【摘要】：宿主蛋白參與病毒生命周期的多個(gè)階段。研究病毒蛋白與宿主蛋白相互作用有助于了解病毒蛋白的生物學(xué)功能,為抗病毒治療提供新的思路。本論文選取來自三種病毒的三個(gè)病毒蛋白,研究其與宿主蛋白,特別是宿主膜運(yùn)輸相關(guān)蛋白的相互作用,為進(jìn)一步研究病毒宿主相互作用提供線索。丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是黃病毒科肝炎病毒屬中的重要人類病原體,其慢性感染最終導(dǎo)致肝細(xì)胞癌,嚴(yán)重威脅人們的生命健康。HCV編碼10個(gè)蛋白,其中具有蛋白酶活性的NS3蛋白是治療HCV的DAA(direct-acting antiviral agents,DAA)藥物的靶標(biāo)之一。為加深了解它們的生物學(xué)功能,我們分析其候選相互作用蛋白,并且進(jìn)行相關(guān)驗(yàn)證。我們發(fā)現(xiàn)NS3 N端1-180aa與NAP1L1相互作用。K7蛋白是痘病毒家族中非常保守的一個(gè)蛋白,之前研究表明K7在抑制天然免疫過程中具有重要作用。為進(jìn)一步探索K7的生物學(xué)功能,我們通過GST pulldown聯(lián)合質(zhì)譜的方法鑒定其相互作用蛋白。候選蛋白中有多個(gè)蛋白參與細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸。我們選擇coatomer、retromer和CHEVI這三個(gè)膜運(yùn)輸復(fù)合物進(jìn)行驗(yàn)證。通過GST pulldown和免疫共沉淀的方法證明,這三個(gè)膜運(yùn)輸復(fù)合物都與K7相互作用。K7蛋白C末端KK對(duì)其與coatomer結(jié)合非常重要,而C末端的L對(duì)于K7與retromer結(jié)合比較關(guān)鍵。腸道病毒71型(enterovirus A71,EV-A71)可引起手足口病、嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥,具有較高的病死率和致殘率。2C蛋白是其編碼的具有ATPase、GTPase、AMP激酶和解旋酶活性的蛋白,其參與病毒復(fù)制,且能抑制NF-κB活化,也可作為抗病毒藥物靶標(biāo)。為尋找更多的2C相互作用蛋白,我們利用GST pulldown聯(lián)合質(zhì)譜的方法,篩選2C相互作用蛋白。結(jié)果顯示,2C蛋白能與TRIM4、exportin2、及ARFGAP1相互作用。共聚焦熒光顯微鏡發(fā)現(xiàn)2C與TRIM4及exportin2在宿主細(xì)胞內(nèi)存在共定位。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)且2C的264-329aa與ARFGAP1的1-136aa相互作用。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R373
【圖文】：

呈逐年上升趨勢。逡逑ＨＣＶ基因包含一條長約９．６ｋ單股正鏈ＲＮＡ，只含有一個(gè)開放讀碼框（ｏｐｅｎ逡逑ｒｅａｄｉｎｇ邋ｆｒａｍｅ，邋０ＲＦ）。該基因編碼一條多肽鏈，經(jīng)剪切形成１０個(gè)蛋白。圖１逡逑展示了邋ＨＣＶ十個(gè)蛋白的示意圖。其中，結(jié)構(gòu)蛋白有四個(gè)：ｃｏｒｅ、Ｅｌ、Ｅ２和ｐ７；逡逑非結(jié)構(gòu)蛋白包含ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ和ＮＳ５Ｂ六個(gè)蛋白。結(jié)構(gòu)蛋白是病逡逑毒結(jié)構(gòu)的重要組成部分，參與病毒的入侵過程。而非結(jié)構(gòu)蛋白則可通過結(jié)合一些逡逑宿主細(xì)胞成分，參與調(diào)節(jié)病毒的生命周期過程［２］。逡逑ＨＣＶ邋ｐｏｓｉｔｖｅ－ｓｔｒａｎｄ邋ｇｅｎｏｍｅ逡逑５邋ＵＴＲ邐Ｖｉ邋ｎ－Ｄ逡逑？邋Ｖ邋ｍｉ邐『邐Ｑ邋（）ｗｕｃ＾逡逑９0４0邐Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ逡逑＼＼％＞邐＾邐會(huì)邋Ｓ，逡逑ａ邋ｓｉ邋ｗ邋ｎ邋皿邋Ｊｌ邋Ｊｌ邋Ｌ邐ＺＪ逡逑—－＾－１邋１ｃ］ｅｉ［邋Ｅ２邋１｜ｎＳ２１邐ＮＳ３邋ＴｉｆｓＴ邋ａ邋Ｎｆ５邋Ｖ＂逡逑Ａｉｌ／；７邋Ａ邋ｉ邋＼邋＼邋＼逡逑ｃａｐｓｉｄ邐［／邐丨0ｎ邐ｓｅｒｉｎｅ－邋＼邋ＮＳ３－邋＼邋＼邐＼逡逑ｅｎｖｅｊ0ｐｅ邋ｃｈａｎｎｅｌ邋ｐｒｏｔｅａｓｅ邋＼邋ｃｏｆａｃｔｏｒ邋＼邋ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ邋＼逡逑ｃｙｓｔｅｉｎｅ－邐ＮＴＰａｓｅ／邋？邐ＲｄＲｐ逡逑ｐｒｏｔｅａｓｅ邐ｈｅｌｉｃａｓｅ逡逑ｉ邋ＳＰＰ邋%藉澹櫻繡澹斟澹危櫻玻沖澹穡潁镥澹輳藎澹危櫻沖澹穡潁錚矗鈴義賢跡保澹齲茫值鞍撞灰饌跡懟ｅ義希茫錚潁迨牽齲茫值囊驢塹鞍�，编码１９潇\被�，蛋盃铙小在２_澹耄模幔誆煌義閑偷模齲茫種蟹淺１Ｊ�。ＣｅP潁宓鞍祝味誦蛄形行�，而其Ｃ端则为疏水性。其主辶x弦植莢諳赴手

本文編號(hào)：2716191