【摘要】：目的:制作慢性應(yīng)激致卵巢早衰大鼠模型并且用木尼孜其百尕木合劑干預(yù),探討其性腺軸形態(tài)學(xué)變化及生殖生物學(xué)基礎(chǔ)。方法:采用90只性成熟Wistar雌鼠,隨機(jī)選取10只設(shè)為正常組(N組),其余80只為慢性應(yīng)激模型組,在濕寒環(huán)境下飼養(yǎng)23周,造模期間定期觀察各組大鼠生物學(xué)表征以及每只大鼠發(fā)情周期的變化,通過觀察生物學(xué)表征定量及定性指標(biāo)確認(rèn)慢性應(yīng)激模型成立后,將從慢性應(yīng)激模型組中成卵巢早衰者分為POF模型組(P組)、POF藥物干預(yù)高劑量組(PTH組)、中劑量組(PTM組)、低劑量組(PTL組);未成卵巢早衰者分為應(yīng)激模型組(S組)、應(yīng)激藥物干預(yù)高劑量組(STH組)、中劑量組(STM組)、低劑量組(STL組)。(1)采用ELISA法檢測外周血清AMH、C3、VEGF含量;采用UPLC-MS/MS檢測血漿中DA、5-HT、EP等神經(jīng)遞質(zhì)含量。(2)組織形態(tài)學(xué)變化:采用HE染色法觀察性腺軸(下丘腦-垂體-卵巢)病理學(xué)變化;通過透射電鏡觀察卵巢超微結(jié)構(gòu)的變化;采用Masson染色觀察并計算膠原纖維比例。(3)通過免疫組化技術(shù)檢測卵巢組織中C3及CYP51蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)生物學(xué)表征觀測:造模期間慢性應(yīng)激組大鼠活動量明顯減少,出現(xiàn)倦怠等情況。其體重及飲水量增加量顯著低于N組大鼠,進(jìn)食量、尿量及大便量增加量顯著高于N組大鼠(P0.05);藥物干預(yù)期間其定性及定量指標(biāo)得到改善。(2)P組、S組大鼠外周血清中AMH及VEGF含量較N組顯著下降(P0.05),C3含量較N組顯著上升(P0.05),通過不同劑量的藥物干預(yù)能夠使各組大鼠調(diào)節(jié)各激素含量。P組、S組大鼠血漿DA含量較N組大鼠顯著升高(P0.05),且PTH組與STH組能夠顯著降低對應(yīng)模型組含量(P0.05),P組、S組5-HT、EP含量升高,但較N組無差異(P0.05)。(3)組織形態(tài)學(xué)變化:通過HE染色發(fā)現(xiàn)P組、S組大鼠下丘腦間質(zhì)出現(xiàn)水腫,核固縮等情況,通過不同劑量的藥物干預(yù)能夠改善各組大鼠原有的病理變化;垂體:P組、S組間質(zhì)出現(xiàn)空泡樣改變,出現(xiàn)水腫,嗜堿性細(xì)胞增多,通過不同劑量的藥物干預(yù)能夠使各組大鼠原有的病理性改變得到改善;卵巢:P組、S組未見明顯有腔卵泡,空泡樣變化多,水腫嚴(yán)重,間質(zhì)腺增生且伴有纖維化,各藥物干預(yù)組能夠改善原有的病理性變化。卵巢電鏡結(jié)果顯示P組、S組出現(xiàn)細(xì)胞膜溶解,基質(zhì)溶解,細(xì)胞核溶解等病理現(xiàn)象;通過不同劑量的藥物干預(yù)能夠使各組大鼠原有的病理變化得到改善。Masson染色結(jié)果顯示P組及S組大鼠卵巢膠原纖維比例上升,與N組比較有顯著差異(P0.05),PTH組、PTM組及STH組能夠顯著降低對應(yīng)模型組膠原纖維比例(P0.05)。(4)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示C3蛋白在各組卵巢中主要在顆粒層細(xì)胞以及卵泡液表達(dá),P組、S組大鼠表達(dá)量較N組表達(dá)顯著升高(P0.05),各藥物干預(yù)組能夠降低其表達(dá);CYP51蛋白在各組卵巢中主要在間質(zhì)以及黃體表達(dá),P組、S組大鼠表達(dá)量較N組表達(dá)顯著下降(P0.05),各藥物干預(yù)組能夠降低其表達(dá)。結(jié)論:長期處于應(yīng)激狀態(tài)能夠在一定程度上導(dǎo)致POF的發(fā)生;其性腺軸的組織病理學(xué)改變,卵巢儲備功能的下降以及出現(xiàn)的內(nèi)分泌紊亂可能是其發(fā)病的重要機(jī)制之一;木尼孜其百尕木合劑能夠在一定程度上改善POF病變,其藥理作用機(jī)制可能與調(diào)整內(nèi)分泌紊亂及對性腺軸病理學(xué)改變的修復(fù)作用有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R-332;R711.75
【圖文】：

一般在數(shù)量上無明顯差別；發(fā)情間期（圖1d）：大部分為有核白細(xì)胞，體小，一般呈圓形，少部分為角化上皮細(xì)胞及有核上皮細(xì)胞，如圖 1 所示。a：發(fā)情前期； b：發(fā)情期； c：發(fā)情后期； d：發(fā)情間期圖 1 大鼠發(fā)情周期的變化（ 100）Figure 1 Changes of estrus cycle of rats （ 100）2 慢性應(yīng)激致 POF 大鼠模型的制作2.1 造模期間生物學(xué)表征的變化2.1.1 定性指標(biāo)N 組（正常組）大鼠出現(xiàn)活動頻繁，敏捷，有追逐玩耍現(xiàn)象；毛發(fā)順、有光澤，皮膚緊、不松弛，睡眠正常，出現(xiàn)爭水現(xiàn)象，尿量正常，色呈淡黃色，大便較模型組成形、較硬，舌苔鮮亮充滿血色。慢性應(yīng)激組（模型組）大鼠較 N 組大鼠活動量明顯減少，對刺激敏銳度降低，毛發(fā)變得粗糙，出現(xiàn)脫毛現(xiàn)象，皮膚變得松弛，此外，出現(xiàn)嗜睡現(xiàn)象，無精打采；飲水量明顯減少，爭水現(xiàn)象明顯減少甚至消失，尿量增多，色淡偏白，大便稀，不成形；舌苔呈白膩無光澤。2.1.2 定量指標(biāo)2.1.2.1 體重變化如表 5 及圖 2 所示，造模開始前，N 組大鼠與慢性應(yīng)激組大鼠體重之間無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），隨著造模的開始及時間的推移，慢性應(yīng)激組體重增長速度較 N組大鼠體重增長速度分別減少了 1.07%、1.88%、3.51%、3.79%、4.03%、4.87%；其中從第 20 周開始兩組大鼠體重差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；結(jié)果說明，造模后

注：a：N 組（ 8000）；b：P 組（ 10000）；c：S 組（ 10000）；d：PTH 組（ 6000）；e：PTM 組（ 6000）；f：PTL 組（ 8000）；g：STH 組（ 8000）；h：STM 組（ 8000）；i：STL 組（ 8000）圖 16 各組大鼠卵巢電鏡圖Figure 16 Ovarian sections of each group rats under EM6.3 卵巢 Masson 染色通過 Masson 染色觀察各組大鼠卵巢纖維化程度。如圖 17 所示膠原纖維呈藍(lán)色，N 組大鼠主要是卵泡膜以及血管上皮出現(xiàn)纖維化現(xiàn)象，而且膠原纖維較低；P 組大鼠不僅卵泡膜周圍出現(xiàn)高度纖維化，而且從黃體膜顆粒滲入到黃體顆粒細(xì)胞，膠原纖維高，出現(xiàn)大量纖維彌漫性增生；S 組大鼠間質(zhì)以及卵泡膜膠原纖維高，可見卵泡顆粒層細(xì)胞發(fā)生輕度纖維化； PTH 組大鼠黃體及間質(zhì)腺膠原纖維低，卵泡膜以及間質(zhì)中度纖維化；PTM 組卵泡顆粒層以及在間質(zhì)腺中依然存在纖維化現(xiàn)象，較 P 組大鼠其膠原纖維明顯降低；PTL 組黃體顆粒細(xì)胞以及卵泡顆粒層中存在大量纖維化，且膠原纖維從黃體中央開始向四周彌漫擴(kuò)散；STH 組間質(zhì)以及在血管上皮以及黃體邊緣發(fā)生輕度纖維化，較 S 組大鼠明顯降低；STM 組間質(zhì)及卵泡膜周圍膠原纖維較高，

【參考文獻(xiàn)】

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1 羅靜鶯;高莉;孫云鵬;彭曉明;索菲婭;;苦豆子總堿對大鼠神經(jīng)行為和單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響[J];中華行為醫(yī)學(xué)與腦科學(xué)雜志;2017年02期

2 李蘭榮;張迎春;姜朵生;李芳園;尹燕;;“張氏腹三針”治療卵巢早衰30例[J];河南中醫(yī);2015年04期

3 陳莞蘇;施艷秋;;卵巢早衰病因病機(jī)及中醫(yī)治療研究概況[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2014年12期

4 葉娜;董曉英;李冬華;;卵巢早衰的顆粒細(xì)胞凋亡機(jī)制研究進(jìn)展[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2014年03期

5 趙倩;葉宸;李文;;卵巢早衰的研究現(xiàn)狀與進(jìn)展[J];生殖與避孕;2014年01期

6 保蕓;張汝學(xué);賈正平;;逍遙散對慢性應(yīng)激下HPA軸的調(diào)節(jié)及作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年15期

7 胡穎;許良智;譚卓林;;左歸丸加減治療卵巢早衰的系統(tǒng)評價[J];中華中醫(yī)藥雜志;2013年08期

8 程建華;徐玉琴;劉春芬;馮婷婷;;魏紹斌治療卵巢早衰經(jīng)驗[J];河南中醫(yī);2013年04期

9 秦佳佳;李瑞滿;吳倩;;不同補(bǔ)腎方法減輕化療后卵巢功能損害的比較研究[J];中國病理生理雜志;2012年10期

10 李花;趙新廣;劉丹卓;;卵巢早衰病理因素研究現(xiàn)狀及展望[J];中醫(yī)藥導(dǎo)報;2012年08期

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1 謝輝蓉;促減數(shù)分裂甾醇對小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂的作用研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

本文編號：2715829