發(fā)布時(shí)間：2020-06-16 01:25

【摘要】：[目的]應(yīng)用在體的電生理記錄技術(shù)和神經(jīng)藥理學(xué)方法來(lái)研究促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)對(duì)感覺刺激誘發(fā)小鼠小腦皮層分子層場(chǎng)電位反應(yīng)的影響機(jī)制。[實(shí)驗(yàn)材料與方法]選取周齡約為6-8的昆明小鼠,測(cè)量其體重并按照1.3g/kg的劑量在小鼠腹腔行烏拉坦麻醉。為了避免實(shí)驗(yàn)中小鼠呼吸道堵塞,待角膜反射消失后進(jìn)行氣管插管。將小鼠放置在定制的立體定位儀上,經(jīng)一系列預(yù)處理后,小心的在小腦CrusⅡ區(qū)行鉆孔術(shù),直徑約1-1.5mm,確保不傷及腦組織,并去除表面顱骨。在顯微鏡下小心取出硬腦膜,并使用蠕動(dòng)泵將氧合的人造腦脊髓液(人造腦脊髓液,ACSF)連續(xù)滴注在暴露的腦表面。使用特殊的吹風(fēng)機(jī)將頭發(fā)(50-60毫秒,50-60磅/平方英寸)吹至同一胡須緩沖墊,作為由計(jì)算機(jī)刺激的三叉神經(jīng)感覺,以控制頭發(fā)刺激并同步電生理學(xué)記錄;電生理記錄選擇分子層場(chǎng)電位,用于記錄的電極填充ACSF20-30 μL,使其電極阻抗為4-6MΩ。使用膜片鉗放大器和數(shù)據(jù)軟件記錄分子層場(chǎng)電位的感覺刺激變化。數(shù)據(jù)分析使用Clampfit 10.3軟件進(jìn)行。使用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。使用T檢驗(yàn)配對(duì)測(cè)試來(lái)比較施用前后的平均值。P0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。[結(jié)果](1)在麻醉狀態(tài)下,小鼠觸角墊的毛發(fā)刺激引起小腦分子層的場(chǎng)電位反應(yīng),其表現(xiàn)為短負(fù)極性波(N1)后的大正極性波(P1);在腦表面灌流CRF(300 nM)后,小腦皮質(zhì)分子層抑制性成分P1的振幅和半寬值均顯著增加,與給藥前比較差異顯著(P0.05)。(2)腦表面灌流CRF影響P1的波形動(dòng)力學(xué),導(dǎo)致上升時(shí)間縮短,延遲時(shí)間增加,二者給藥前后比較均有顯著性差異(P0.05)。(3)CRF對(duì)吹風(fēng)刺激誘發(fā)小鼠小腦分子層場(chǎng)電位的抑制性成分P1振幅值的影響具有濃度依賴性。濃度-反應(yīng)曲線顯示隨著CRF濃度的增加,吹風(fēng)刺激引起的P1的振幅值的增加程度越明顯,引起感覺刺激變化的最小濃度是10 nM,最大濃度為1 μM,半數(shù)有效濃度(EC50)為234 nM。(4)在非選擇性CRF-R阻斷劑的存在下,CRF對(duì)對(duì)吹風(fēng)刺激誘發(fā)小鼠小腦分子層場(chǎng)電位的抑制性成分P1振幅值的影響消失,P1的振幅值和半寬值沒有升高,表明CRF通過活化CRF受體增加吹風(fēng)刺激誘發(fā)小鼠小腦分子層場(chǎng)電位P1的振幅和半寬值。(5)在CRF-R阻斷劑的存在下,腦表面灌流CRF對(duì)P1的波形動(dòng)力學(xué)沒有顯著影響,上升時(shí)間和延遲時(shí)間與給藥前比較均沒有顯著性差異。[結(jié)論]CRF通過活化CRF-R增強(qiáng)感覺刺激誘發(fā)的小鼠小腦皮層分子層場(chǎng)電位的抑制性成分P1,影響其波形動(dòng)力學(xué),提示應(yīng)激刺激可通過CRF受體作用于小腦皮層分子層神經(jīng)環(huán)路,影響外部信息的整合與傳遞。
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R338

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本文編號(hào)：2715303