fā)生發(fā)展有著一定關(guān)聯(lián)性。本文以AKR7A3做研究對象,構(gòu)建AKR7A3-pET-15b表達載體,使用大腸桿菌BL21原核表達醛酮還原酶AKR7A3,對表達條件進行相應(yīng)優(yōu)化,并測定原核表達蛋白的有關(guān)活性。建立AKR7A3小鼠多抗體模型,獲得多克隆抗體。選用肝細(xì)胞HL-7702和肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞株,利用ELISA、RT-PCR等技術(shù),在細(xì)胞中從蛋白質(zhì)以及核酸分子表達水平上,探索該酶和肝癌之間的關(guān)系。實驗結(jié)果表明:原核表達出了大量高純度的有生物活性的人源AKR7A3蛋白,并優(yōu)化條件,結(jié)果為溫度16℃、轉(zhuǎn)速110 rpm/h、時間20 h,IPTG濃度1.00 mM/L。免疫的活體動物得到了相應(yīng)的AKR7A3多克隆抗體。該種酶在兩種細(xì)胞中表達的測定結(jié)果為:蛋白質(zhì)水平上肝細(xì)胞是肝癌細(xì)胞的2.1倍;核酸水平上肝細(xì)胞是肝癌細(xì)胞的2.84倍。
【學(xué)位授予單位】：長春理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R363
【圖文】：

BL21-pET15b-AKR7A3質(zhì)粒鑒定M為Marker,1泳道為空pET15b質(zhì)粒，其余泳道為提取質(zhì)粒

AKR7A3蛋白表達SDS-PAGE電泳圖

【參考文獻】

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本文編號：2716886